GC-MS法測定廣藿香油中塑化劑的含量

王斌，梁偉龍，林欽賢，張華勇，康志英

(1.廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663；2.四川香雪制藥有限公司，四川 南充 637000；3.寧夏隆德縣六盤山中藥資源開發(fā)有限公司，寧夏 固原 756300)

鄰苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)，又稱酞酸酯，是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱，主要作為增塑劑(塑化劑)使用，添加到塑膠中以增強彈性、透明度、耐用性和使用壽命，鄰苯二甲酸二辛酯(DEHP)為其最重要的品種[1]。PAEs在多種產(chǎn)品中使用，例如玩具[2]、食品包裝材料[3]、藥品[4-8]、化妝品[9-10]、洗滌劑[11]等?，F(xiàn)代研究表明：PAEs具有高穩(wěn)定性、低揮發(fā)性，易擴散到空氣、飲用水、土壤或與之接觸的物品中，可通過呼吸、皮膚接觸和飲食等途徑進入人體，改變人體雌激素水平，導致細胞突變、致畸、內分泌失調、生殖系統(tǒng)及腎臟損害等[12]。

廣藿香油，別名百秋李油，為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香[Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分提取的揮發(fā)油[13]，為廣藿香的主要有效成分。目前市場上出售的廣藿香油以塑料瓶或桶裝為主，鄰苯二甲酸酯類塑化劑在包裝、運輸、儲存過程中的遷移是一個安全隱患，但關于廣藿香油中塑化劑的檢測研究較少，因此，本文基于采用氣相色譜-質譜(GC-MS)聯(lián)用技術，建立一種操作簡便、靈敏度高、檢測限低、準確性高的廣藿香油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 QP2010 Ultra型氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(日本島津公司)；DB-5MS毛細管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，安捷倫科技有限公司)；XS-204型萬分之一電子天平、MX5型百萬分之一電子天平(梅特勒-托利多國際貿(mào)易有限公司)；KQ-500VDE型超聲波發(fā)生器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52CS型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-88型恒溫振蕩器(常州恒德儀器制造有限公司)；TDZ5-WS型離心機(上海喬躍電子有限公司)；TC-15型電熱套(海寧市新華醫(yī)療器械廠)；XH-D型調速旋渦混合器(無錫沃信儀器有限公司)。

1.2 材料 鄰苯二甲酸二甲酯(DMP，純度：99.2%)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP，純度：99.9%)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP，純度：99.7%)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP，純度：98.9%)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP，純度：99.9%)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP，純度：97.9%)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP，純度：98.5%)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP，純度：96.6%)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP，純度：98.3%)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP，純度：98.4%)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP，純度：98.4%)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP，純度：99.8%)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP，純度：99.5%)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP，純度：95.4%)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP，純度：98.5%)均購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；正己烷(Merck公司)；氦氣(深圳天藍工業(yè)氣體有限公司，純度≥99.999%)。市售廣藿香油及自提廣藿香油，經(jīng)廣州市香雪制藥股份有限公司康志英制藥高級工程師鑒定為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香 [Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 柱溫為程序升溫：初始溫度為60 ℃，保持1 min，之后以20 ℃·min-1升至220 ℃，再以5 ℃·min-1升至250 ℃，保持1 min，再以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持7.5 min；檢測器溫度為260 ℃，進樣口溫度為260 ℃；載氣：氦氣；流速1 mL·min-1；進樣方式：自動，不分流進樣；進樣量：1 μL；電離方式：電子轟擊源(EI)；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；采集模式：選擇離子掃描模式(SIM)；離子源電壓：70 eV；溶劑延遲：7 min。15種鄰苯二甲酸酯類塑化劑質量濃度為1 mg·L-1的GC-MS總離子流圖見圖1，其具體的定性和定量離子見表1。

圖1 15種PAEs GC-MS總離子流圖 注：15種鄰苯二甲酸酯標準溶液的出峰順序依次為：1-DMP、2-DEP、3-DIBP、4-DBP、5-DMEP、6-BMPP、7-DEEP、8-DPP、9-DHXP、10-BBP、11-DBEP、12-DCHP、13-DEHP、14-DNOP、15-DNP

表1 15種PAEs的定性和定量離子

2.2 混合標準儲備溶液的制備 精密稱取上述15種標準品各約0.1 mg，用正己烷配制成濃度為10 mg·L-1的儲備液，于4 ℃冰箱中避光保存，備用。

2.3 標準系列溶液的制備 將上述標準儲備液，用正己烷稀釋至每1 mL分別含0.05、0.1、0.3、0.5、1.0 mg的標準系列溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備 取本品溶液約2 g，精密稱定，置50 mL具塞反應管中，加入2 mL蒸餾水，渦旋混勻，再準確加入正己烷20 mL，渦旋1 min，劇烈振搖1 min，超聲提取30 min，1 000 r·min-1離心5 min，取上清液轉移至錐形瓶中，于40 ℃下蒸干，轉移至1 mL量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，0.22 μm濾膜濾過，即得。

2.5 線性范圍 取“2.3”項下的15種PAEs的混合標準溶液，按照“2.1”項下色譜條件進行分析。試驗采用逐級稀釋的方法，以信噪比(S/N)等于3，進樣量為1 μL時計算方法的檢出限，以峰面積(Y)對溶度(X)進行線性回歸。15種PAEs的回歸方程和線性范圍見表2。

表2 15種PAEs的回歸方程和檢出限

2.6 精密度試驗 取“2.3”項下濃度為1.0 mg·mL-1混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，重復進樣6次，記錄各成分的峰面積。結果顯示15種PAEs的峰面積RSD均小于2.0%，說明儀器精密度良好。

2.7 加標回收率試驗 為驗證方法的準確性，對陰性樣品進行了0.05、0.3 mg·L-12個劑量的加標回收試驗，每個加標水平分別進行了6次的平行試驗，計算平均回收率及相對標準偏差，結果見表3。

表3 15種PAEs加標回收率結果(n=6)

2.8 測定法 將不同來源的廣藿香油按“2.4”項下的方法制備供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件進行分析，其計算公式如下：

式中：W-樣品含量(mg·kg-1)；C-樣品溶液中塑化劑的濃度(mg·L-1)；Co-方法空白中塑化劑的濃度(mg·L-1)；V-樣品溶液的體積(mL)；f-稀釋倍數(shù)；m-樣品的質量(g)。

表4試驗結果顯示：市售廣藿香油中，除S3及S7未檢測到塑化劑外，其余批次均有不同程度的檢出，其中S1檢出DBP為0.042 mg·kg-1，S2檢出DBP為0.058 mg·kg-1，S6檢出DEHP為0.035 mg·kg-1，根據(jù)原衛(wèi)生部辦公廳關于通報食品及食品添加劑鄰苯二甲酸酯類物質最大殘留量的函[14]規(guī)定：DEHP、DINP、DBP最大殘留量分別為1.5、9.0和0.3 mg·kg-1，以上檢測的3批次的廣藿香油塑化劑的殘留量均符合規(guī)定；而在自提廣藿香油中均未檢出塑化劑，結果提示市售塑料瓶裝廣藿香油的塑化劑在儲存過程中的遷移可能是其污染的途徑之一。

表4 塑化劑檢測結果(n=3)

3 結論與討論

PAEs一般呈無色透明油狀黏稠液體，水溶性低，水解慢，易溶于有機溶劑和類脂[15]，提取溶劑常用正己烷、甲醇等，但甲醇的極性較大，提取的雜質較多，存在一定困難，本試驗考察了索氏提取、超聲提取、液-液萃取、固相萃取等提取方式，發(fā)現(xiàn)超聲提取分離率高，提取時間短，因此本試驗選擇正己烷超聲提取。另外，試驗前必須對檢測試劑、玻璃制品、超純水系統(tǒng)等進行凈化處理，并且在測定試劑空白時，進行比較和扣除。

農(nóng)藥殘留、提取工藝、包裝材料、運輸儲存過程中塑化劑的遷移可能是中藥油脂污染的重要來源[15]，因此建立中藥油脂有效合理的安全性評價方法及限度至關重要。PAEs危害嚴重，但在目前實際生產(chǎn)和生活中尚不能完全離開它們，如何減少或去除PAEs的污染已經(jīng)成為科學工作者亟待解決的問題。