乳腺癌中β-catenin的表達及臨床意義

鄭 炎，肖大樹，朱 楠，李文清，曹立宇

近年乳腺癌的發(fā)病出現年輕化趨勢且病死率較高，大多數病例發(fā)現時已為晚期[1]。如何治療乳腺癌，有效評估療效，正確評價預后已受到廣泛關注。乳腺癌的進程復雜，有多種分子及多條信號通路參與其中。大多數乳腺癌患者接受各種形式的新輔助治療或輔助治療，以減少復發(fā)和提高總生存率，但療效并不令人滿意。因此，尋找新的預后標志物將有助于更好地應對這一難題，并有助于治療決策[2]。研究表明，經典的Wnt/β-catenin信號通路在大多數人類癌癥中起調節(jié)作用。β-catenin主要通過促進腫瘤細胞的增殖、分化和轉移方面起到作用。Wnt信號異常激活常導致β-catenin核的積累[3]，入核的β-catenin會激活T細胞因子/淋巴增強因子并形成復合體，觸發(fā)下游靶基因的異常表達作用于細胞，最終導致腫瘤的發(fā)生。Wnt信號通路的異?；罨瘏⑴c腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移過程[4]。目前，關于Wnt/β-catenin信號通路在乳腺癌發(fā)病機制中的研究較少，本實驗采用免疫組化法檢測乳腺浸潤性癌、乳腺導管內癌以及乳腺正常組織中β-catenin蛋白的表達，探討其在乳腺癌生物學行為判斷和預后評估中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2018年1月～2020年8月安徽醫(yī)科大學附屬巢湖醫(yī)院病理科存檔的149例乳腺組織標本，其中正常乳腺組織30例，乳腺導管內癌33例，乳腺浸潤性癌86例。納入標準：(1)所有病例均經病理學診斷，由2名病理醫(yī)師對結果進行判讀，以病理結果作為診斷依據；(2)具有完整的臨床病理資料和輔助檢查資料。排除標準：(1)存在嚴重的心、肺、肝、腎功能異常病史；(2)患者在接受檢查前進行過相關醫(yī)學治療(如放療或化療等)。

1.2 主要試劑與儀器β-catenin鼠單克隆抗體(MX043，福州邁新公司)，EDTA抗原修復液(pH 9.0，MVS-0099)，PBS緩沖液(PBS-0060，pH 7.4～7.6)和MaxVision檢測試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3 免疫組化石蠟切片常規(guī)脫蠟，3%H2O2孵育20 min，PBS沖洗，直接煮沸EDTA抗原修復液進行抗原修復，PBS沖洗3次；阻斷內源性過氧化物酶，室溫下孵育10 min，滴加一抗孵育60 min，加入100 μL酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物Ⅲ室溫下孵育15 min，PBS沖洗3次；DAB顯色；自來水沖洗，蘇木精復染，脫水封片，鏡下觀察。用PBS代替一抗作為陰性對照。β-catenin在正常組織細胞膜連續(xù)著色，癌組織中為胞質、胞核異常著色。染色結果判斷標準分別從胞膜、胞質和胞核判定，胞膜陽性>70%為正常表達，否則為表達減少；胞質或胞核陽性>10%為異位表達；異位表達與表達減少均為異常表達。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。采用χ2檢驗分析計數資料，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 乳腺組織中β-catenin蛋白的表達免疫組化結果顯示，β-catenin在正常乳腺組織細胞胞膜表達，在乳腺導管內癌及乳腺浸潤性癌細胞胞膜的表達不同程度減少，而在胞質和胞核中存在異常表達(圖1)。

2.2 正常乳腺、乳腺導管內癌和乳腺浸潤性癌中β-catenin的表達β-catenin在86例乳腺浸潤性癌中的異常表達率為66.2%(57/86)，在正常乳腺組織中的異常表達率為6.7%(2/30)，在乳腺導管內癌組織中的異常表達率為24.2%(8/33)。與正常乳腺組織相比，乳腺浸潤性癌中的β-catenin異常表達率升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3 乳腺浸潤性癌中β-catenin表達與臨床病理特征的關系本組β-catenin表達在患者年齡、腫瘤直徑及Ki-67增殖指數方面，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05，表1)；病理分級Ⅰ級的β-catenin異常表達率26.7%，Ⅱ級為61.8%，Ⅲ級為89.2%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；臨床分期Ⅰ+Ⅱ期β-catenin的異常表達率48%，Ⅲ+Ⅳ期為88.9%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；無淋巴結轉移組的β-catenin異常表達率為51%，淋巴結轉移組為86.4%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在E-cadherin有無異常表達、HER-2擴增情況方面，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表1)。

表1 乳腺浸潤性癌中β-catenin表達與臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討論

本實驗探討了β-catenin在正常乳腺組織、乳腺導管內癌及乳腺浸潤性癌中的表達，同時分析β-catenin表達與乳腺浸潤性癌臨床病理特征的關系。結果顯示β-catenin在正常乳腺組織胞膜陽性，在浸潤性癌中陽性部位轉移到胞質與胞核中，胞膜陽性會減少。乳腺導管內癌中β-catenin異常表達也明顯增高，苗玉等[5]對200例乳腺標本進行研究，在乳腺導管內癌組織中發(fā)現β-catenin異常表達，且與其附近的原位和侵襲性成分中β-catenin表達模式高度一致，這也提示β-catenin異常表達可能在乳腺導管內癌與乳腺浸潤性癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定作用，具體的作用機制尚需要進一步的研究及證實。另外，乳腺浸潤性癌中，病理分級Ⅰ級的β-catenin異常表達率低于Ⅱ、Ⅲ級，在臨床分期、有無淋巴結轉移、E-cadherin有無異常表達、HER-2擴增情況組間，β-catenin異常表達率差異均有統(tǒng)計學意義。

ABCDEF

β-catenin作為經典Wnt信號通路中重要的轉錄激活因子，可協(xié)助E-cadherin共同作用，保持組織結構的完整性與極性。胞膜上β-catenin表達減少會導致E-cadherin依賴性的細胞黏附力降低，癌細胞易從原發(fā)部位發(fā)生脫離。β-catenin及E-cadherin共同參與上皮-間質轉化過程，使上皮細胞失去黏合性和極性，強化了轉移和侵襲能力[4]，本實驗結果也表明β-catenin及E-cadherin表達呈正相關。Wnt/β-catenin信號通路在生物機體進入、調控細胞增殖分離、極化、凋亡和抗凋亡等過程中作用顯著，包括癌癥在內的多種疾病和通路的異常相關[6]。有研究證明在食管癌[4]、涎腺癌[7]、非小細胞肺癌[8]、分化型甲狀腺癌[9]及口腔鱗狀細胞癌中[10]，β-catenin陽性顆粒均主要異常表達于胞質與胞核中。本實驗亦發(fā)現，β-catenin在正常乳腺組織中呈胞膜陽性，癌組織中胞膜表達減少，陽性顆粒定位于胞質、胞核。其機制可能是Wnt通路參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，當異常情況下Wnt通路被激活，β-catenin由胞膜轉移到胞核內，失去介導細胞間鏈接、黏附的作用，促使其下游轉錄因子也被激活并引起某些癌基因的轉錄，進而誘導細胞癌變[11]。

β-catenin的表達作用目前已在不同種類癌癥的研究中逐步證實。Su等[12]報道，甲狀腺癌中通過β-catenin從胞膜到胞質的移位，胞質中β-catenin蛋白增加，從而激活Wnt通路。高薔等[13]研究表明，子宮頸癌中β-catenin表達異常，促進子宮頸癌的侵襲及轉移，可能提示患者預后不良。本組86例乳腺浸潤性癌中，β-catenin異常表達率為66.2%(57/86)，在乳腺導管內癌組織中的表達率為24.2%(8/33)，而在正常組織中的異常表達率為6.7%(2/30)，提示β-catenin異常表達上調可能在乳腺浸潤性癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定作用。另外，本實驗發(fā)現33例乳腺導管內癌組織中8例存在β-catenin異常表達，提示其具備成為乳腺浸潤性癌過渡階段診斷標志物的可能性。

鑒于β-catenin在乳腺浸潤性癌組織存在異常表達，近期有研究進一步探究了β-catenin蛋白表達與腫瘤臨床病理指標的相關性和差異性。β-catenin在臨床分期、病理分化及淋巴結有否轉移的子宮頸癌[13]及喉癌中的表達有差異。不同腫瘤中β-catenin表達與臨床病理指標的關系存在差異，在非小細胞肺癌組織中，β-catenin表達與分化、轉移和臨床分期有關[14]，但邵宇鑫等[9]研究表明β-catenin在分化型甲狀腺癌中的異常表達與淋巴結轉移有關，但和臨床分期無顯著相關性。Zhang等[15]通過實驗得出，乳腺癌組織中β-catenin異位表達與組織學分級、臨床分期及Ki-67增殖指數有關。本組β-catenin表達與Ki-67增殖指數、腫塊大小及患者年齡無明顯關聯，但在病理分級Ⅱ級(61.8%)和Ⅲ級的β-catenin異常表達率(89.2%)高于Ⅰ級組織(26.7%)，且與臨床分期、有無淋巴結轉移、E-cadherin有無異常表達及HER-2有無擴增方面存在關聯，其中的差異性機制有待于進一步觀察。

綜上所述，本實驗結果顯示，β-catenin異常聚集與表達引發(fā)的細胞增殖和分化功能失常，最終導致細胞發(fā)生癌變，這種變化影響了乳腺癌的進展和轉移。此發(fā)現可能有助于確定并開發(fā)新的治療靶點，以減少乳腺癌中β-catenin介導的惡性腫瘤，從而開發(fā)新的治療策略。