基于生物信息數(shù)據(jù)探究腎陰虛證病理機(jī)制*

彭菊琴，王攀，楊擴(kuò)，侯敏，3，高文靜，杜陽(yáng)，3，任鈞國(guó)

1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所／中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100091；2.北京交通大學(xué)計(jì)算機(jī)與信息技術(shù)學(xué)院，北京 100044；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)西苑臨床醫(yī)學(xué)院，北京 100029

證候是中醫(yī)藥理論體系中的核心部分，承接著中醫(yī)基礎(chǔ)理論與臨床治療，其具有內(nèi)在的聯(lián)系，能夠反映疾病過(guò)程中某一階段的病機(jī)，以及機(jī)體應(yīng)對(duì)致病因素和體內(nèi)外各種環(huán)境變化做出反應(yīng)的一種功能狀態(tài)，是對(duì)疾病當(dāng)前本質(zhì)的總結(jié)［1］。腎陰虛證是臨床常見(jiàn)證候之一，多見(jiàn)于骨質(zhì)疏松、2型糖尿病、原發(fā)性高血壓等疾?。?－4］。腎陰為一身陰氣之源，“五臟之陰氣，非此不能滋”。腎陰虧虛，則全身的臟腑、經(jīng)絡(luò)、形體、宮竅失養(yǎng)，而出現(xiàn)虛性亢奮癥狀。研究腎陰虛證病理機(jī)制有助于理解腎陰虛證，提高臨床辨證的準(zhǔn)確性。既往有關(guān)腎陰虛證實(shí)質(zhì)研究大多是采用“一病一證”，研究?jī)?nèi)容相對(duì)單一，缺乏多層次、多視角的研究。故本研究采用生物信息數(shù)據(jù)挖掘方法，得到骨質(zhì)疏松、2型糖尿病、原發(fā)性高血壓“三病”以及腎陰虛證“一證”的病證結(jié)合靶點(diǎn)，并進(jìn)行模塊分析，通路富集分析，以期揭示腎陰虛證的病理機(jī)制。六味地黃丸是經(jīng)典的中醫(yī)名方，在臨床上被廣泛應(yīng)用于治療各種腎陰虛證候，療效顯著［5］。故結(jié)合六味地黃丸－腎陰虛證方證結(jié)合靶點(diǎn)，對(duì)藥物成分進(jìn)行文獻(xiàn)挖掘，通過(guò)“以方測(cè)證”進(jìn)一步驗(yàn)證基于數(shù)據(jù)挖掘分析獲得的腎陰虛證病理機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 腎陰虛證癥狀靶點(diǎn)篩選根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）》［6］中腎陰虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)，采用SymMap（Symptom Mapping）［7］（http：／／www.symmap.org／）（select：P－value＜0.5）和人類(lèi)癥狀－疾病網(wǎng)絡(luò)（Human Symptoms－Disease Network，HSDN）數(shù)據(jù)庫(kù)［8］對(duì)腎陰虛證主要的中醫(yī)癥狀進(jìn)行檢索，獲得腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)。

1.2 疾病靶點(diǎn)篩選疾?。蚓W(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)（Disease－gene networks database，DisGeNET）（http：／／www.disgenet.org／）、治療靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)（Treatment of the target database，TTD）（http：／／systemsdock.unit.osit.jp／iddp／home／index），GeneCards數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：／／www.genecards.org／）和Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：／／www.drugbank.ca）對(duì)骨質(zhì)疏松、2型糖尿病和原發(fā)性高血壓3種疾病進(jìn)行搜索，檢索詞分別為“essential hypertension”“diabetes mellitus type 2”“osteoporosis”。DisGeNET和GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)靶標(biāo)篩選標(biāo)準(zhǔn)為score≥中值4倍，合并去重后分別得到骨質(zhì)疏松、2型糖尿病和原發(fā)性高血壓疾病靶點(diǎn)。

1.3 病證結(jié)合靶點(diǎn)篩選腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)分別與骨質(zhì)疏松、2型糖尿病和原發(fā)性高血壓3種疾病靶點(diǎn)取交集，獲得各自共同靶點(diǎn)，然后逐個(gè)導(dǎo)入PINA［9］（protein interaction network analysis platform，verson 3.0）平臺(tái)。PINA是蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫(kù)，包括來(lái)自IntAct、MINT、BioGRID、DIP、HPRD和MIPS／MPac 6個(gè)公共數(shù)據(jù)庫(kù)的蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)。使用PINA平臺(tái)分別檢索每個(gè)共同靶點(diǎn)的相互作用蛋白，將得到的互作蛋白通過(guò)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因名稱(chēng)的標(biāo)準(zhǔn)化，過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)為“Homo sapiens”和“Reviewed”，得到3種疾病的疾病靶點(diǎn)－腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)的互作蛋白數(shù)據(jù)集。對(duì)3種互作蛋白數(shù)據(jù)集取交集，獲得腎陰虛證病證結(jié)合靶點(diǎn)。

1.4 六味地黃丸化學(xué)成分篩選采用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）（http／／lsp.nwu.edu.cn.／tcmsp.php），中藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（Traditional Chinese Medicine Integrated Database，TCMID）（http：／／www.megabionet.org／tcmid／），中醫(yī)百科全書(shū)（Encyclopaedia of Traditional Chinese Medicine，ETCM）（http：／／www.tcmip.cn／ETCM／index.php／Home／Index／）和中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具（Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of TCM，BATMANTCM）（http：／／bionet.ncpsb.org／batman－tcm／）數(shù)據(jù)庫(kù)分別對(duì)熟地黃、山萸肉、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓進(jìn)行檢索，獲得化學(xué)成分相關(guān)信息。依據(jù)成分藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)（ADME），篩選口服生物利用度（OB）≥30%，類(lèi)藥性（DL）≥0.18藥物作為活性成分［10］。使用PubChem（https：／／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)化合物分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，根據(jù)PubChem CID進(jìn)行化合物名稱(chēng)的標(biāo)準(zhǔn)化和去重。

1.5 六味地黃丸成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)采用Swiss Target Prediction（http：／／www.swisstargetprediction.ch／），STITCH（http：／／stitch.embl.de／，version 4.0）和TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)六味地黃丸成分靶點(diǎn)。Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)和STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)檢索條件設(shè)置為“Homo sapiens”，Confidence score≥0.9或Probability≥0.9，TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)僅納入了經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的靶點(diǎn)。通過(guò)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后得到六味地黃丸成分靶點(diǎn)。

1.6 方證靶點(diǎn)篩選將得到的六味地黃丸成分靶點(diǎn)逐個(gè)導(dǎo)入PINA平臺(tái)，搜索成分靶點(diǎn)互作蛋白，通過(guò)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)化篩選后，獲得六味地黃丸成分互作靶點(diǎn)。將腎陰虛證病證結(jié)合靶點(diǎn)與六味地黃丸成分互作靶點(diǎn)取交集，獲得六味地黃丸－腎陰虛證的方證結(jié)合靶點(diǎn)。

1.7 模塊分析網(wǎng)絡(luò)模塊是指網(wǎng)絡(luò)中高度互連的節(jié)點(diǎn)集。通過(guò)模塊識(shí)別可以降低復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性，并避免網(wǎng)絡(luò)集成過(guò)程中的信息丟失，幫助發(fā)現(xiàn)和揭示網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的隱藏生物信息，是理解生物系統(tǒng)的關(guān)鍵方法之一［11－12］。采用PINA平臺(tái)內(nèi)置馬爾可夫聚類(lèi)（MCL）［13］方法分別對(duì)病證結(jié)合靶點(diǎn)以及方證結(jié)合靶點(diǎn)進(jìn)行關(guān)鍵模塊分析［14］。參數(shù)設(shè)置：選用Benjamini方法校正P值，F(xiàn)DR cutoff＜0.001，Minimum number ofmodules to return：10。然后使用PINA平臺(tái)分別對(duì)各個(gè)模塊進(jìn)行GO基因本體和KEGG通路分析，保留P＜0.001富集途徑。

1.8 文獻(xiàn)驗(yàn)證從中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）和PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)，分別對(duì)六味地黃丸中活性化學(xué)成分進(jìn)行檢索，通過(guò)檢索到的中藥成分的藥理作用機(jī)制對(duì)模塊分析結(jié)果進(jìn)行文獻(xiàn)挖掘驗(yàn)證。

2 結(jié)果

2.1 腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)腎陰虛證中醫(yī)癥狀包括11項(xiàng)，分別為腰膝酸軟、五心煩熱、心煩失眠、耳鳴、口干、咽干、盜汗、少津、頭暈、大便干結(jié)、舌紅。從SymMap數(shù)據(jù)庫(kù)獲得腎陰虛證癥狀靶點(diǎn)280個(gè)，HSDN數(shù)據(jù)庫(kù)獲得腎陰虛證癥狀靶點(diǎn)381個(gè)，合并去重得到腎陰虛證癥狀540個(gè)。各腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)分布情況見(jiàn)圖1。

圖1 腎陰虛證中醫(yī)癥狀靶點(diǎn)分布示意圖

2.2 骨質(zhì)疏松、2型糖尿病、原發(fā)性高血壓疾病靶點(diǎn)從DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)獲得骨質(zhì)疏松459個(gè)靶點(diǎn)，2型糖尿病6個(gè)靶點(diǎn)，原發(fā)性高血壓76個(gè)靶點(diǎn)；從GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)獲得骨質(zhì)疏松318個(gè)靶點(diǎn)，2型糖尿病1 119個(gè)靶點(diǎn)，原發(fā)性高血壓961個(gè)靶點(diǎn)，從TTD數(shù)據(jù)庫(kù)獲得骨質(zhì)疏松35個(gè)靶點(diǎn)，2型糖尿病82個(gè)靶點(diǎn)，原發(fā)性高血壓69個(gè)靶點(diǎn)；DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)獲得骨質(zhì)疏松50個(gè)靶點(diǎn)，2型糖尿病121個(gè)靶點(diǎn)，原發(fā)性高血壓180個(gè)靶點(diǎn)。合并去重后，得到骨質(zhì)疏松疾病靶點(diǎn)597個(gè)，2型糖尿病疾病靶點(diǎn)1 205個(gè)，原發(fā)性高血壓疾病靶點(diǎn)1 113個(gè)。

2.3 病證結(jié)合靶點(diǎn)將骨質(zhì)疏松、2型糖尿病、原發(fā)性高血壓3種疾病靶點(diǎn)分別與腎陰虛證癥狀靶點(diǎn)取交集，得到腎陰虛癥狀－骨質(zhì)疏松共同靶點(diǎn)53個(gè)，腎陰虛癥狀－2型糖尿病共同靶點(diǎn)151個(gè)，腎陰虛癥狀－原發(fā)性高血壓共同靶點(diǎn)142個(gè)。通過(guò)PINA平臺(tái)分別對(duì)3類(lèi)共同靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白互作分析，取交集后，得到1 061個(gè)病證結(jié)合靶點(diǎn)（見(jiàn)圖2）。

圖2 病證結(jié)合靶點(diǎn)及方證結(jié)合靶點(diǎn)篩選流程圖

2.4 六味地黃丸活性化學(xué)成分篩選與靶點(diǎn)預(yù)測(cè)六味地黃丸中的6味中藥分別從4個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得397個(gè)化合物成分，其中65個(gè)成分來(lái)自TCMSP，126個(gè)成分來(lái)自ETCM，93個(gè)成分來(lái)自TCMID，113個(gè)成分來(lái)自BATMAN－TCM。標(biāo)準(zhǔn)化后去重，獲得241個(gè)化合物靶點(diǎn)。熟地黃14個(gè)成分，山萸肉80個(gè)成分，山藥54個(gè)成分，茯苓56個(gè)成分，牡丹皮24個(gè)成分，澤瀉28個(gè)成分。其中13個(gè)成分為2個(gè)及以上中藥所共有（見(jiàn)圖3）。

圖3 六味地黃丸成分分布Upset圖

從Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)獲得124個(gè)成分靶點(diǎn)，STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)獲得232個(gè)成分靶點(diǎn)，TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得78個(gè)成分靶點(diǎn)，合并去重后得到365個(gè)成分靶點(diǎn)。通過(guò)PINA平臺(tái)進(jìn)行蛋白互作分析后，得到六味地黃丸成分互作靶點(diǎn)5 964個(gè)。

2.5 方證結(jié)合靶點(diǎn)將1 061個(gè)病證結(jié)合靶點(diǎn)與5 964個(gè)六味地黃丸成分互作靶點(diǎn)取交集后，得到方證結(jié)合靶點(diǎn)882個(gè)，其中方證結(jié)合靶點(diǎn)占病證結(jié)合靶點(diǎn)的百分比為83.1%（882／1 061）。

2.6 模塊分析病證結(jié)合靶點(diǎn)模塊分析，共得到11個(gè)有效關(guān)鍵模塊。方證結(jié)合靶點(diǎn)模塊分析，共得到10個(gè)有效的關(guān)鍵模塊，且均與病證結(jié)合模塊相同（見(jiàn)表1）。10個(gè)方證結(jié)合模塊GO功能富集的結(jié)果包括585個(gè)生物過(guò)程（BP），93個(gè)細(xì)胞成分（CC）和113個(gè)分子功能（MF）。10個(gè)方證結(jié)合模塊KEGG富集分析獲得45條KEGG途徑，主要聚焦于免疫相關(guān)（33.3%，15／45），還包括癌癥（17.8%，8／45），傳染性疾?。òú《?、寄生蟲(chóng)和細(xì)菌）（13.3%，6／45）、遺傳信息處理（13.3%，6／45）和細(xì)胞過(guò)程（8.9%，4／45）等（見(jiàn)圖4）。排名前10位的通路為細(xì)胞周期、核糖體、Jak－STAT信號(hào)通路、II型糖尿病、胰島素信號(hào)通路、醛固酮調(diào)節(jié)鈉的重吸收、RIG－I樣受體信號(hào)通路、NOD樣受體信號(hào)通路、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、DNA復(fù)制（見(jiàn)圖5）。

圖5 方證結(jié)合靶點(diǎn)富集分析

表1 病證結(jié)合靶點(diǎn)與方證結(jié)合靶點(diǎn)模塊分析

圖4 方證結(jié)合模塊的45條KEGG通路類(lèi)別頻率分布情況

2.7 文獻(xiàn)驗(yàn)證通過(guò)中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）和PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)，分別對(duì)六味地黃丸241個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行搜索，驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)6味中藥中共有34（14.1%）種成分具有調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、免疫因子的作用。見(jiàn)表2。

表2 六位地黃丸具有免疫炎癥調(diào)節(jié)功能的成分匯總表

續(xù)表2 六位地黃丸具有免疫炎癥調(diào)節(jié)功能的成分匯總表

3 討論

“異病同治”是指導(dǎo)臨床診療的重要法則，也是對(duì)證候靈活應(yīng)用的高度體現(xiàn)。在臨床中，疾病的因、位、癥、性等雖異，但具有相同的證候，則可采取相同的治療方法。腎陰虛證是臨床上常見(jiàn)的基本證型之一，基于腎藏象理論，中醫(yī)“腎”即腎—膀胱—骨髓—耳、二陰—發(fā)，是包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中腎、顱腦、卵巢子宮、女性生殖、男性生殖、耳、骨、前列腺、胰腺等多個(gè)器官的一個(gè)大的系統(tǒng)，而非單純解剖意義上的腎臟，故多種疾病均可表現(xiàn)腎陰虛證癥狀［63］。研究腎陰虛證的病理機(jī)制有助于增加對(duì)腎陰虛證的認(rèn)識(shí)，提高辨別腎陰虛證的準(zhǔn)確性，以便于指導(dǎo)臨床治療。

本研究方證結(jié)合靶點(diǎn)關(guān)鍵模塊的通路富集分析發(fā)現(xiàn)，33.3%通路與機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)。對(duì)排名前10位通路進(jìn)行分析：其中NOD樣受體和RIG－I樣受體均為先天性免疫系統(tǒng)識(shí)別受體，在多種類(lèi)型的細(xì)胞中廣泛表達(dá)，發(fā)揮檢測(cè)、抵抗病原體的侵襲，調(diào)節(jié)免疫，保護(hù)機(jī)體的作用［64］。NOD在細(xì)胞溶膠中一般是處于自抑制單體狀態(tài)，當(dāng)細(xì)菌肽聚糖（PGN）進(jìn)入細(xì)胞后，NOD能夠識(shí)別細(xì)菌細(xì)胞壁中保守PGN片段，并發(fā)生構(gòu)象變化，從而激活下游的NF－κB和MAPK信號(hào)通路，導(dǎo)致促炎因子分泌以及宿主防御基因的轉(zhuǎn)錄上調(diào)，而發(fā)揮促炎和抗微生物反應(yīng)［65］。NOD蛋白除了誘發(fā)固有免疫應(yīng)答中的作用外，還可以調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。NOD單獨(dú)刺激會(huì)產(chǎn)生以Th2依賴性的適應(yīng)性免疫反應(yīng)為主，而與TLR激動(dòng)劑共同刺激則會(huì)促進(jìn)Th1、Th2和Th17細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)［66－68］。RIG－I樣受體屬于胞質(zhì)宿主RNA解旋酶，能夠識(shí)別非自身RNA信號(hào)，觸發(fā)機(jī)體先天免疫應(yīng)答，如I型IFN以及促炎性細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，先天免疫細(xì)胞（DC，巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞，ILC和γ／δT細(xì)胞）激活，以及機(jī)體適應(yīng)性免疫反應(yīng)（B細(xì)胞、T細(xì)胞）［69－70］。排名前10位的JAK／STAT信號(hào)通路在免疫調(diào)節(jié)和宿主防御中同樣發(fā)揮著重要作用。各種I／II型細(xì)胞因子可與JAK亞基結(jié)合，導(dǎo)致特定JAK途徑的激活，從而啟動(dòng)細(xì)胞因子受體以及下游的一種或多種轉(zhuǎn)錄因子STAT磷酸化。例如通過(guò)介導(dǎo)IL－23和IL－6信號(hào)傳導(dǎo)，STAT3能夠誘導(dǎo)Th17分化；通過(guò)介導(dǎo)IL－2傳導(dǎo)信號(hào)，STAT5A／B促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化，增強(qiáng)Th1應(yīng)答；通過(guò)介導(dǎo)IL－7信號(hào)傳導(dǎo)，STAT5A／B增加B淋巴細(xì)胞生成等［71－72］。其中胰島素信號(hào)通路能夠刺激代謝過(guò)程增加，促進(jìn)T細(xì)胞養(yǎng)分吸收以及相關(guān)的糖酵解和呼吸功能，從而增強(qiáng)T細(xì)胞抗原特異性增殖和促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，以及針對(duì)流感病毒的抗原特異性免疫力［73］。方證結(jié)合靶點(diǎn)45條KEGG通路富集結(jié)果顯示，除了免疫相關(guān)通路，還包括癌癥（17.8%），傳染性疾病（13.3%，包括病毒、寄生蟲(chóng)和細(xì)菌）。癌癥與傳染性疾病發(fā)生發(fā)展也涉及固有免疫和適應(yīng)性免疫構(gòu)成的防御屏障異常。本研究結(jié)果提示，機(jī)體免疫功能異常是腎陰虛證的病理機(jī)制之一。

已有研究分別從不同的層面探討腎陰虛證病理機(jī)制，如全基因表達(dá)層面，IncRNA、miRNA和mRNA轉(zhuǎn)錄層面，也均發(fā)現(xiàn)多種疾病的腎陰虛證與免疫以及防御應(yīng)答功能相關(guān)，涉及JAK／STAT信號(hào)通路、胰島素信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等［2－3，74－76］。本研究共得到腎陰虛病證結(jié)合靶點(diǎn)1 061個(gè)，六味地黃丸－腎陰虛證方證結(jié)合靶點(diǎn)共882個(gè)，方證結(jié)合靶點(diǎn)數(shù)占病證結(jié)合靶點(diǎn)數(shù)83.1%，同時(shí)方證結(jié)合靶點(diǎn)模塊分析得到10個(gè)關(guān)鍵模塊均與病證結(jié)合關(guān)鍵模塊相同，提示六味地黃丸與腎陰虛證“方證相應(yīng)”。研究發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸具有調(diào)節(jié)免疫功能，能夠逆轉(zhuǎn)脾臟細(xì)胞增殖下降［77］，改善T細(xì)胞、B細(xì)胞的功能［78］，恢復(fù)Th1／Th2、Th1／Treg的平衡而發(fā)揮抗炎調(diào)節(jié)免疫功能［79］。進(jìn)一步通過(guò)文獻(xiàn)挖掘，發(fā)現(xiàn)六味地黃丸6味中藥中共有34（14.1%）種成分具有調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞和免疫因子的作用。固有免疫主要取決于遺傳因素，即“稟賦”，適應(yīng)性免疫則需要后天之精的充養(yǎng)來(lái)發(fā)揮正常功能。若腎陰陽(yáng)失衡，來(lái)自先天或者后天之精的腎陰化生減少，滋潤(rùn)濡養(yǎng)寧?kù)o的功能不足，抗御內(nèi)外邪氣能力相對(duì)太過(guò)，導(dǎo)致機(jī)體處于虛性亢奮，免疫功能過(guò)度激活，則會(huì)引發(fā)多種疾病。因此，本研究對(duì)方證結(jié)合靶點(diǎn)富集分析，以及對(duì)六味地黃丸成分的文獻(xiàn)挖掘，通過(guò)“以方測(cè)證”說(shuō)明免疫功能異常是腎陰虛證重要的病理機(jī)制之一。

方證結(jié)合模塊通路富集結(jié)果還包括遺傳信息處理過(guò)程（13.3%），如核糖體、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、DNA復(fù)制等，提示“腎陰”參與中心法則的全過(guò)程，即遺傳信息從DNA傳遞給RNA，再?gòu)腞NA傳遞給蛋白質(zhì)，完成遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯，以及遺傳信息從DNA傳遞給DNA，完成DNA復(fù)制。這是所有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物所遵循的法則，也貫穿了人體生長(zhǎng)發(fā)育。腎為“先天之本”，為生命之本原，腎藏精，主生長(zhǎng)、發(fā)育、生殖、臟腑氣化。由腎精分化而來(lái)的腎陰具有調(diào)控各臟腑形體官竅的生理機(jī)能，進(jìn)而調(diào)控機(jī)體精、氣、血、津液的新陳代謝及其能量轉(zhuǎn)化。中醫(yī)理論中有關(guān)“腎陰”生理功能解釋也與本研究結(jié)果相符，提示遺傳信息傳遞過(guò)程異常也可能是腎陰虛證的另一病理機(jī)制。

本研究通過(guò)對(duì)獲得“三病一證”靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集分析，并結(jié)合六味地黃丸“以方測(cè)證”，發(fā)現(xiàn)腎陰虛證病理機(jī)制以免疫功能紊亂為主，同時(shí)還可能伴隨遺傳信息傳遞過(guò)程異常。本研究結(jié)果為更加充分理解腎陰虛證病理機(jī)制提供理論依據(jù)。但是本研究結(jié)果是基于生物信息數(shù)據(jù)挖掘獲得，后期仍需要大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。