杜仲雌雄花發(fā)育與內(nèi)源激素含量動(dòng)態(tài)變化的關(guān)系

（1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究開(kāi)發(fā)中心，河南 鄭州 450003；2.國(guó)家林業(yè)和草原局杜仲工程技術(shù)研究中心，河南 鄭州 450003；3.經(jīng)濟(jì)林種質(zhì)創(chuàng)新利用國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 鄭州 450003）

杜仲Eucommia ulmoides為杜仲科杜仲屬Eucommia植物，又是我國(guó)特有的第三紀(jì)孑遺植物，具有重要的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值[1]。杜仲為嚴(yán)格雌雄異株，雌雄株的分布比例近似1∶1[2]。杜仲雌花單生于苞片腋間，授粉后發(fā)育成果實(shí)，其種仁軋制的杜仲籽油含有多種代謝產(chǎn)物以及豐富的不飽和脂肪酸，其中α-亞麻酸含量達(dá)60%左右，可制作成杜仲亞麻酸軟膠囊等產(chǎn)品[3]；果皮是提取杜仲膠的重要原材料，在醫(yī)療工業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊。杜仲雄花簇生于苞片腋間，其花粉活性成分和營(yíng)養(yǎng)成分的含量和種類十分豐富，是一種珍貴的藥用花粉資源，由雄花開(kāi)發(fā)出了杜仲雄花茶、雄花酒等產(chǎn)品[4]。

花芽分化是植物由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變的重要標(biāo)志之一，分化過(guò)程受植物和外界因素共同影響，分化時(shí)間、數(shù)量和質(zhì)量與經(jīng)濟(jì)林木的早實(shí)性、豐產(chǎn)性、穩(wěn)定性以及商品價(jià)值緊密相關(guān)?；ㄑ糠只且粋€(gè)復(fù)雜的生理生化、基因調(diào)控和形態(tài)發(fā)生變化的過(guò)程，對(duì)植物花芽分化的研究包括花芽生長(zhǎng)錐分生組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察，碳氮化合物和激素等生理生化指標(biāo)變化以及開(kāi)花調(diào)控相關(guān)基因的變化[5]。劉朝暉等對(duì)杜仲雌雄花芽分化進(jìn)程的解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察，但未對(duì)花芽外部形態(tài)和內(nèi)源激素動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行觀察和測(cè)定[6]。不同地區(qū)的氣候條件、立地條件或栽培品種存在差異，植物花芽分化時(shí)間和進(jìn)程也會(huì)發(fā)生變化，因此僅根據(jù)前人研究不能準(zhǔn)確判斷其它地區(qū)的花芽具體分化進(jìn)程，進(jìn)而影響研究區(qū)域栽培管理和進(jìn)一步試驗(yàn)研究[7]。花芽外部形態(tài)特征與內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)存在一定的相關(guān)性，在花芽發(fā)育過(guò)程中建立形態(tài)標(biāo)記利于判斷不同環(huán)境條件下花芽的分化進(jìn)程，根據(jù)早實(shí)核桃Juglans regia雌花芽的大小、性狀、鱗片質(zhì)地和顏色判斷花芽?jī)?nèi)部結(jié)構(gòu)[8]。植物內(nèi)源激素含量和動(dòng)態(tài)變化與植物過(guò)程密切相關(guān)，如低ABA/IAA 促進(jìn)油菜的成花誘導(dǎo)和花器官發(fā)育，但高ABA/IAA 則有利于花芽形態(tài)分化[9]；銀杏Ginkogo biloba花芽不同發(fā)育階段，雌雄花芽中ABA、IAA 和ZRs 含量發(fā)生變化，且在雌雄花芽中變化趨勢(shì)存在差異[10-11]。研究顯示通過(guò)噴施外源激素能夠影響杜仲短周期林地上部分生物量和杜仲膠產(chǎn)量[12]。杜仲也是雌雄異株孑遺植物，因此通過(guò)觀察杜仲雌、雄花芽分化過(guò)程中內(nèi)外形態(tài)結(jié)構(gòu)，以期建立花芽發(fā)育形態(tài)標(biāo)記；同時(shí)分析不同發(fā)育時(shí)期雌雄花芽中ABA、IAA 和ZRs含量動(dòng)態(tài)變化，了解這3 種內(nèi)源激素對(duì)杜仲雌、雄花芽分化的作用，為進(jìn)一步杜仲花芽發(fā)育研究提供依據(jù)以及為科學(xué)指導(dǎo)杜仲栽培管理提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)地位于中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究中心原陽(yáng)試驗(yàn)基地（34°55′18″～34°56′27″N，113°46′14″～113°47′35″E）。材料為杜仲良種示范園栽培的7年生嫁接苗果用國(guó)審杜仲良種‘華仲6 號(hào)’（F6）和雄花用國(guó)審杜仲良種‘華仲11 號(hào)’（M11）為研究材料。分別選取3 棵生長(zhǎng)勢(shì)均勻且無(wú)病蟲(chóng)害的雌、雄株作為樣株。從2017年4月25日—9月30日每隔4 d 采樣一次，10—12月每隔9 d 采樣一次，材料采集混合后，投放入FAA 固定液（70%乙醇∶冰乙酸∶38%甲醛=18∶1∶1）保存固定，后帶回實(shí)驗(yàn)室-4℃低溫保存。同時(shí)，在采集FAA 固定材料時(shí)，每樣株另采集花芽30粒立即投放入液氮中，帶回實(shí)驗(yàn)室保存在-80℃超低溫冰箱，用于植物激素測(cè)定，雌、雄株各3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

1.2 外部和內(nèi)部結(jié)構(gòu)形態(tài)觀察

每取樣周期分別選取10 個(gè)典型雌雄株花芽進(jìn)行外部形態(tài)觀測(cè)，測(cè)定指標(biāo)包括花芽大小、苞片數(shù)量、苞片顏色以及質(zhì)地的變化，同時(shí)數(shù)碼相機(jī)拍照記錄外部形態(tài)。內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察按照常規(guī)石蠟切片方法進(jìn)行制片[12]，F(xiàn)AA 固定的材料逐漸酒精脫水、二甲苯透明、變溫浸蠟、切片，粘片后用番紅固綠雙重染色、脫蠟、復(fù)水、番紅-固率復(fù)染、中性樹(shù)膠封片后OLYMPUS 光學(xué)顯微鏡下觀察拍照。

1.3 內(nèi)源激素測(cè)定

在花芽形態(tài)觀察的基礎(chǔ)上，選取不同發(fā)育階段的花芽，用液氮研磨植物材料至粉末狀后，稱取0.1～0.2 g 樣品于10 mL 離心管中，然后進(jìn)行提取、提取液在過(guò)柱、洗脫、吹干、復(fù)溶、離心后上機(jī)。利用高效液相色譜-電離串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-ESIMS/MS）測(cè)定激素含量[13]。通過(guò)AB Analyst 化學(xué)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)的采集和獲取。將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液逐級(jí)稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度x(ng/mL)為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品峰面積值y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中目標(biāo)物含量。利用T 檢驗(yàn)分析相同發(fā)育時(shí)期的雌、雄花芽?jī)?nèi)源激素含量差異顯著性，在Excel 2016 軟件中繪制折線圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 杜仲雌、雄花芽分化形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

根據(jù)杜仲雌、雄花芽外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果，花芽分化過(guò)程可分為5 個(gè)時(shí)期：花序原基分化期（4月下旬至5月下旬）、苞片原基分化期（6月上旬至6月中上旬）、雌/雄蕊原基分化期（6月中下旬至6月下旬）、雌/雄蕊形態(tài)建成期（7月上旬至11月上旬），隨后在低溫影響下雌雄花芽停止生長(zhǎng)進(jìn)入休眠期（11月中下旬至次年2月中上旬），其中雌雄花芽在雌/雄蕊原基分化期生長(zhǎng)速度較快、花芽高度和寬度發(fā)生明顯變化，同時(shí)雌雄花芽高度在雌/雄蕊形態(tài)建成期差異達(dá)到顯著（表1）。在花序原基分化期，花芽由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)為生殖生長(zhǎng)，雌、雄花芽形態(tài)特征比較相似，芽體幼嫩青綠色，芽頂端尖細(xì)、基部寬大、近似為三角形，表面分布著白色柔毛（圖1A1、C1）；內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)顯示花芽頂端隆起，呈錐形，細(xì)胞質(zhì)濃厚，分生能力強(qiáng)烈（圖1B1、D1）。苞片原基分化期，花芽苞片層數(shù)增加，且最外層苞片頂端逐漸木質(zhì)化，頂部顏色變?yōu)楹稚苑植忌倭咳崦▓D1A2、C2）；內(nèi)部結(jié)構(gòu)顯示花芽基部至頂部分化出較多的苞片原基，且芽頂端分生組織加寬、變平（圖1B2、D2）。雌/雄蕊原基分化期，外側(cè)3～4層苞片逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)轺[片狀，花芽呈褐色，內(nèi)部可觀察到雌花芽苞片原基腋間形成圓形小凸起即雌蕊原基，雄花芽苞片原基腋間形成數(shù)枚雄蕊原基簇生在苞片腋間，此時(shí)可根據(jù)內(nèi)部結(jié)構(gòu)區(qū)分雌雄花芽（圖1B3、D3）。雌/雄蕊形態(tài)建成期，花芽鱗片層數(shù)增至5～7 層，閉合緊密，雌花芽頂部比雄花芽頂部偏尖（圖1A4—5、C4—5）；內(nèi)部觀察結(jié)果顯示雌蕊原基逐漸伸長(zhǎng)、發(fā)育成近羽狀、頂部二裂形成柱頭（圖1B4—5），而雄蕊原基的花藥壁逐漸發(fā)育完全，分化出表皮、藥室內(nèi)壁、中層和絨氈層（圖1D4—5）。

表1 雌雄花芽分化過(guò)程內(nèi)外部形態(tài)特征?Table 1 External morphology and internal structure of female and male floral bud development

2.2 雌雄配子體發(fā)育過(guò)程

2.2.1 杜仲雌雄花芽萌動(dòng)觀察

第二年2月下旬氣溫回升后，杜仲雌、雄花芽休眠解除。其中，當(dāng)高于5.0℃的有效積溫達(dá)27.5℃左右時(shí)，雄花芽苞片開(kāi)始變綠，雌花芽開(kāi)始萌動(dòng)；有效積溫達(dá)35.3℃左右時(shí)，雄花芽苞片完全變綠且形成小孢子母細(xì)胞，雌花芽進(jìn)行縱向生長(zhǎng)；有效積溫達(dá)85.3℃左右時(shí)，雄花芽苞片完全張開(kāi)、露出雄蕊且小孢子母細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂形成四分體，雌花芽苞片變綠，不斷伸長(zhǎng)且胚珠原基開(kāi)始發(fā)育、逐漸突起；有效積溫達(dá)170.1℃左右時(shí)，雄配子體發(fā)育成熟，形成二細(xì)胞花粉粒，雄花開(kāi)始散粉，雌花芽大孢子母細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂發(fā)育為功能大孢子母細(xì)胞，雌蕊柱頭開(kāi)始授粉（表2）。

圖1 不同分化期雌雄花芽?jī)?nèi)部解剖結(jié)構(gòu)及其外部形態(tài)特征Fig.1 The external morphology structure and anatomic structure of female and male flower bud in different differentiated phases

表2 雌雄配子體發(fā)育過(guò)程內(nèi)外部形態(tài)特征Table 2 External morphology and internal structure of male and female gametophytes development

2.2.2 大小孢子發(fā)生和雌雄配子體發(fā)育過(guò)程

杜仲雄花花藥具有4 個(gè)花粉囊，橫切面為典型的蝴蝶形結(jié)構(gòu)（圖2C）。在7月中旬雄蕊原基的周緣組織和造孢組織開(kāi)始進(jìn)行伸長(zhǎng)生長(zhǎng)和邊緣生長(zhǎng)產(chǎn)生花藥原基（圖2A）?；ㄋ幵? 個(gè)角隅處細(xì)胞具有高度分裂能力，迅速分裂形成核大、質(zhì)濃的孢原細(xì)胞，而最外面分化出一層表皮；孢原細(xì)胞分裂速度快，經(jīng)一次平周分裂形成初生周緣細(xì)胞（外層）和初生造孢細(xì)胞；至11月上旬，初生周緣細(xì)胞經(jīng)過(guò)不斷分裂完成花藥壁發(fā)育，由外自內(nèi)分別形成表皮細(xì)胞（1 層）、藥室內(nèi)壁（1 層）、中層細(xì)胞（2～3 層）及絨氈層細(xì)胞（1 層）（圖2B—C）。次年3月1日左右初生造孢細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次有絲分裂形發(fā)育成小孢子母細(xì)胞，3月10日左右小孢子母細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂（圖2E），最終形成四分體，為四面體型，一般可觀察到3 個(gè)細(xì)胞（圖2F）。3月中下旬花粉粒逐漸發(fā)育成熟，發(fā)育成2-核花粉粒（圖2G），中層細(xì)胞和絨氈層細(xì)胞逐漸發(fā)生解離直至完全被吸收，花藥壁僅剩下表皮和藥室內(nèi)壁，花粉粒散出（圖2H）。

杜仲的大孢子發(fā)生晚于小孢子發(fā)生10 d左右，當(dāng)小孢子母細(xì)胞開(kāi)始減數(shù)分裂時(shí)，胚珠原基開(kāi)始突起發(fā)育。杜仲雌蕊具2 心皮，子房1 室，有花柄，扁平，頂端2 裂成柱頭，柱頭反曲生于子房裂口內(nèi)側(cè)，無(wú)花柱；柱頭由不規(guī)則的薄壁細(xì)胞組成，兩柱頭在子房壁中延伸一段距離后愈合（圖2I）。其中胚珠原基具有強(qiáng)烈的分裂能力，前端發(fā)育成珠心，基部發(fā)育成珠柄（圖2J）。隨著胚珠原基的發(fā)育，珠心表皮下分化出核大、質(zhì)濃的孢原細(xì)胞（圖2K—L）。孢原細(xì)胞進(jìn)行平周分裂產(chǎn)生周緣細(xì)胞和造孢細(xì)胞，后者直接發(fā)育成大孢子母細(xì)胞，此時(shí)大孢子母細(xì)胞體積大、核大、細(xì)胞質(zhì)較濃，位于珠心表皮和周緣細(xì)胞下，因此胚珠發(fā)育屬于厚珠心型（圖2M）。隨后大孢子母細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂，經(jīng)第一次減數(shù)分裂形成二分體（圖2N），然后經(jīng)第二次減數(shù)分裂后大孢子四分體呈線型排列（圖2O）。其中四分體中位于珠孔端的3 個(gè)大孢子逐漸退化，僅合點(diǎn)端的1 個(gè)發(fā)育為功能大孢子（圖2P）。

圖2 大小孢子發(fā)生及雌雄配子體發(fā)育Fig.2 Megasporogenesis,microsporogenesis and development of female and male gametophytes

2.3 雌雄花芽不同發(fā)育時(shí)期內(nèi)源激素含量變化

杜仲雌、雄花芽的ABA、IAA 和ZR 含量在不同發(fā)育時(shí)期均發(fā)生了變化，其中ABA 含量在雌雄花芽間變化趨勢(shì)不一致，但I(xiàn)AA 和ZR 含量在雌雄花芽間變化趨勢(shì)一致（圖3）。雌花芽ABA含量呈“降低—升高—降低”的趨勢(shì)，而雄花芽呈“升高—降低—升高—降低”的趨勢(shì)，除了在雌雄蕊原基分化期（6月14日），雌花芽ABA 含量在其它發(fā)育時(shí)期均顯著高于雄花芽（圖2～3）。雌、雄花芽的ABA 含量均在花芽休眠期（12月10日）達(dá)到最高峰，分別為988 ng·g-1和590 ng·g-1；在大、小孢子發(fā)生期（3月1日）ABA 含量最低，雌雄花芽分別是98 ng·g-1和60 ng·g-1。雌、雄花芽IAA含量均呈“上升—下降”的趨勢(shì)，且雌花芽IAA含量一直顯著高于雄花芽，但雌、雄花芽IAA 含量均在大、小孢子發(fā)生期達(dá)到最高峰，分別是105 ng·g-1和82 ng·g-1；在雌、雄花芽休眠期含量最低，分別是48 ng·g-1和28 ng·g-1。雌、雄花芽ZR含量均呈“下降—上升—下降”的趨勢(shì)，且雄花芽ZR 含量一直高于雌花芽，但在雌、雄蕊原基分化期的ZR 含量差異不顯著，其它時(shí)期均差異顯著；兩者的ZR 含量均在雌/雄蕊形態(tài)建成期達(dá)到最高峰，分別是14 ng·g-1和7 ng·g-1，在雌、雄雄蕊原基分化期含量最低均為3 ng·g-1。此外，杜仲花芽在誘導(dǎo)花器官分化過(guò)程中（花序原基分化期至雌、雄蕊原基分化期），IAA 和ZR 含量在花芽中分別是上升和下降的，而ABA 含量在雌、雄花芽的分別是下降和上升的，說(shuō)明ABA 對(duì)杜仲的雌、雄蕊分化可能分別具有抑制和促進(jìn)作用。

圖3 雌雄花芽不同發(fā)育期激素含量變化Fig.3 Variation of endogenous hormone during different female and male floral development

3 結(jié)論與討論

確定花芽發(fā)育進(jìn)程時(shí)期，可為植物及時(shí)采取合理栽培管理措施提供參考，對(duì)實(shí)踐生產(chǎn)和育種具有指導(dǎo)意義。多種植物花芽分化研究結(jié)果表明，花芽發(fā)育過(guò)程中外部形態(tài)與內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)存在著相關(guān)性，徐自龍等研究結(jié)果表明依據(jù)山雞椒Litsea cubeba的外部形態(tài)判斷花芽分化發(fā)育階段是可行的，這為人工授粉等研究適時(shí)取材提供了依據(jù)[15]。本研究觀察結(jié)果顯示杜仲花芽分化過(guò)程與劉朝暉[6]觀察結(jié)果一致，但是花芽分化時(shí)間早于后者，說(shuō)明不同地區(qū)的氣候條件影響杜仲花芽分化進(jìn)程。杜仲雌、雄花芽外部形態(tài)特征與其內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)具有一定相關(guān)性，杜仲雌、雄花芽的苞片開(kāi)始木質(zhì)化、芽體顏色由青綠色變?yōu)榛揖G色時(shí)，花芽進(jìn)入雌雄蕊原基分化期，此時(shí)雌、雄蕊原基開(kāi)始在苞片基部?jī)?nèi)側(cè)產(chǎn)生；第二年，雌、雄蕊開(kāi)始露出苞葉時(shí)，大小孢子進(jìn)入減數(shù)分裂，當(dāng)雌、雄蕊完全露出苞葉時(shí)，雌雄配子體發(fā)育成熟。因此，可依據(jù)杜仲雌、雄花芽的外部形態(tài)判斷花芽發(fā)育階段，在花芽發(fā)育關(guān)鍵時(shí)期積極采取管理措施從而促進(jìn)雌雄花器官和配子體正常發(fā)育。

通過(guò)對(duì)杜仲雌雄花芽整個(gè)發(fā)育過(guò)程觀察，杜仲雌、雄花芽在整個(gè)發(fā)育過(guò)程中無(wú)花被片產(chǎn)生，且在一個(gè)性別的花芽中觀察不到另一個(gè)性別花器官原基發(fā)生的痕跡，其單性花與楊樹(shù)Populus deltoides、大麻Cannabis sativa等植物的單性花產(chǎn)生模式一致，即單性花的性別分化發(fā)生在雄蕊和心皮發(fā)育之前[16]。杜仲雌雄花的性別不是由某一個(gè)性別花器官退化造成的，雌雄花芽雖在花芽營(yíng)養(yǎng)階段形態(tài)結(jié)構(gòu)相似，但此時(shí)性別已產(chǎn)生，具有本質(zhì)差異。

植物的開(kāi)花過(guò)程受植物激素調(diào)控，不同內(nèi)源激素對(duì)雌雄花芽的促進(jìn)作用具有差異。本研究對(duì)杜仲雌、雄花芽不同發(fā)育時(shí)期花芽的ABA、IAA和ZR 含量測(cè)定結(jié)果顯示，在花器官啟動(dòng)過(guò)程，杜仲雌雄花芽的IAA 含量均上升、ZR 含量均下降，IAA 和ZR 對(duì)雌雄花芽形態(tài)分化具有相似作用，且高含量的IAA 和低含量的ZR 可能對(duì)雌、雄蕊的形態(tài)分化可能具有促進(jìn)作用；然而，此過(guò)程中雌花芽的ABA含量下降，而雄花芽的ABA含量上升、且含量顯著高于雌花芽，但在其他發(fā)育時(shí)期，雄花芽的ABA 含量均顯著低于雄花芽，說(shuō)明ABA對(duì)雌雄花芽具有不同調(diào)控作用，可能一定含量的ABA 對(duì)杜仲雄蕊原基的分化具有促進(jìn)作用，而雌蕊分化需要低水平的ABA 含量。杜仲雌雄花芽中ABA 和ZR 含量變化趨勢(shì)及其含量高峰期與銀杏Ginkogo biloba雌、雄花芽激素變化一致[10-11]。雌雄花芽中激素的差異變化與雌雄花比例甚至植物性別密切相關(guān)，如生長(zhǎng)素在黃瓜Cucumis sativus、大麻、柿子Diospyros kaki等植物中促進(jìn)雌蕊發(fā)育，但對(duì)啤酒花Humulus lupulus和青蒿Mercurialias annua等植物的雄蕊發(fā)育具有促進(jìn)作用和提高雄花比例[17]。脫落酸對(duì)植物性器官的影響可通過(guò)抵消生長(zhǎng)素和赤霉素在植物中雌化或雄化作用[18]。Akagi 等在獼猴桃Actinidia chinensis的Y 染色體上鑒定的性別決定基因SyGI，是一個(gè)C 類型的細(xì)胞分裂素響應(yīng)基因，具有抑制雌蕊發(fā)育，使植株表現(xiàn)為雄性的功能[19]；甚至，噴施細(xì)胞分裂素可使山葡萄Vitis amurensis雄株性別發(fā)生反轉(zhuǎn)[20]。此外，乙烯、赤霉素、茉莉酸等植物激素也可影響植物的花器官分化甚至調(diào)控花性器官的性別轉(zhuǎn)化，但在不同植物中激素調(diào)控花器官作用和影響程度不同[21]。同時(shí)，植物的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)對(duì)花芽?jī)?nèi)源激素也具有調(diào)控作用，在油茶花芽前分化期施肥可以提高花芽中的ABA 和ZR 含量，但花芽形態(tài)分化期則降低ABA 含量，促進(jìn)油茶花芽生長(zhǎng)和分化率[22]。但是本研究只是基于3 種激素進(jìn)行了測(cè)定，缺乏乙烯、茉莉酸等其他植物內(nèi)源激素在杜仲雌雄花芽過(guò)程中調(diào)控作用研究，同時(shí)也需要對(duì)雌雄花芽中的營(yíng)養(yǎng)成分與內(nèi)源激素的關(guān)系進(jìn)行探索。雖然本研究目前還存在一定局限性，但花芽觀察結(jié)果為杜仲雌雄花器官進(jìn)程判斷提供了外部形態(tài)依據(jù)，同時(shí)內(nèi)源激素的測(cè)定結(jié)果也對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中不同性別植株噴施植物調(diào)節(jié)劑提供了理論依據(jù)。