非手性-手性色譜-預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)法分析中藥毛前胡的化學(xué)成分

許 霞, 李 婷, 賈金茹, 湯慧婷, 李 軍, 趙云芳, 宋月林

(北京中醫(yī)藥大學(xué), 中藥學(xué)院中藥現(xiàn)代研究中心, 北京 100029)

中藥毛前胡(Ligustici Radix)為傘形科植物短片藁本(LigusticumbrachylobumFranch.)的干燥根,其性溫,味甘、辛,入肝、脾、膀胱三經(jīng),主要用于治療風(fēng)熱咳嗽痰多、痰熱喘滿、咯痰黃稠等證[1]。毛前胡植物形狀、功能主治與中藥前胡(Peucedani Radix)均相似,常被用作前胡的替代品,但因其根莖部密布較為堅(jiān)硬的殘存葉鞘纖維,難以除凈,故藥材稱為毛前胡。國(guó)內(nèi)外對(duì)其化學(xué)成分研究較少,制約了毛前胡的深度開(kāi)發(fā)。因此,本研究對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行深入闡明,以期為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù),同時(shí)也為其他傘形科中藥中香豆素類(lèi)成分分析提供借鑒。利用課題組前期[2-4]建立的中心切割非手性-手性二維液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)(heart-cutting achiral-chiral 2D LC-MS/MS)以及直接進(jìn)樣-三維質(zhì)譜法(DI-3D MS)對(duì)前胡和毛前胡的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的對(duì)比分析,通過(guò)比較各信號(hào)峰的多級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)和保留時(shí)間,發(fā)現(xiàn)毛前胡的主要化學(xué)成分與前胡類(lèi)似,均以順式角型吡喃香豆素(即為順式凱琳內(nèi)酯衍生物)為主,且含有多組對(duì)映異構(gòu)體。對(duì)前胡而言,多對(duì)對(duì)映異構(gòu)體之間的含量差異性大,表現(xiàn)為對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量的現(xiàn)象[5],并且對(duì)映異構(gòu)體間往往呈現(xiàn)出藥理活性[6]和代謝[7]差異。我們推測(cè)毛前胡中的這些對(duì)映異構(gòu)體也并非以外消旋體的形式存在,而是其中一種構(gòu)型含量較高,通常稱為優(yōu)映體。因此,在對(duì)中藥毛前胡進(jìn)行化學(xué)成分深入分析時(shí),應(yīng)對(duì)其對(duì)映異構(gòu)體進(jìn)行立體選擇性分離,明確對(duì)映體之間的含量比例,從而更好地實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制。

近年來(lái),一些新興的色譜填料技術(shù)例如核-殼顆粒[8]、亞微米顆粒[9,10]和整體柱[11,12],使得LC的分離能力得到了顯著提高,尤其是核-殼色譜柱因其具有更高的柱效、更低的反壓以及更高的分析效率,為中藥中結(jié)構(gòu)類(lèi)似物和非對(duì)映異構(gòu)體的化學(xué)選擇性分離提供了保障。手性色譜柱快速發(fā)展,多種涂敷型、鍵合型手性色譜填料[13]的不斷涌現(xiàn)使得絕大多數(shù)對(duì)映異構(gòu)體都可以實(shí)現(xiàn)立體選擇性分離。然而,手性色譜柱往往具有較差的化學(xué)選擇性分離能力[13],而RP-C18色譜柱雖然具有高效的化學(xué)選擇性分離能力,但無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)映異構(gòu)體的手性分離。

本研究將反相非手性色譜柱和手性色譜柱通過(guò)聚醚醚酮管線在線連接,該系統(tǒng)結(jié)合了RP-C18色譜柱的高效化學(xué)選擇性分離能力和手性色譜柱的立體選擇性優(yōu)勢(shì),有效避免中心切割非手性-手性二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的缺點(diǎn),以期同步實(shí)現(xiàn)中藥毛前胡化學(xué)成分的化學(xué)選擇性和立體選擇性分離。同時(shí),充分利用類(lèi)似中藥(如前胡等)化學(xué)成分研究成果[2],進(jìn)而采用三重四極桿質(zhì)譜特有的預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(predictive MRM)模式[14-16]實(shí)現(xiàn)化學(xué)成分的高靈敏度、高選擇性分析。利用該系統(tǒng)從中藥毛前胡中鑒定了其中60個(gè)化學(xué)成分,包括4個(gè)氨基酸類(lèi)(AAs)、43個(gè)角型吡喃香豆素類(lèi)(APs)、10個(gè)線型呋喃香豆素類(lèi)(LFs)、2個(gè)線型吡喃香豆素類(lèi)(LPs)以及1個(gè)簡(jiǎn)單香豆素類(lèi)(SC)化合物。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

U-3000雙三元色譜儀,配備兩個(gè)三元泵(即左泵和右泵)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和紫外檢測(cè)器(美國(guó)Thermo Fisher公司); SCIEX 5500 Qtrap質(zhì)譜儀(美國(guó)Sciex公司); Milli-Q超純水凈化系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司); Mettler ME204型電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司);超聲波清洗器(南京壘君達(dá)超聲電子設(shè)備有限公司); Premixer Assy混合器(日本Shimadzu公司)。

色譜級(jí)和質(zhì)譜級(jí)甲醇、乙腈以及質(zhì)譜級(jí)甲酸均購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司;實(shí)驗(yàn)用水由Milli-Q純水系統(tǒng)制備;其余試劑均為分析純,由北京化工廠提供。中藥毛前胡購(gòu)于北京同仁堂,經(jīng)北京大學(xué)屠鵬飛教授鑒定為傘形科植物短片藁本LigusticumbrachylobumFranch.的干燥根。標(biāo)本存放于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥現(xiàn)代研究中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1樣品前處理

取干燥的毛前胡藥材,粉碎機(jī)粉碎,過(guò)20目篩。精密稱取1.0 g粉末樣品,置具塞錐形瓶中,加入70%(v/v)甲醇水溶液50.0 mL,密塞,超聲提取30 min,放冷再次稱重,用70%(v/v)甲醇水溶液補(bǔ)足失重,以12 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min,取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液500 μL,待測(cè)。

圖 1 非手性-手性液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)構(gòu)建示意圖Fig. 1 Connectivity sketch of achiral-chiral LC-MS/MS platform Solvent A: 0.1% formic acid aqueous solution; solvent B: acetonitrile.

1.2.2液相色譜條件

Achiral-chiral LC-MS/MS系統(tǒng)各模塊連接示意圖如圖1所示。使用聚醚醚酮管將非手性柱和手性柱在線連接,利用Premixer Assy混合器將非手性柱洗脫液與左泵流動(dòng)相充分混合。非手性色譜柱:Capcell core RP-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm, 2.7 μm,日本Shiseido公司);手性色譜柱:AD-RH色譜柱(150×4.6 mm, 5.0 μm,日本Daicel公司)。右泵輸送溶劑A(0.1%(v/v)甲酸水溶液)和溶劑B(乙腈),梯度洗脫程序?yàn)?0～4.0 min, 10%B; 4.0～15.0 min, 10%B～25%B; 15.0～23.0 min, 25%B～50%B; 23.0～28.0 min, 50%B～57%B; 28.0～34.0 min, 57%B～67%B; 34.0～44.0 min, 67%B～68%B; 44.0～56.0 min, 68%B; 56.0～60.0 min, 68%B～95%B; 60.0～60.1 min, 95%B～10%B; 60.1～66.0 min, 10%B;總流速為0.3 mL/min。左泵輸送溶劑A和溶劑B,梯度洗脫程序?yàn)?0～4.0 min, 95%B～86%B; 4.0～15.0 min, 86%B～70%B; 15.0～23.0 min, 70%B～50%B; 23.0～28.0 min, 50%B～47%B; 28.0～34.0 min, 47%B～43%B; 34.0～44.0 min, 43%B～42%B; 44.0～56.0 min, 42%B; 56.0～60.0 min, 42%B～21%B; 60.0～60.1 min, 21%B～95%B; 60.1～66.0 min, 95%B;總流速為0.7 mL/min。進(jìn)樣體積為3 μL,色譜柱均置于35 ℃柱溫箱中。

1.2.3質(zhì)譜條件

手性色譜柱洗脫液直接導(dǎo)入三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行分析。電噴霧電離(ESI)源,正離子模式,預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)各化學(xué)成分。電噴霧電壓:5 500 V;離子化溫度:550 ℃;霧化氣壓力(GS1): 379.2 kPa;輔助氣壓力(GS2): 379.2 kPa;氣簾氣壓力(CUR): 241.3 kPa。Q1和Q3均為單位分辨率(0.6～0.8 Da)。預(yù)測(cè)離子對(duì)(Q1>Q3)及相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)(脫簇電壓(DP)和碰撞能(CE))如表1所示,每個(gè)離子對(duì)的采集時(shí)間(dwell time)為10 ms。

由于對(duì)映異構(gòu)體質(zhì)譜行為完全一致,因此本研究對(duì)于每個(gè)化合物均采用兩對(duì)離子對(duì)進(jìn)行檢測(cè),并利用定量和定性離子對(duì)豐度比值(QQR)判定兩個(gè)色譜信號(hào)是否為對(duì)映異構(gòu)體[23,24]。利用數(shù)據(jù)依賴性采集模式觸發(fā)增強(qiáng)子離子掃描(EPI)模式記錄各母離子的MS2圖譜。EPI實(shí)驗(yàn)參數(shù)為:CE, 40 eV;碰撞能量分散(CES), 35 eV。利用Analyst 1.6.2軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相條件的優(yōu)化

課題組前期在建立反相色譜和親水作用色譜直接耦聯(lián)系統(tǒng)[25,26]時(shí)發(fā)現(xiàn),通過(guò)選擇內(nèi)徑小、柱效高的反相色譜柱作為前端色譜柱可以達(dá)到較好的分離效果。本實(shí)驗(yàn)篩選并考察了多個(gè)候選色譜柱,如ACE UltraCore 2.5 Super C18(150 mm×2.1 mm, 2.5 μm,英國(guó)Advance Chromatography Technologies公司)、Waters Acquity UPLC HSS T3 (100 mm×2.1 mm, 1.8 μm,美國(guó)Waters公司)、Ascentis?Express F5 (150 mm×3.0 mm, 2.7 μm,美國(guó)Sigma-Aldrich公司)、Capcell core RP-C18(150 mm×2.1 mm, 2.7 μm,日本Shiseido公司)等多款核殼型或新型填料高效色譜柱,以色譜峰形、分離度作為指標(biāo)衡量色譜柱的分離效能,最終選擇Capcell core RP-C18色譜柱作為前端化學(xué)選擇性分離柱。

進(jìn)一步優(yōu)化非手性柱流動(dòng)相流速(0.15、0.20、0.30和0.35 mL/min)和手性柱流動(dòng)相流速(0.60、0.70和0.80 mL/min)、流動(dòng)相的洗脫程序以及在水中加入甲酸的體積分?jǐn)?shù)(0%、0.05%、0.10%和0.15%)。最終選定0.1%甲酸作為水相的添加劑；非手性柱和手性柱的流速分別為0.3 mL/min和0.7 mL/min；具體洗脫程序見(jiàn)1.2.2節(jié)。

前期研究表明,AD-RH色譜柱[3,7,27]對(duì)APs對(duì)映異構(gòu)體有較好的分離效果,其反相分離機(jī)制與前端色譜柱能夠很好地兼容。在APs中,C-3′和C-4′取代基團(tuán)的大小會(huì)影響對(duì)映異構(gòu)體的分離效能,且取代基團(tuán)越大,分離效果越差,需要采用較低比例的有機(jī)相和較長(zhǎng)的洗脫時(shí)間才能達(dá)到較好的分離。因此,在洗脫過(guò)程中逐步降低流動(dòng)相的比例,且在RP-C18和AD-RH色譜柱之間引入稀釋泵,可以對(duì)含有大取代基團(tuán)的對(duì)映異構(gòu)體實(shí)現(xiàn)良好的色譜分離。對(duì)映異構(gòu)體在AD-RH手性色譜柱上的流出順序決定于手性中心與表面涂敷有直鏈淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠之間的作用力[28]。課題組前期研究[3]發(fā)現(xiàn),(3′S,4′S)構(gòu)型的對(duì)映異構(gòu)體與固定相的作用力小于其(3′R,4′R)對(duì)映異構(gòu)體,其被率先洗脫出來(lái)。因此,毛前胡中具有較小保留時(shí)間的對(duì)映異構(gòu)體構(gòu)型被認(rèn)為是(3′S,4′S)構(gòu)型,為了表述方便,以下簡(jiǎn)稱為3′S構(gòu)型。

2.2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式的條件優(yōu)化

結(jié)合已經(jīng)報(bào)道[29]的質(zhì)譜裂解規(guī)律及MRM離子對(duì)信息,筆者首先對(duì)預(yù)測(cè)離子對(duì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行驗(yàn)證,進(jìn)而采用預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)各化學(xué)成分,并利用EPI模式獲取化合物的二級(jí)質(zhì)譜信息,結(jié)合碎片離子對(duì)化合物進(jìn)行鑒定。前期研究[2]表明,毛前胡中所含的化學(xué)成分與前胡相似,不同成分的含量差異大,其中含量較高的APs可能會(huì)影響微量化合物的檢出。因此,本實(shí)驗(yàn)引入在線能量分辨質(zhì)譜法[30,31]對(duì)各化合物的碰撞能進(jìn)行優(yōu)化,采用非最優(yōu)碰撞能抑制高含量成分的質(zhì)譜響應(yīng),從而實(shí)現(xiàn)所有化合物的檢出。

2.3 對(duì)映體異構(gòu)體判別

實(shí)驗(yàn)通過(guò)QQR判定是否為對(duì)映異構(gòu)體[23,24],結(jié)合對(duì)映異構(gòu)體在achiral-chiral LC系統(tǒng)上的保留時(shí)間大于在單柱RP-C18色譜柱上的保留時(shí)間,經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)順式-凱琳內(nèi)酯(CKL, 7和8(表1中化合物的順序編號(hào)))、前胡香豆素G(QC-G, 10和11)、順式-北美芹素(Pte, 35和43)、白花前胡甲素(PA, 37和44)、順式-3′-異戊酰-4′-乙酰凱琳內(nèi)酯(IAK, 42和46)、白花前胡乙素(PB, 52和54)、白花前胡素E (PE, 55和56)和順式-3′,4′-雙異戊酰凱琳內(nèi)酯(DIK, 57和58)共計(jì)8對(duì)對(duì)映異構(gòu)體,所有對(duì)映異構(gòu)體在非手性-手性色譜耦聯(lián)系統(tǒng)上均能較好地手性分離(見(jiàn)圖2),除前胡香豆素G為L(zhǎng)Fs外,其余均為APs。如化合物順式-北美芹素(35和43)為CKL的衍生物,在角型吡喃香豆素母核的C-3′和C-4′分別為乙?；彤?dāng)歸酰基取代,分子式為C21H22O7,預(yù)測(cè)離子對(duì)包括m/z409.12>327.12、409.12>287.09、409.12>245.07、409.12>227.07,利用數(shù)據(jù)依賴性采集模式觸發(fā)EPI,獲取母離子的二級(jí)質(zhì)譜信息,驗(yàn)證化合物的結(jié)構(gòu)。選擇m/z409.12>227.07和409.12>245.07作為定量離子對(duì)和定性離子對(duì),化合物L(fēng)-Pte和D-Pte的QQR均為2.36,根據(jù)兩者的保留時(shí)間,鑒定L-Pte和D-Pte分別為3′S和3′R構(gòu)型。化合物順式-北美芹素的疊加選擇離子流圖和二級(jí)質(zhì)譜圖如圖3a和3b所示。

表 1 中藥毛前胡化學(xué)成分在非手性-手性色譜-預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)上的質(zhì)譜信息

表 1 (續(xù))

圖 2 采用(a)非手性色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和(b)非手性-手性色譜-串聯(lián)質(zhì)譜時(shí)毛前胡的選擇離子流色譜圖Fig. 2 Extracted ion current chromatograms of Ligustici Radix using (a) achiral LC-MS/MS and (b) achiral-chiral LC-MS/MSPeaks 1-60 are the same as that in Table 1.

圖 3 順式-北美芹素的(a)疊加選擇離子流色譜圖和(b)二級(jí)質(zhì)譜圖Fig. 3 (a) Overlaid extracted ion current chromatograms and (b) MS2 spectrum of pteryxin

2.4 毛前胡結(jié)構(gòu)鑒定及質(zhì)譜裂解規(guī)律

2.4.1化學(xué)成分定性分析

圖 4 白花前胡甲素的(a)質(zhì)譜圖和(b)可能的裂解途徑Fig. 4 (a) MS spectrum and (b) proposed fragmentation pathways of PA

利用建立的非手性-手性色譜-預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)采集毛前胡在正離子模式下的質(zhì)譜信息,結(jié)合碎片離子信息、文獻(xiàn)對(duì)比、數(shù)據(jù)庫(kù)搜索以及質(zhì)譜裂解規(guī)律推導(dǎo),對(duì)所有響應(yīng)值大于1 000 cps,且信噪比(S/N)大于100的信號(hào)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn),初步鑒定了其中60個(gè)化學(xué)成分,包括4個(gè)AAs、43個(gè)APs、10個(gè)LFs、2個(gè)LPs以及1個(gè)SC化合物。各化合物的保留時(shí)間、主要碎片離子、預(yù)測(cè)離子對(duì)以及可能的化學(xué)成分見(jiàn)表1。

在正離子模式下,香豆素類(lèi)化合物易產(chǎn)生準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+或加合離子峰[M+Na]+及[M+NH4]+。APs主要為順式凱琳內(nèi)酯的衍生物,大部分APs通過(guò)C-3′和C-4′的羥基結(jié)合不同的取代基形成不同的化合物,常見(jiàn)的取代基有乙?；?dāng)歸?；投辊；⑶Ю锕怩；⒄□；?、異戊酰基等。對(duì)于LFs來(lái)說(shuō),主要通過(guò)C-5和C-8或C-3′和C-4′上取代基的不同,形成不同的化合物,如異戊烷氧基、甲氧基、糖基等。以下對(duì)毛前胡中的主要化學(xué)類(lèi)型的質(zhì)譜裂解規(guī)律以及各化學(xué)成分的鑒定過(guò)程進(jìn)行分述。

2.4.2角型吡喃香豆素類(lèi)

從毛前胡提取物中共鑒定出43個(gè)APs成分,大部分為順式凱琳內(nèi)酯的衍生物。對(duì)于APs來(lái)說(shuō),C-4′取代基處于香豆素母核的芐位,可與香豆素母核形成大的共軛體系,得到更穩(wěn)定的子離子。通過(guò)丟失C-3′和C-4′位的取代基,形成m/z245.07特征性碎片離子,并進(jìn)一步通過(guò)中性丟失水分子形成另一個(gè)m/z227.07特征性碎片離子。例如,PA在C-3′和C-4′位置分別有一個(gè)當(dāng)歸?；鸵阴Ｑ趸〈?分子式為C21H22O7,最顯著的準(zhǔn)分子離子峰為m/z409.12 [M+Na]+?；衔锪呀鈺r(shí),首先從C-4′中性丟失一分子乙酰氧基(60 Da),形成豐度最高的碎片離子m/z327.12 [M+H-CH3COONa]+、進(jìn)而丟失C-3′取代基(C4H6CO, 82 Da),形成特征碎片離子m/z245.08 [M+H-CH3COOH-C4H6-CO]+,隨后進(jìn)一步中性丟失一分子水,最終形成m/z227.07 [M+H-CH3COOH-C4H7COOH]+的特征碎片離子。PA的質(zhì)譜圖和可能的裂解途徑如圖4所示。

2.4.3線型呋喃香豆素類(lèi)

除APs外,毛前胡中還含有少量的LFs化學(xué)成分,其中包括一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體QC-G (10和11)。質(zhì)譜裂解規(guī)律主要由C-5、C-8或C-3′、C-4′取代基的不同而產(chǎn)生,常見(jiàn)的取代基有異戊烷氧基、甲氧基、羥基、糖基等。

C-5或C-8取代基首先通過(guò)中性丟失形成m/z203.05碎片離子,隨后進(jìn)一步中性丟失CO (28 Da)和CO2(44 Da),分別產(chǎn)生m/z175.04和159.03的特征性碎片離子[21]。C-3′或C-4′取代的化合物,通過(guò)中性丟失C-3′或C-4′上的取代基,形成m/z247.08和229.20的特征性碎片離子[19]。如紫花前胡苷,準(zhǔn)分子離子峰m/z409.08 [M+H]+,分子式為C20H24O9, C-3′有葡萄糖基取代,中性丟失一分子葡萄糖殘基,產(chǎn)生m/z247.08 [M+H-C6H10O5]+的碎片離子,隨后,進(jìn)一步丟失一分子水,形成m/z229.20 [M+H-C6H10O5-H2O]+的特征性離子。紫花前胡苷質(zhì)譜圖和可能的裂解途徑如圖5所示。

圖 5 紫花前胡苷的(a)質(zhì)譜圖和(b)可能的裂解途徑Fig. 5 (a) MS spectrum and (b) proposed fragmentation pathways of nodakenin

2.5 非手性-手性色譜-預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)法優(yōu)缺點(diǎn)

非手性-手性色譜耦聯(lián)系統(tǒng)結(jié)合了RP-C18的高效分離能力以及手性色譜柱的立體選擇性優(yōu)勢(shì),可以同步實(shí)現(xiàn)化合物的化學(xué)選擇性和立體選擇性分離。相比較于中心切割非手性-手性二維液相色譜而言,非手性-手性色譜耦聯(lián)系統(tǒng)具有儀器配置簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、精密度高的優(yōu)點(diǎn)。然而,該系統(tǒng)也存在一定的缺點(diǎn),如分離機(jī)制復(fù)雜,因?yàn)槊總€(gè)化合物都要經(jīng)歷2個(gè)色譜柱;尋找最佳的洗脫條件是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù),因?yàn)檩斔腿軇┳钌傩枰?個(gè)泵;二維色譜柱的要求高,要兼顧一維色譜柱的洗脫能力等。

3 結(jié)論

中藥中廣泛存在對(duì)映異構(gòu)體,這些對(duì)映異構(gòu)體往往具有不同的生物活性,從而發(fā)揮不同的治療效果。全面闡明中藥的化學(xué)成分組成,深入揭示對(duì)映異構(gòu)體的含量差別將會(huì)使藥物更好地發(fā)揮藥理活性。本研究建立了非手性-手性色譜-預(yù)測(cè)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)法,實(shí)現(xiàn)了中藥毛前胡的化學(xué)成分解析,揭示了其對(duì)映異構(gòu)體的含量差異。本研究將為含有對(duì)映異構(gòu)體的中藥及其他復(fù)雜樣品的深入定性、定量分析提供可靠的方法。