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    亞輝龍iflash3000A化學發(fā)光儀檢測乙肝病毒血清標志物性能評價〔1〕

    2021-04-19 08:37:30閆慧李鵬韓素麗杜園園杜薇陳臘段劉夢李曼李錦豪
    臨床醫(yī)藥實踐 2021年3期
    關(guān)鍵詞:測量范圍正確度化學發(fā)光

    閆慧,李鵬,韓素麗,杜園園,杜薇,陳臘,段劉夢,李曼,李錦豪

    (1.長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院,山西 長治 046000;2.長治醫(yī)學院,山西 長治 046000)

    乙型肝炎病毒(HBV)是一種嗜肝脫氧核糖核酸病毒,屬于包膜病毒。現(xiàn)用于臨床的病毒標志物有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗體(抗-HBs)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)[1]。目前,臨床實驗室檢測此類標志物常用的方法有酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法等[2]。近幾年,國產(chǎn)化學發(fā)光儀在檢測性能上與傳統(tǒng)的進口化學發(fā)光儀縮小了差距。本文通過評價亞輝龍iflash3000A型化學發(fā)光儀對HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc等項目的檢測性能,并與雅培i2000化學發(fā)光儀進行結(jié)果間的比對,驗證iflash3000A的檢測能力。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    亞輝龍iflash3000A化學發(fā)光儀及配套乙型肝炎血清標志物試劑:HBsAg(試劑批號:20190201)、抗-HBs(試劑批號:N1081481/N0596194)、HBeAg(試劑批號:N0596046)、抗-HBe(試劑批號:B32541/B32541)、抗-HBc(試劑批號:B31945/B31945)。試劑均在有效期內(nèi)使用。

    1.2 樣本采集

    隨機選取門診及健康體檢者血清樣本。無菌操作抽取靜脈血4 mL于無抗凝劑采血管中,靜置30 min后3 000 r/min離心10 min,取上清液待測。剔除溶血、脂血、黃疸等可能干擾反應結(jié)果的樣本。

    1.3 方法

    1.3.1 精密度驗證

    1.3.2 分析測量范圍驗證

    用測量范圍下限低值樣本(L)等間距稀釋測量范圍上限的高值樣本(H),制備出6個不同濃度樣本,每份樣本重復測定2次,計算出測定均值,與理論濃度計算出線性回歸方程:y=ax+b,并計算線性相關(guān)系數(shù)r。判定標準:a為0.97~1.03,線性相關(guān)系數(shù)r≥0.975(或r2≥0.95)[4]。

    1.3.3 正確度驗證

    正確度評價通過方法學比對來實現(xiàn),利用兩種方法的比對結(jié)果進行iflash3000A檢測系統(tǒng)的正確度評估。挑選40個新鮮血清樣本,樣本濃度在方法學的分析測量范圍內(nèi),并覆蓋醫(yī)學決定水平。將挑選的40個樣本隨機順序排列,分別在雅培i2000檢測系統(tǒng)(該儀器參加衛(wèi)生健康委員會臨檢中心室間能力評價)和iflash3000A檢測系統(tǒng)上完成測試。判定標準為符合率≥80%[5]。

    1.3.4 攜帶污染率驗證

    按廠家聲明的iflash3000A標準驗證方法,將分析測量范圍內(nèi)高濃度的新鮮血清樣本在儀器上測試兩次后取平均值,分裝后放置于1,2,3杯位置(H1,H2,H3);再取去離子水或生理鹽水放置于4,5,6杯位置(L1,L2,L3)。以上6份標本按順序連續(xù)進行檢測(從1到6)為一組,重復測定5組,計算攜帶污染率,攜帶污染率=(CL1-CL3)/(CH3-CL3)。判定標準:5組檢測的攜帶污染率均≤10-6。

    1.4 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS19.0軟件對精密度和分析測量范圍的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

    2 結(jié) 果

    2.1 精密度驗證

    各項目批內(nèi)精密度和批間精密度驗證結(jié)果均符合試劑說明書和CLSI EP15-A2文件要求,批內(nèi)精密度均≤7.5%,批間精密度均≤10%,結(jié)果見表1。

    表1 批內(nèi)和批間精密度(n=20)驗證結(jié)果

    2.2 分析測量范圍驗證

    因本研究的五個項目中,只有HBsAg和抗-HBs是定量分析項目,所以只對其檢測范圍進行了驗證,a在0.97~1.03范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)r均≥0.975(見表2)。

    表2 檢測項目的測量范圍驗證結(jié)果

    2.3 正確度驗證

    將iflash3000A 5個項目的檢測結(jié)果與i2000比對,總體符合率均≥80%,結(jié)果表明滿足正確度要求(見表3)。

    表3 正確度驗證結(jié)果

    2.4 攜帶污染率驗證

    HBsAg的攜帶污染率通過發(fā)光值表示,5組的攜帶污染率分別為2.0338×10-7,2.0338×10-7,0,2.0338×10-7,0,結(jié)果均≤10-6,滿足要求。

    3 討 論

    我國屬于乙型肝炎的高發(fā)國家,HBV感染后,在肝細胞內(nèi)進行復制,造成局部損傷。目前臨床主要采用血清標志物檢測來分析和判斷患者的病情及傳染性,HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc是臨床用來檢測HBV感染的重要血清學指標,能為乙型肝炎患者的病情判斷與病毒復制提供科學合理的依據(jù)[6]。iflash3000A化學發(fā)光儀利用抗原抗體反應的特異性和吖啶酯發(fā)光劑增強檢測信號的原理,實現(xiàn)對HBV血清標志物的自動化、快速化檢測。我們對iflash3000A化學發(fā)光儀進行了檢測項目的性能評價,以保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性。本次試驗按照廠家聲明,參考CLSI系列文件對HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc等項目的精密度、分析測量范圍、正確度、攜帶污染率等進行驗證,結(jié)果表明,iflash3000A化學發(fā)光儀基本可以滿足實驗室對以上項目檢測能力的要求。精密度驗證試驗中,5個檢測項目的批內(nèi)精密度的低值和高值水平均滿足CV≤7.5%;批間精密度的低值和高值水平均滿足CV≤10.0%。但需要注意的是,低值標本如濃度過低時,會出現(xiàn)CV異常增大的情況,應注意避免此類情況發(fā)生。分析測量驗證試驗中,HBsAg和抗-HBs的實際測量值與理論預期值線性回歸曲線滿足a在0.97~1.03內(nèi)、r2≥0.95的要求。在臨床實際工作中,HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc是按照定性試驗發(fā)放報告的,但iflash3000A化學發(fā)光儀可對HBsAg和抗-HBs的發(fā)光信號值進行連續(xù)監(jiān)測,其分析測量范圍的驗證仍是必須完成的。正確度驗證試驗中,按照定性試驗正確度驗證規(guī)則,對40 例陰性和陽性樣本進行的符合率驗證結(jié)果表明,iflash3000A檢測系統(tǒng)的定性結(jié)果與參與衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗中心能力比對的雅培i2000檢測系統(tǒng)的結(jié)果具有一致性,5個項目的符合率均≥80%,能夠滿足正確度驗證的要求。攜帶污染率驗證試驗中,通過對HBsAg攜帶污染率進行的5組驗證數(shù)據(jù)結(jié)果表明,iflash3000A的攜帶污染率較低,均≤10-6,可以有效避免樣本因含量不同造成的結(jié)果假陽性情況。

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