原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周血中T細(xì)胞及NK細(xì)胞的水平變化和臨床意義探討*

張現(xiàn)莉

平邑縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 臨沂 273300

原發(fā)性肝癌在我國(guó)有很高的發(fā)病率，致病因素有肝組織受損、機(jī)體免疫機(jī)能失調(diào)等，很多研究表明，腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸及其反擊機(jī)制、正常肝細(xì)胞與免疫細(xì)胞作用機(jī)制異常均起著重要作用[1-2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)對(duì)于肝癌細(xì)胞具有非特異性殺傷效應(yīng)，而CD8+T細(xì)胞、輔助性和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞有可能通過(guò)影響NK細(xì)胞的自然殺傷作用可引起肝癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，從而導(dǎo)致肝癌組織的增殖、轉(zhuǎn)移[3-4]。本研究通過(guò)觀察28例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者、29例慢性肝硬化患者、31例健康成人外周靜脈血中T細(xì)胞及NK細(xì)胞的水平，探討T細(xì)胞、NK細(xì)胞水平與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2018年7月—2020年2月就診于平邑縣人民醫(yī)院的28例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者，男性15例，女性13歲；年齡57～71歲，平均(65.7±6.9)歲；所有患者均經(jīng)肝穿刺細(xì)胞學(xué)檢查及B超、MRI等確診[5]且未伴有明顯基礎(chǔ)疾病；半年內(nèi)未使用影響免疫功能的藥物。29例慢性肝硬化患者，男性17例，女性12歲；年齡54～73歲，平均(64.3±8.1)歲；無(wú)明顯基礎(chǔ)疾病。31例健康成年人，男性16例，女性15歲；年齡58～ 75歲，平均(67.4±5.8)歲。三組病例在性別、年齡等方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[Fisher精確概率法P性別=0.856(P>0.05)；F年齡=0.117，P年齡=0.926(P>0.05)]。

1.2 方法

三組病例分別采集200 μl肘靜脈外周血，隨即添加20 μl 對(duì)應(yīng)抗體，半小時(shí)后，1200 r/ min 下離心10 min，倒去上清液，輕柔洗滌至少3次后，采用全自動(dòng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，最后分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 三組患者外周血T細(xì)胞及NK細(xì)胞的水平比較情況

原發(fā)性肝癌患者外周靜脈血中，CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞水平明顯低于慢性肝硬化患者和健康成人，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)；CD8+T細(xì)胞水平明顯高于慢性肝硬化患者和健康成人，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不同肝癌分期患者外周血T細(xì)胞及NK細(xì)胞的水平比較

原發(fā)性肝癌患者外周靜脈血中，Ⅰ期、Ⅱ期患者CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T、NK細(xì)胞水平比較并無(wú)明顯差異(P>0.05)；Ⅲ期患者CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞水平明顯低于Ⅰ期、Ⅱ期患者，CD8+T細(xì)胞水平明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。見表2。

表2 不同肝癌分期患者外周血T細(xì)胞及NK細(xì)胞的水平比較

3 討 論

T細(xì)胞和NK細(xì)胞參與人體的免疫過(guò)程，機(jī)體的免疫機(jī)能失調(diào)、淋巴因子的平衡紊亂，很可能與原發(fā)性肝癌及肝硬化有關(guān)[6-7]。在體外，NK細(xì)胞可以高效地殺傷腫瘤細(xì)胞及其他有害物質(zhì)，但其在體內(nèi)卻未能實(shí)現(xiàn)有效的抗腫瘤作用；一般而言，腫瘤組織內(nèi)的NK細(xì)胞可通過(guò)外源性和內(nèi)源性兩種方式實(shí)現(xiàn)，但很多腫瘤并不是只有一種細(xì)胞浸潤(rùn)方式，所以更好地研究NK細(xì)胞如何介導(dǎo)殺傷肝癌細(xì)胞，才能在細(xì)胞免疫水平抑制腫瘤組織。T細(xì)胞也在腫瘤免疫中有重要作用，CD4+與 CD25+屬于調(diào)節(jié)性T小細(xì)胞，雖然在外周靜脈血的T細(xì)胞中占很小比例，但其對(duì)于調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞進(jìn)行免疫逃逸起重要作用[8-9]。

原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)CD4+、 CD8+的水平明顯降低，原因可能在于患者由于自身免疫功能受破壞，IL-2介導(dǎo)的T細(xì)胞亞群數(shù)量不足或免疫功能存在缺陷；IL- 2與T細(xì)胞的相互影響形成惡性循環(huán)，加重了免疫功能降低[7]。本研究中，原發(fā)性肝癌患者CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞水平低于慢性肝硬化患者及健康成人，CD8+T細(xì)胞水平則顯著升高，在一定程度上證實(shí)了肝癌患者機(jī)體的免疫水平有明顯的降低，抗腫瘤能力顯著下降。肝癌Ⅰ期、Ⅱ期患者與Ⅲ期患者各項(xiàng)指標(biāo)的關(guān)系與上述相似，提示肝癌發(fā)展水平與機(jī)體免疫功能有顯著相關(guān)性；另外，肝癌有可能直接或間接影響了T細(xì)胞的數(shù)量或者功能，T細(xì)胞免疫功能的不足可能加速腫瘤細(xì)胞增殖，而腫瘤細(xì)胞的過(guò)分增殖又可能抑制T細(xì)胞功能，致患者免疫耐受差，機(jī)體對(duì)病毒的清除能力降低，是引起疾病遷延的主要原因[10]。

自然殺傷細(xì)胞(NK)細(xì)胞與T細(xì)胞和B細(xì)胞不同，屬于天然的具有直接消滅靶細(xì)胞功能的淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞具有較好的細(xì)胞毒性和腫瘤細(xì)胞殺傷能力, 可以攻擊腫瘤, 并可以攻擊被感染的細(xì)胞。研究指出，NK細(xì)胞在正常機(jī)體內(nèi)發(fā)揮著抑制腫瘤增殖、調(diào)節(jié)免疫、抗炎等作用；對(duì)于原發(fā)性肝癌患者，T細(xì)胞受損后形成的CD4+、CD25+可明顯抑制NK細(xì)胞消滅靶細(xì)胞的能力[11-12]。對(duì)于慢性肝硬化患者，外周血中NK細(xì)胞殺傷功能的降低可影響原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生，而這也可能介導(dǎo)早期癌細(xì)胞進(jìn)行浸潤(rùn)性生長(zhǎng)[13-14]。本研究中，原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周血中NK細(xì)胞水平明顯降低，說(shuō)明NK細(xì)胞與肝癌細(xì)胞存在一定聯(lián)系；肝癌的發(fā)生可能是因?yàn)镹K細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)能嚴(yán)重受損[15]。

原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周靜脈血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞水平降低，可能與腫瘤的發(fā)生存在密切聯(lián)系，對(duì)于如何通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)而抑制腫瘤增殖，尚需臨床進(jìn)一步研究。