腫瘤M2 型丙酮酸激酶檢測在結(jié)腸癌診斷中的臨床價值

張丹

結(jié)腸癌發(fā)病早期癥狀無典型性，多數(shù)患者入院治療時，已為晚期，錯失最佳治療時機。生物標志物檢測是臨床診斷結(jié)腸癌的常用方法，具有簡單、方便、快捷的優(yōu)勢。臨床常用的腫瘤標志物為癌胚抗原、糖類抗原199，但這些標志物的診斷陽性率低。近些年來，腫瘤M2 型丙酮酸激酶（M2-PK）已經(jīng)成為醫(yī)學界研究腫瘤的新型標志物。根據(jù)相關(guān)報道顯示，多種腫瘤患者血液中的腫瘤M2-PK 濃度都出現(xiàn)了升高的情況，這與腫瘤的侵襲與生長有著極為密切的聯(lián)系[1-2]?；诖?，本文分別對結(jié)腸癌患者、結(jié)腸腺瘤患者以及正常人血漿中的腫瘤M2-PK 進行了系列的檢測分析，并與癌胚骯原（CEA）檢測結(jié)果進行了詳細的比較。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2017 年3 月1 日—2019 年6 月1 日經(jīng)病理診斷確診為結(jié)腸癌的50 例患者與結(jié)腸腺瘤的60 例患者分別設為結(jié)腸癌組與結(jié)腸腺瘤組，選擇90 例健康人設為正常組。其中，結(jié)腸癌男28 例，女22 例，年齡在37 ～83 歲，平均年齡為（65.0±13.0）歲；Dukes 分 期：A 期2 例，B 期12 例，C 期26 例，D 期10 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18 例。結(jié)腸腺瘤組男31 例，女29 例，年齡在39 ～79 歲，平均年齡為（65.5±12.0）歲。正常組男49 例，女41 例，年齡35 ～85 歲，平均年齡為（65.7±14.0）歲。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 當天采集三組研究對象空腹狀態(tài)下的靜脈血4 mL，將其均勻混合置入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，進行離心處理，3 000 r/min，之后收集血漿樣本保存至冰箱。同時也要準確記錄結(jié)腸癌患者術(shù)后腫瘤的基本資料，并實施Dukes 分期[3]。

1.2.2 腫瘤M2-PK 測定 應用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）對三組研究對象的M2-PK 濃度進行檢測，試劑盒是由德國ScheBoBiotech 公司生產(chǎn)與提供的。采用緩沖液將各組凍存分離的血漿實施解離，按照1 ∶100 的比例進行稀釋，采用ELISA 法測定血漿腫瘤M2-PK 值[4-5]。同時，要采用微粒子免疫法對結(jié)腸癌組患者的外周血CEA 數(shù)值經(jīng)常測定。

1.3 統(tǒng)計學分析

以SPSS 20.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血漿腫瘤M2-PK 檢測水平

結(jié)腸癌組患者血漿腫瘤M2-PK 的平均水平為（46.39±5.68）（12.28 ～77.55）U/mL，結(jié)腸腺瘤組患者的血漿腫瘤M2-PK 的平均水平為（8.02±1.64）（3.61 ～16.23）U/mL，正常組患者血漿腫瘤的M2-PK 平均水平為（7.49±1.84）（2.44 ～16.97）U/mL，三組間數(shù)據(jù)比較，結(jié)腸癌組的血漿腫瘤M2-PK 水平高于結(jié)腸腺瘤組與正常組（P＜0.05），但結(jié)腸腺瘤組與正常組患者相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2 結(jié)腸癌組血漿腫瘤M2-PK 水平

通過數(shù)據(jù)比較可知，與Dukes A+B 期、Dukes C 期相比，Dukes D 期患者的血漿腫瘤M2-PK 平均水平更高（P ＜0.05），且與Dukes A+B 期相比，Dukes C 期患者的血漿腫瘤M2-PK水平更高（P＜0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的血漿腫瘤M2-PK水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義。見表1。

2.3 結(jié)腸癌組腫瘤M2-PK 與CEA 檢測敏感性、特異性與陽性預測值比較

結(jié)腸癌組的血漿腫瘤M2-PK 診斷敏感性為80.8%（42/52），特異性為96.0%（190/198），陽性預測值為84.0%（42/50）；而CEA 的診斷敏感性為57.1%（40/70），特異性為94.4%（170/180），陽性預測值為80.0%（40/50）；比較數(shù)據(jù)可知，血漿腫瘤M2-PK 的敏感性、特異性與陽性預測值均高于CEA，其中，敏感性比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），特異性與陽性預測值比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 結(jié)腸癌組血漿腫瘤M2-PK 水平（U/mL，±s）

表1 結(jié)腸癌組血漿腫瘤M2-PK 水平（U/mL，±s）

指標 Dukes 分期 淋巴轉(zhuǎn)移A+B 期 C 期 D 期 有 無M2-PK 21.55±5.35 51.37±5.22 70.47±5.78 57.22±5.45 21.45±5.19

3 討論

在當前背景下，我國結(jié)腸癌的早期診斷仍舊處于一個較為滯后的水平。據(jù)臨床統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，約有1/3 的結(jié)腸癌患者在明確診斷時，病情已經(jīng)發(fā)展到進展期。針對于這種情況，積極探究出一種不具備侵入性[6]，但卻快速、經(jīng)濟、方便、有效的檢測方法對于結(jié)腸癌的早期篩查與診斷具有十分重要的意義。

與正常增生細胞相比，腫瘤細胞的代謝狀態(tài)具有較大的不同。這主要是由于腫瘤細胞的糖酵解與谷氨酞胺降解能力較強，可以為腫瘤細胞在血供差，或者是葡萄糖與氧供強烈變化環(huán)境下的生存提供十分有力的條件[7]。而這一過程離不開多種酶與同工酶的共同參與，丙酮酸激酶（PK）發(fā)揮著非常重要的作用，而同工酶則可以分為四種不同的類型，在一般情況下，其存在形式主要表現(xiàn)為酶的活性四聚體，此次研究中的M2-PK 一方面可以從二聚體形式轉(zhuǎn)化為四聚體形式，由弱活性轉(zhuǎn)化為強活性（反之亦可），另一方面還能夠在一定程度上抑制細胞的死亡[8-9]。除此之外，當人體出現(xiàn)惡性腫瘤時，由于腫瘤組織內(nèi)的部分癌蛋白基因可以加快M2-PK 由四聚體型向二聚體型的轉(zhuǎn)化，因此一旦體內(nèi)發(fā)生腫瘤，就會伴隨M2-PK 亞型的轉(zhuǎn)化情況發(fā)生，而四聚體型減少，甚至消失[10]；二聚體型也會相應的表達上調(diào)，此過程中的二聚體型M2-PK 也就是指腫瘤M2-PK[11]。

此次研究結(jié)果表明，與結(jié)腸腺瘤組相比，結(jié)腸癌組腫瘤M2-PK 水平更高（P＜0.05），且與正常組相比，結(jié)腸癌組腫瘤M2-PK 水平更高（P＜0.05），但結(jié)腸腺瘤組與正常組相比腫瘤M2-PK 水平無差異（P＞0.05）；與結(jié)腸癌組Dukes A、B 期患者相比，Dukes C、D 期患者腫瘤M2-PK 水平更高（P＜0.05），且與無淋巴轉(zhuǎn)移者相比，淋巴轉(zhuǎn)移者M2-PK 水平更高（P＜0.05）。從結(jié)腸癌診斷敏感性來看，腫瘤M2-PK為80.8%，CEA 為57.1%，前者更高。該結(jié)果提示，臨床上通過血漿腫瘤M2-PK 可以更加診斷結(jié)腸癌，且與CEA 相比具有更高的敏感性，與腫瘤的臨床病理分期有著十分密切的聯(lián)系，可以為疾病的進展監(jiān)測提供有價值的參考依據(jù)[12-13]。

綜上所述，腫瘤M2-PK 在結(jié)腸癌的臨床診斷過程中具有較高的敏感性，可以作為結(jié)腸癌早期篩查與診斷的一種高效檢測手段。在本次研究中，由于研究樣本數(shù)量有限，因此在今后相關(guān)方面的研究中還需要納入更多的病例，從而使研究結(jié)論更具普遍性。另外，隨著我國分子生物技術(shù)水平的不斷提高，為相關(guān)臨床研究提供了一個診斷及治療結(jié)腸癌的新途徑，在未來的發(fā)展過程中可以在腫瘤M2-PK 檢測基礎上通過篩查檢測癌基因突變，為我國腫瘤的早期臨床診斷與治療提供更加可靠的途徑與方法。