SULT1A1基因多態(tài)性與女性乳腺癌易感性及他莫昔芬治療預(yù)后相關(guān)性研究

安玉英 張風林 宋小穎

乳腺癌是1種發(fā)病率較高的女性常見惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計2013年我國新發(fā)女性乳腺癌人數(shù)高達27.9萬人，在各類女性惡性腫瘤中發(fā)病率居首，死亡病例超過6萬人[1-2]。硫酸化(sulfation)是人體重要的共軛途徑之一，在機體脫毒并從宿主體內(nèi)清除有毒外源性化學物質(zhì)和內(nèi)源性小分子過程中起主要作用，在磺基轉(zhuǎn)移酶(sulfotransferase，SULT)家族成員的作用下維持內(nèi)源性小分子與外源性化合物的穩(wěn)態(tài)[3-4]。SULT1A1作為SULT家族主要成員其基因多態(tài)性已被發(fā)現(xiàn)與膀胱癌、肝癌等惡性腫瘤疾病易感性存在關(guān)聯(lián)，但在乳腺癌患者中，其臨床價值尚存爭議[5-6]。本研究對我院收治的乳腺癌患者SULT1A1 基因Arg213His(rs9282861)位點多態(tài)性進行調(diào)查，旨在為該位點與本地區(qū)居民對乳腺癌的易感性及治療反應(yīng)研究提供有價值的研究基礎(chǔ)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇本院腫瘤科2015年3月至2017年3月收治的女性乳腺癌患者86例作為研究對象。納入標準：①均經(jīng)我院病理科確診為浸潤性乳腺癌，診斷參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2019版)》[7]。②雌激素受體陽性，均在化療或放療結(jié)束后口服他莫昔芬進行內(nèi)分泌治療，治療時間超過6個月。③均在我院初次接受治療，治療前無轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。排除標準：①合并其它惡性腫瘤者。②合并傳染性疾病者。③治療中途轉(zhuǎn)院或更改治療方案者。選擇本院體檢中心健康女性80例作為對照組，均為漢族女性且無腫瘤史，研究組患者平均年齡為50.15±6.18歲，已絕經(jīng)患者34例(39.53%)，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期52例(60.47%)，Ⅲ～Ⅳ期34例(39.53%)，對照組女性平均年齡(50.88±5.94)歲，已絕經(jīng)者30例，兩組研究對象平均年齡、絕經(jīng)率比較無差異(P>0.05)。本研究所有患者均簽署對研究知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 SULT1A1 基因Arg213His(rs9282861)位點多態(tài)性檢測 ①所有研究對象均抽取外周靜脈血3 ml，采用DNA提取試劑盒(北京天根生化有限公司)提取全血DNA，使用NanoDrop2000超微量分光光度計對提取DNA濃度及純度進行檢測，合格標本置于-20 ℃冰箱保存。②針對SULT1A1基因Arg213His(rs9282861)位點，根據(jù)目標序列設(shè)計特異性引物并交由生物公司進行合成，所用序列為SULT1A1-F：5’-CAATTCTTTTTACCCCCGG-3’，SULT1A1-R：5’-AGGGAGCAAAGCTGGAGTC-3’。③實驗時將冰箱中DNA取出在室溫下化凍，離心平衡后采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)法對模板中目的序列進行擴增，反應(yīng)體系為20 μl，其中PCR master mix 10 μl，模板1 μl，上、下游引物各1 μl，雙蒸水補足剩余體積，反應(yīng)條件：94 ℃4 min，94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 42 s，反應(yīng)進行35個循環(huán)，72 ℃ 10 min，將反應(yīng)產(chǎn)物回收純化后進行雙酶切反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后采用1.8%瓊脂糖凝膠進行擴增，在凝膠成像儀中觀察分型結(jié)果，取1/3樣品送公司測序?qū)Y(jié)果進行驗證。

1.2.2 預(yù)后判定 以局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移作為他莫昔芬治療不良結(jié)局，局部復(fù)發(fā)定義：患側(cè)乳腺或胸壁發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)病灶，且經(jīng)活檢證實。轉(zhuǎn)移定義：非患側(cè)區(qū)域經(jīng)活檢發(fā)現(xiàn)腫大淋巴結(jié)，或遠處器官以活檢結(jié)果作為診斷依據(jù)，將研究組患者分為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組及非復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，隨訪：所有患者均在他莫昔芬治療開始后進行隨訪，隨訪方式為電話隨訪或復(fù)診時，頻率為每3個月1次，以患者發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或全因死亡作為隨訪終點，截止日期與2020年5月1日?？偵嫫谟嬎悖夯颊甙l(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或全因死亡或末次隨訪時間與初次隨訪時間時間差。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 兩組SULT1A1基因rs9282861位點基因型、等位基因分布比較

兩組SULT1A1基因rs9282861位點基因型分布符合哈迪-溫伯格平衡(P>0.05)，具有群體代表性。研究組rs9282861位點GA、AA基因型、A等位基因頻率高于對照組(P<0.05)，GG基因型、G等位基因頻率低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組SULT1A1基因rs9282861位點基因型、等位基因分布比較

2.2 SULT1A1基因rs9282861位點與乳腺癌發(fā)病風險關(guān)聯(lián)性分析

校正年齡、絕經(jīng)狀態(tài)等因素后，Logistic回歸分析結(jié)果顯示，與攜帶GG基因型患者相比，攜帶GA、AA、GA+AA患者發(fā)生乳腺癌風險分別為3.125、3.938、3.450倍，與攜帶G等位基因患者相比，攜帶A等位基因患者發(fā)生乳腺癌風險為3.008倍，均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 SULT1A1基因rs9282861位點與乳腺癌發(fā)病風險關(guān)聯(lián)性分析

2.3 SULT1A1基因rs9282861位點不同基因型乳腺癌患者預(yù)后比較

截止隨訪截止時，86例研究組患者共有5例失訪(GG型3例，GA型1例，AA型1例)。所有患者隨訪時間31～58個月，平均41個月。所有患者中位生存期為26個月，rs9282861位點GG、GA、AA基因型中位生存時間分別為30個月、24個月、20個月，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

近年來女性乳腺癌在我國呈現(xiàn)出發(fā)病率不斷增加、發(fā)病年齡不斷降低的特點，盡管已有多種新藥用于該病的臨床治療，預(yù)期壽命明顯延長，死亡率降低，但繼續(xù)對其機制進行研究對于改善患者治療體驗及預(yù)后具有重要的意義[8-9]。研究[10-11]認為，隨著年齡的增長女性雌激素水平改變明顯，這一過程對于雌激素依賴型乳腺癌的發(fā)病具有重要影響。機制研究[12-13]發(fā)現(xiàn)，雌激素E2可通過與雌激素受體結(jié)合并激活相關(guān)癌基因的方式促進乳腺癌細胞的增殖或凋亡過程。因此，阻斷E2與雌激素受體的結(jié)合過程可能是阻止乳腺癌病情進展的關(guān)鍵靶點。

SULTA1與雌激素相關(guān)疾病已有較多的報道，邵茵等[14]研究發(fā)現(xiàn)SULT1A1在子宮肌瘤患者中低表達，且與年齡、肌瘤數(shù)目存在關(guān)聯(lián)；Moyer等[15]研究發(fā)現(xiàn)SULT1A1基因變異對近期絕經(jīng)后白人婦女雌激素水平和激素治療反應(yīng)有關(guān)，對于雌激素治療具有指導(dǎo)意義。本研究對于本地區(qū)女性乳腺癌患者外周血中SULT1A1基因rs9282861位點多態(tài)性進行調(diào)查，結(jié)果顯示與對照組對象相比，研究組患者GA、AA基因型、A等位基因頻率明顯升高，而GG基因型、G等位基因頻率明顯下降，說明該位點在遺傳水平上的多態(tài)性與本地區(qū)女性對于乳腺癌的易感性存在關(guān)聯(lián)，本研究進一步通過Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，SULT1A1基因rs9282861位點攜帶GA、AA基因型及A等位基因患者相較于攜帶GG基因型及G等位基因患者發(fā)病發(fā)病風險明顯增加，因此SULT1A1基因rs9282861位點作為乳腺癌相關(guān)篩查指標具有一定的價值。Forat-Yazdi等[16]通過Meta分析對11077 乳腺癌患者及14798健康對照組結(jié)果顯示，SULT1A1基因rs9282861位點與亞洲女性對乳腺癌易感性具有明顯的影響，與本研究結(jié)果一致。

內(nèi)分泌治療是雌激素受體陽性乳腺癌患者治療的一線經(jīng)典方案，具有毒性低、作用效應(yīng)好及經(jīng)濟性好的有點，在乳腺癌的早期治療中獲益較大，但在持續(xù)治療后易出現(xiàn)耐藥問題，是導(dǎo)致腫瘤的進展及轉(zhuǎn)移的藥物性因素之一[17]。既往研究發(fā)現(xiàn)，磺基轉(zhuǎn)移酶可參與他莫昔芬代謝過程中的磺化反應(yīng)，進一步影響其失活外排過程[18]，因此，SULT1A1基因遺傳多態(tài)性可能通過影響磺基轉(zhuǎn)移酶合成的方式對他莫昔芬代謝過程產(chǎn)生影響，但對于SULT1A1基因多態(tài)性與他莫昔芬治療的雌激素依賴型乳腺癌患者的預(yù)后尚存爭議。本研究對于SULT1A1基因rs9282861位點攜帶不同基因型患者OS進行比較，與GG型患者相比，攜帶GA、AA型患者OS明顯降低，說明檢測SULT1A1基因rs9282861位點多態(tài)性對患者的預(yù)后判斷也有一定的價值，與Sanchez-Spitman等[19]報道結(jié)果一致，但與Charoenchokthavee等[20]結(jié)果不同，其原因可能與納入患者地區(qū)人種差異、患者絕經(jīng)狀態(tài)及化療方案差異有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果證明了SULT1A1基因rs9282861位點與本地區(qū)女性乳腺癌易感性及他莫昔芬治療預(yù)后存在關(guān)聯(lián)，參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，由于納入病例數(shù)較少、隨訪年限短及未進行體內(nèi)、外實驗等缺陷，相關(guān)結(jié)論有待進一步研究的完善。