血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的運用研究

林麗華 盧愛薇 吳秀珍 馬菲菲 黃紹娥

地中海貧血是臨床貧血疾病中較為常見的一種，是常見的常染色體隱性遺傳病之一[1]。該病發(fā)病機制較為復雜，可能與肽鏈合成障礙、珠蛋白基因缺失等因素相關，但具體發(fā)病機理不明。地中海貧血患者血紅蛋白存在一定的異常，因結構改變而導致溶血[2]?；颊咴诤暧^癥狀上主要表現(xiàn)為肝脾腫大、溶血性貧血、高膽紅素血癥等[3]。地中海貧血目前臨床上尚缺乏有效的治療方法，早期診斷并予以干預具有關鍵性意義。通過產(chǎn)前篩查疾病患者是臨床最重要的措施之一?；驒z測雖然具有較好的效果但檢測費用昂貴，檢測流程繁瑣，難以在臨床上普及。血紅蛋白電泳儀可以測定血液中血紅蛋白A（hemoglobin A，HbA）、血紅蛋白A2（hemoglobin A2，HbA2）、血紅蛋白F（hemoglobin F，HbF）等含量，從而辨別患者的異常并進行分型診斷。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入我院2019 年1—12 月收治的200 例接受地中海貧血篩查的患者。患者男性76 例，女性124 例，年齡22 ～74 歲，平均年齡（50.4±4.6）歲，BMI 8.2 ～22.4 kg/m2，平均病程（20.3±1.4）kg/m2。本研究經(jīng)我院倫理委員會審批通過。本研究經(jīng)患者同意。

1.2 納入與排除

納入：（1）患者臨床上存在紅細胞平均體積減少或平均血紅蛋白量降低，病歷完整。（2）地中海貧血攜帶家庭。（3）產(chǎn)前孕婦及丈夫接受地中海貧血篩查。排除標準：（1）合并惡性腫瘤疾病的患者。（2）合并嚴重的凝血功能障礙性疾病患者。（3）合并嚴重精神障礙性疾病的患者。（4）合并傳染性肝炎或肝硬化的患者。（5）合并缺鐵性貧血的患者。

1.3 方法

對所有納入對象抽取空腹靜脈血于抗凝管，加入枸櫞酸鈉抗凝劑抗凝并采用美國伯樂D-10 血紅蛋白測試系統(tǒng)進行檢測，檢測過程中采用配套試劑盒測定HbA、HbA2 以及HbF 的含量，檢測的過程嚴格按照說明書的相關規(guī)定進行，對于沒有及時進行檢測的標本需要妥善放置于4℃環(huán)境下保存并在次日完成檢測。

1.4 觀察指標

觀察不同性別地中海貧血患者篩查結果；對比不同地中海貧血表型中Hb 含量情況。

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件，計量資料采用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用（%）表示，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同性別地中海貧血患者篩查結果

200 例篩查患者中共檢測出56 例患者地中海貧血患者其中α地中海貧血20 例（10.00%），β 地中海貧血26 例（13.00%），混合地中海貧血3 例（1.50%），其他血紅蛋白病7 例（3.50%）。見表1。

2.2 不同地中海貧血表型中Hb 含量比較

α 地中海貧血患者HbA 高于混合地中海貧血和其他血紅蛋白病（P＜0.05）；β 地中海貧血患者HbA2 高于α 地中海貧血、混合地中海貧血和其他血紅蛋白?。≒＜0.05）；混合地中海貧血患者HbF 高于α 地中海貧血、β 地中海貧血和其他血紅蛋白?。≒＜0.05），見表2。

3 討論

貧血是臨床常見的疾病，根據(jù)貧血的病理機制不同可以分為紅細胞生成減少性貧血、紅細胞破壞過多性貧血、紅細胞丟失過多性貧血等。根據(jù)紅細胞的形態(tài)分類，貧血又可以分為大細胞性貧血、正常細胞性貧血、單純小細胞性貧血以及小細胞低色素性貧血等。不同的貧血臨床特點存在差異，臨床治療的重點也不同，治療后疾病的預后、轉歸也不一樣。地中海貧血是臨床常見的遺傳性貧血疾病，主要由珠蛋白鏈合成失衡導致患者出現(xiàn)體內(nèi)溶血，患者體內(nèi)正常血紅蛋白生成減少，因而該貧血屬于小細胞低色素性貧血。地中海貧血患病人數(shù)較多，人群危害性較大，嚴重危害患者的健康狀況和生活質(zhì)量。從區(qū)域發(fā)病特點上看，地中海貧血好發(fā)于長江以南地區(qū)，尤其是廣東、廣西地區(qū)的人群高發(fā)，其中廣西地區(qū)基因攜帶率高達20.00%。地中海貧血的發(fā)病特點為不完全隱性遺傳，具體地講，兩個表現(xiàn)為輕度癥狀的隱性攜帶者可以通過遺傳將地中海貧血的致病基因共同傳遞于后代個體，導致后代出現(xiàn)重型的地中海貧血，嚴重者可以出現(xiàn)早期死亡風險。輕型的地中海貧血患者癥狀表現(xiàn)不明顯，生活各方面受到的影響較?。浑S著年齡的增長癥狀表現(xiàn)可以逐漸加重，可以出現(xiàn)缺氧、呼吸困難、面色蒼白、氣促等癥狀，此時患兒生活所受到的影響較大。重型的地中海貧血患兒往往表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大、智力障礙、性成熟障礙等。脾大是重型地中海貧血患兒的重要表現(xiàn)，而肝臟腫大早期主要由于髓外造血導致，晚期主要由于含鐵血黃素沉積導致肝硬化和肝細胞結節(jié)性增生形成。部分患兒因骨骼發(fā)育異常面部表現(xiàn)為眼距增寬、鼻梁低平、額頭突出、頭部大等，嚴重的骨骼發(fā)育缺陷可以出現(xiàn)病理性骨折。同時在出生后2 d 內(nèi)死亡，給患兒家庭帶來嚴重的精神和經(jīng)濟負擔，尤其對產(chǎn)婦的傷害十分明顯。過剩的珠蛋白鏈可以在紅細胞內(nèi)聚集形成不穩(wěn)定的產(chǎn)物從而導致紅細胞壽命縮短。臨床上根據(jù)地中海貧血的珠蛋白鏈合成失衡情況大致將該疾病分為α 地中海貧血、β 地中海貧血等主要類別，其中α 地中海貧血代表α 基因缺陷，患者體內(nèi)α 珠蛋白鏈合成減少，體內(nèi)多余的β 珠蛋白鏈相互聚合形成地中海貧血（HbH）并導致血紅蛋白的結構出現(xiàn)異常。相類似的，β 地中海貧血代表β 基因缺陷，患者體內(nèi)β 珠蛋白合成減少，體內(nèi)多余的α 珠蛋白鏈相互聚合并導致血紅蛋白的結構出現(xiàn)異常。當體內(nèi)α 珠蛋白鏈完全缺失的情況下，體內(nèi)多余γ 鏈將進一步聚合，使得HbA2、HbA 以及HbF 等含量減少。異常結構的珠蛋白在通過機體重要組織間隙的過程中容易受到破壞，導致患者出現(xiàn)溶血性貧血。目前地中海貧血缺乏有效的治療方法，早期通過針對并及時治療干預減少重型地中海貧血患者的出現(xiàn)是臨床工作的重點。因而有效、迅速的檢測方法對于疾病的診斷十分關鍵。不可否認，基因診斷技術通過檢測地中海貧血相關的致病基因可以對高?；颊哌M行診斷，但檢測的費用非常昂貴，檢測流程較為繁瑣且耗費時間較長，對儀器設備的要求較高，因而這種方法無法在基層醫(yī)院開展應用。而血紅蛋白電泳分析通過利用實驗室常用的診斷設備分離、鑒別患者體內(nèi)異常血紅蛋白的情況，從而為疾病診斷提供重要的參考信息。既往傳統(tǒng)采用醋酸纖維薄膜電泳法進行血紅蛋白電泳，檢測過程需要對紅細胞進行多次的洗滌處理，制作血紅蛋白液并予以點樣、電泳，而后剪取電泳區(qū)帶，并且浸泡出紅細胞液，通過比色步驟后對各類Hb 含量進行計算。這種檢測方法雖然具有一定的效果，但總體上監(jiān)測結果容易受到技術條件、操作者經(jīng)驗、試驗條件等多種因素的制約，導致檢測結果受影響。相比之下，全自動血紅蛋白電泳系統(tǒng)通過采用自動化的檢測程序?qū)ρt蛋白的含量進行檢測，檢測過程中點樣、染色、電泳等步驟完全自動化，不易受到外界因素的干擾且完好地避免了人為因素對檢測結果的影響，具有較高的檢測準確性和分辨率。全自動化的電泳檢測使得漏診率降低，同時契合該病臨床特征，在檢測過程中對孕婦本身的影響較小，臨床應用價值更高[4]。本研究探討血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的運用與結果。結果表明，200 例篩查患者中共檢測出56 例患者地中海貧血患者。α 地中海貧血患者HbA 高于混合地中海貧血和其他血紅蛋白?。≒＜0.05）；β 地中海貧血患者HbA2 高于α 地中海貧血、混合地中海貧血和其他血紅蛋白?。≒＜0.05）；混合地中海貧血患者HbF 高于α地中海貧血、β 地中海貧血和其他血紅蛋白?。≒＜0.05）。結合研究結果進行分析，作為一種臨床常見的遺傳性溶血性疾病，珠蛋白基因缺陷以及后續(xù)的基因表達異常是導致一系列癥狀的重要原因。通過有效的血紅蛋白檢測可以早期對患者進行診斷并采取措施進行疾病干預。血紅蛋白檢測的意義重在預防重型地中海貧血患兒的出現(xiàn)，因而女性孕期的地中海貧血相關篩查項目十分重要，而血紅蛋白電泳是其中一項非常有效的檢測方法，通過檢測患者體內(nèi)異常的Hb 可以對相應的疾病類型進行鑒別[5-6]。從本研究的相關結果看，不同類型的地中海貧血血液中檢測的各種血紅蛋白含量存在差異，這可以作為臨床分類診斷的重要標準[7-8]。值得注意的是雖然目前許多地區(qū)在應用血紅蛋白電泳篩查的過程中取得的效果較為顯著，但后續(xù)臨床及相關醫(yī)療研究工作需要進一步研究更加高效的檢測方法對該疾病的診斷治療進行突破，長期止步不前可能隨著基因的變化而可能對檢測結果帶來一定的影響[9-10]。今后需要進一步提升血紅蛋白電泳儀器設備的性能，提高檢測的準確度，縮短檢測時間，完善篩查體系，最大限度地縮小疾病對患者生活的影響[11-12]。

表1 不同性別地中海貧血患者篩查結果

表2 不同地中海貧血表型中Hb 含量比較（%， ±s）

表2 不同地中海貧血表型中Hb 含量比較（%， ±s）

疾病類別 HbA HbA2 HbF α 地中海貧血 93.17±2.54 1.49±0.38 1.09±0.22 β 地中海貧血 91.65±4.07 5.12±1.03 3.45±1.25混合地中海貧血 72.36±18.49 1.51±0.89 5.32±1.87其他血紅蛋白病 54.18±28.31 2.07±1.48 1.08±0.54 F 值 17.196 39.188 24.233 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

綜上所述，血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的應用價值顯著，通過全自動化的血紅蛋白電泳檢查可以有效避免外界因素對檢測過程的干擾，提高檢測結果的穩(wěn)定性，可以根據(jù)Hb 的含量對地中海貧血的疾病進行分類，并對重型地中海貧血患者的預防具有重要的意義。血紅蛋白電泳操作便捷、經(jīng)濟、高效。