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    氯化鈉濃度對鱸鯉精子活力的影響

    2021-04-29 06:57:36譚中林鄧思紅陳修松徐大勇何學福
    漁業(yè)研究 2021年2期
    關(guān)鍵詞:滲透壓氯化鈉精液

    譚中林,鄧思紅,陳修松,徐大勇,何學福

    (1.涼山科華水生態(tài)工程有限公司,四川 西昌 615013;2.喜德正源水產(chǎn)有限公司,四川 西昌 615013;3.西昌學院動物科學學院,四川 西昌 615013;4.西南大學生命科學學院,重慶 400000)

    鱸鯉(Percocyprispingi)屬于鯉形目、鯉科、鲃亞科、鱸鯉屬,又名花魚、青脖、花鯉,在四川境內(nèi)僅有一種,主要分布于四川的岷江、青衣江、馬邊河(岷江支流)、金沙江下段、雅礱江、烏江等水系,是四川省珍貴的魚類之一,也是四川省重點保護的魚類之一。鱸鯉個體較大,體質(zhì)量一般為1~3 kg,野外漁獲中最大個體質(zhì)量達到16.5 kg。鱸鯉為肉食性兇猛魚類,魚肉口感鮮美,營養(yǎng)豐富,又有很高的藥用價值和保健作用,為上等優(yōu)質(zhì)食用魚,具有很高的經(jīng)濟價值。

    近幾十年來,隨著長江上游新一輪水電大開發(fā)和水利樞紐工程的修建,鱸鯉的產(chǎn)卵場不復(fù)存在,其索餌場也遭到了極大的破壞,再加之其生態(tài)環(huán)境的日益惡化以及人為的過度捕撈等因素,鱸鯉的資源量急劇下降,瀕臨絕滅。目前,該種魚的人工繁殖與增養(yǎng)殖已引起重視,國內(nèi)學者們已對其某些生物學特性以及養(yǎng)殖技術(shù)方面做了大量的工作[1-24],但關(guān)于鱸鯉的精子生理特性未見報道,而研究這種魚的精子生物學和了解其精子壽命,在理論與生產(chǎn)上均具有一定的意義。為此,本文就氯化鈉溶液對精子活力的影響做了初步觀察,旨在了解在不同的滲透壓條件下鱸鯉精子的生理特性,積累鱸鯉精子的生物學資料。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    2012年4月6日,精液取自江河幼魚經(jīng)涼山州喜德正源水產(chǎn)有限公司內(nèi)塘養(yǎng)殖的成熟健康的鱸鯉親魚。選取繁殖季節(jié)體格健壯、外無損傷、輕擠腹部精液自動流出的成熟雄魚,魚體質(zhì)量2.0~6.0 kg,體長460~550 mm。

    1.2 方法

    1.2.1 溶液配制

    用氯化鈉加蒸餾水配制不同百分比濃度的溶液:0%(蒸餾水)、0.10%、0.20%、0.30%、0.35%、0.40%、0.45%、0.50%、0.55%、0.60%、0.65%、0.70%、0.90%。溶液水溫為18.0℃,pH 6.5~7.5。

    1.2.2 精液采集

    每次取材前先用干布將其生殖孔周圍擦干,輕擠魚腹兩側(cè),精液盛于小培養(yǎng)皿中,加蓋待檢。要求采集的精液無水、無尿、無血。

    1.2.3 精子觀察

    采用平板載片法,用吸管滴一滴氯化鈉溶液在平板載片上,調(diào)節(jié)好顯微鏡。然后用解剖針尖蘸取少許精液與氯化鈉溶液調(diào)勻,立即移至10×10倍顯微鏡下觀察記錄其精子活動情況。以精液與溶液接觸的瞬間開始啟動秒表來計錄精子活動的時間,室溫為16.4~19.4℃,每個濃度組重復(fù)6次。

    1.2.4 精子群體運動階段的劃分

    精子群體運動階段的劃分參照吳景貴[25]的方法。根據(jù)鱸鯉精子在水中的運動狀態(tài),可以分為激烈運動、緩慢運動、搖尾運動三個連續(xù)的階段。這三個階段時間的總和即為精子的壽命。各階段的具體劃分標準如下:

    1)激烈運動:自精液與溶液相遇的瞬間開始,在10×10倍鏡面下只見到翻動的黑點,看不清精子的形態(tài)和運動路線。

    2)緩慢運動:精子向前運動,速度較慢,能分清其運動路線。

    3)搖尾運動:精子失去前進運動能力,只能在原地做微弱搖尾擺動,直到停止運動而死亡。

    以視野中約70%精子由前一運動階段轉(zhuǎn)為后一運動階段時,即認為該批精子前一運動階段的終結(jié)和后一運動階段的開始。搖尾運動階段的終了,精子運動停止,即90%以上精子都停止活動而死亡。

    1.2.5 數(shù)據(jù)分析

    試驗數(shù)據(jù)處理分析采用Excel和SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。

    2 結(jié)果與分析

    不同濃度氯化鈉溶液中鱸鯉精子各階段的持續(xù)時間不同,具體詳見表1。

    表1 鱸鯉精子在不同濃度氯化鈉溶液中各個階段的持續(xù)時間

    續(xù)表1

    當氯化鈉溶液濃度為0%~0.35%時,鱸鯉精子壽命隨氯化鈉溶液濃度升高而相對延長。在濃度為0.35%時激烈運動時間和精子壽命最長,分別為(66.33±7.99)s、(635.66±95.78)s。在氯化鈉溶液濃度超過0.35%后,精子的活動強度減弱,存活時間縮短。當氯化鈉溶液濃度達0.70%時,精子活動受到嚴重抑制,觀察不到被激活的精子。由此可見,氯化鈉溶液對鱸鯉精子活力具有影響。

    統(tǒng)計學分析顯示,當氯化鈉溶液濃度為0.35%時,鱸鯉精子的激烈運動時間僅顯著高于0.60%組和0.65%組(P<0.05),而與其余各組之間差異不顯著(P>0.05);當氯化鈉溶液濃度為0.35%時,鱸鯉精子的壽命極顯著高于其他處理組(P<0.01);當氯化鈉濃度為0.40%時,鱸鯉精子的壽命極顯著高于除0.35%處理組外的其余處理組(P<0.01)。

    3 討論

    滲透壓是影響魚類精子激活和活力的眾多因素中最關(guān)鍵的影響因子[26-27]。一般認為淡水魚類精子的激活是由低滲環(huán)境所致,并且存在精子活動時間最長的最適滲透壓[28-29]。體外受精的魚類精子儲存的能量有限,一旦被激活,一般只有幾十秒至幾分鐘就被消耗完。這種精子的短暫運動與精子新陳代謝、細胞的興奮性和滲透壓的調(diào)節(jié)有關(guān)[30]。鱸鯉精子同其他魚類的精子一樣,在精巢中是不活動的,一旦與適合精子活動的溶液接觸就會被激活而開始激烈運動,其最具有受精意義的時相是激烈運動階段。隨著本身能源物質(zhì)的消耗,運動速度逐漸轉(zhuǎn)慢,最后完全失去運動能力,細胞隨之死亡、分解。

    對于生物來說,決定體液濃度的主要物質(zhì)是鹽分。換句話說,體液的滲透壓比較高就是指體液里鹽分的濃度比較高。通常淡水中的滲透壓非常低,這是因為水中基本沒有溶入鹽分,所以淡水魚類體液的鹽分濃度一般比外界水環(huán)境要高些,系高滲性溶液,而淡水本身則接近于零。當鱸鯉的精子接觸淡水后勢必消耗大量的能量來抵抗外界水的滲入,這就加快了其精子的死亡。在淡水中添加氯化鈉,則可以提高溶液的滲透壓,使其盡可能接近鱸鯉精子本身的滲透壓,進而延長精子壽命,提高受精率。從上述分析比較可以得出:當氯化鈉溶液濃度為0.35%時,鱸鯉精子激烈運動時間和壽命最長,因而在生產(chǎn)實踐中配制鱸鯉精子激活劑時,0.35%氯化鈉溶液可作為參考值,以延長精子活力,保持精子的激烈運動狀態(tài)。同時,當氯化鈉溶液濃度為0.35%時,鱸鯉精子激烈運動時間雖然最長,但除與0.60%和0.65%差異顯著外,和其他處理組均差異均不顯著,參考鄧岳松等關(guān)于魚類精子活力的研究進展,體外受精魚類的精子活力不僅與自身質(zhì)量有關(guān),還受到pH、滲透壓、溫度及離子等因子的調(diào)節(jié)和影響[31],究竟哪種因子能夠顯著影響鱸鯉精子活力尤其是激烈運動狀態(tài),有待進一步研究。Morisawa等[32]在研究鯉(Cyprinuscarpio)、鯽(Carassiusauratus)、歐鯽(Carassiuscarassius)和兩種雅羅魚(Leuciscus)精子活動中指出,鯉科魚類精子在與其精漿等滲的電解質(zhì)(NaCl或KCl)或非電解質(zhì)(甘露糖或葡萄糖)溶液中是不活動的,精漿的滲透壓濃度是抑制精子活動的因子。當氯化鈉溶液濃度大于0.70%時,鱸鯉精子不活動,由此推測與鱸鯉精漿等滲的氯化鈉濃度為0.70%,故該結(jié)果可作為鱸鯉精子保存液的參考值。

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