蛋雞脂肪肝出血綜合征及其分子機(jī)制的研究進(jìn)展

曾文惠，曾慶節(jié)，殷 超，楊小璇，王玉潔，茹 盟，劉佳婷，謝賢華，梁海平，魏 慶，黃建珍

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045)

蛋雞脂肪肝出血綜合征(fatty liver hemorrhage syndrome,FLHS)是影響全球養(yǎng)禽業(yè)的一種常見的營養(yǎng)代謝性疾病，由于能量攝入過高導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂肪過度沉積所引起。該病多發(fā)于產(chǎn)蛋高峰期的蛋雞，籠養(yǎng)雞是主要患病對象，發(fā)病后的雞通常表現(xiàn)為體質(zhì)量明顯增加、產(chǎn)蛋量突然下降及突然死亡。病理剖檢可見心、肝臟、肺臟等臟器表面有不同程度的脂肪沉積，肝臟腫大、發(fā)黃、表面有出血點，隨病情加重甚至?xí)鸶闻K破裂出血。近年來，隨著社會的發(fā)展，集約化養(yǎng)殖的規(guī)模不斷擴(kuò)大，F(xiàn)LHS發(fā)病率也呈逐年上升趨勢，正常情況下發(fā)病率一般為5%左右，嚴(yán)重時可高達(dá)30%，嚴(yán)重影響了蛋雞的生產(chǎn)，給養(yǎng)禽業(yè)造成極其嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于該病發(fā)病時難以覺察，常突然死亡，故實際生產(chǎn)中往往是預(yù)防大于治療?，F(xiàn)主要是從分子角度來分析FLHS的發(fā)病機(jī)理，旨在為FLHS的研究方向提供新的思路。

1 禽類脂質(zhì)代謝的特點

體內(nèi)存在的脂肪酸主要有3個來源：飲食攝入、脂肪組織生成和肝臟合成。大部分哺乳動物的脂肪酸都來自于脂肪組織的生成。而與哺乳動物不同，禽類脂質(zhì)代謝的主要器官是肝臟，其中70%的脂肪酸都來自于肝臟合成，5%來自脂肪組織，剩余部分則通過采食獲取[1]。禽類在攝食后，日糧中的脂類物質(zhì)在胰脂酶的作用下形成乳糜微粒(CM)被腸上皮細(xì)胞吸收入血，隨后低密度脂蛋白(LPL)作用于CM，使脂肪酸釋放并被肝臟吸收，之后以復(fù)合物的形式由極低密度脂蛋白(VLDLs)將其運出肝臟，運至循環(huán)系統(tǒng)，最終，經(jīng)LPL作用使血液中游離脂肪酸又進(jìn)入脂肪組織重新合成脂肪。蛋雞由于在產(chǎn)蛋階段需要大量的脂質(zhì)供應(yīng)來形成蛋黃，因此蛋雞FLHS的發(fā)病率往往高于肉雞。

正常情況下，肝臟中的脂質(zhì)代謝常處于一種動態(tài)平衡的狀態(tài)，而FLHS發(fā)生的實質(zhì)上就是這種平衡被打破，使得脂質(zhì)的合成遠(yuǎn)大于其分解，或者脂質(zhì)運輸障礙，最終導(dǎo)致脂肪沉積于肝臟。因此一旦有關(guān)脂質(zhì)合成、轉(zhuǎn)運和β-氧化等過程中的任何一個環(huán)節(jié)發(fā)生障礙，都會有引發(fā)FLHS的風(fēng)險。

2 FLHS的發(fā)病原因

關(guān)于FLHS產(chǎn)生的機(jī)理，一直以來學(xué)術(shù)界有多種討論。其中最為流行的有“二次打擊”學(xué)說和“多擊”理論。最早DAY等[2]提出了“二次打擊”學(xué)說，認(rèn)為FLHS的產(chǎn)生需要2個條件：肝臟內(nèi)的脂肪變性和脂質(zhì)的氧化應(yīng)激。該假說表示禽的脂代謝失衡與胰島素的功能障礙有很大聯(lián)系，禽類往往較哺乳動物更易于發(fā)生胰島素抵抗，發(fā)生胰島素抵抗后的禽體內(nèi)脂肪分解加劇，使得體內(nèi)游離脂肪酸含量隨之上升，引起肝細(xì)胞的通透性和線粒體功能的改變，脂質(zhì)的代謝失衡，導(dǎo)致過多脂肪蓄積于肝臟，大量脂肪在肝臟的長時間滯留而發(fā)生過氧化促使體內(nèi)的活性氧/氮自由基等活性氧族含量增多，從而使機(jī)體內(nèi)氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡，自由基超量聚積并作用于肝臟，進(jìn)一步損傷溶酶體、線粒體及肝臟細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性，破壞其生物膜，引發(fā)細(xì)胞的炎癥壞死，最終導(dǎo)致FLHS。其中，胰島素抵抗是FLHS產(chǎn)生的重要一環(huán)，目前被普遍認(rèn)為主要受到營養(yǎng)和遺傳因素的影響。

然而隨著研究的深入，“二次打擊”學(xué)說不再能充分解釋患病動物體內(nèi)發(fā)生分子及代謝變化。于是，在此基礎(chǔ)上“多擊”理論誕生了[3]。該理論認(rèn)為除胰島素抵抗和氧化應(yīng)激外，營養(yǎng)、激素、環(huán)境、遺傳、應(yīng)激、基因及表觀遺傳調(diào)控、腸道微生物等多種因素均可誘發(fā)FLHS。然而，對于現(xiàn)代集約化生產(chǎn)，其中管理、環(huán)境等因素可以得到較好控制，因此，營養(yǎng)因素是當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)中引起FLHS的主要原因。以下將對FLHS的幾種影響因素進(jìn)行歸納綜述。

2.1 營養(yǎng)因素

2.1.1日糧 日糧中能量/蛋白比是引起FLHS的主要因素，當(dāng)日糧中能量/蛋白配比不均衡時易引起FLHS。如高能低蛋白(high energy low protein，HELP)日糧，一方面由于高能日糧導(dǎo)致肝臟代謝負(fù)荷過大，無法代謝體內(nèi)過多脂肪酸，從而引起肝臟內(nèi)脂肪酸的堆積；另一方面，低蛋白致使機(jī)體內(nèi)沒有足夠的原料合成載脂蛋白，使脂類無法從肝臟運出，肝臟內(nèi)脂肪蓄積加重；而高蛋白低能日糧同樣也會引起FLHS，低能日糧使機(jī)體加大對氨基酸的代謝，其代謝產(chǎn)物加重肝臟負(fù)擔(dān)所致[4]。

2.1.2營養(yǎng)元素的缺乏 蛋氨酸與膽堿是體內(nèi)磷脂酰膽堿的前體物質(zhì)[5]，對于VLDL的合成是必不可少的。當(dāng)日糧中缺乏這兩種物質(zhì)時，VLDL合成受阻，導(dǎo)致脂質(zhì)蓄積于肝臟。甜菜堿、維生素B12/C/E等物質(zhì)由于參與膽堿的合成，故這些物質(zhì)的缺失也會造成肝臟脂肪沉積[6]。

2.1.3外源性藥物和添加劑的使用 外源性藥物和添加劑的使用在一定程度上也會影響FLHS的發(fā)展。比如四環(huán)素，它作為一種抑菌劑，其作用機(jī)理是通過抑制蛋白質(zhì)的合成來阻礙細(xì)菌的生長繁殖，但這種特性也抑制了脂蛋白合成，阻礙了脂質(zhì)從肝臟運出，造成脂肪在肝臟的大量堆積，故其濫用時易引發(fā)FLHS。而與此相反的是，二氫吡啶的添加則可引起血清中載脂蛋白的含量上升，促使脂質(zhì)從肝臟運出，減輕肝臟負(fù)擔(dān)[7]。

2.2 激素因素某些激素可調(diào)節(jié)脂質(zhì)分解與合成，如甲狀腺素、胰高血糖素、皮質(zhì)醇等激素可促進(jìn)脂肪分解，而胰島素、雌激素等激素可推動脂質(zhì)合成。其中蛋雞高發(fā)FLHS的一個重要原因就是體內(nèi)雌激素含量升高，一方面其刺激肝臟合成脂肪，一方面又可抑制肝臟中線粒體對脂質(zhì)的氧化，從而導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂質(zhì)含量急劇上升[8]。

2.3 環(huán)境因素飼養(yǎng)方式不合理易引發(fā)FLHS，比如雞舍內(nèi)密度過大，雞群由于缺乏運動空間而導(dǎo)致能量消耗下降引起的脂肪沉積，這種情況常見于集約化養(yǎng)殖場。高溫和應(yīng)激也易導(dǎo)致FLHS，高溫環(huán)境時由于需能少且此時甲狀腺素受抑制從而利于脂質(zhì)在體內(nèi)的堆積。應(yīng)激則主要是通過刺激糖皮質(zhì)激素的產(chǎn)生，從而促進(jìn)糖異生作用，推動脂質(zhì)合成[9]。

2.4 遺傳因素FLHS具有很強(qiáng)的遺傳相關(guān)性，比如蛋用種雞往往比肉用種雞的發(fā)病率高，節(jié)糧小型蛋雞比中型蛋雞發(fā)病率高。即使是相同的環(huán)境與飼喂條件，不同品種或品系的雞肝臟內(nèi)的脂肪沉積程度也會不同。種系或是個體間遺傳狀態(tài)的不同，往往代表了其對FLHS易感程度的不同。

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2.5 其他因素誤食重金屬、毒物、霉變的飼糧時也會引起FLHS，汞、鉛、砷等重金屬通過抑制蛋白質(zhì)合成從而促進(jìn)FLHS的產(chǎn)生。毒物和霉變則主要通過損害肝臟而使其功能受損，致合成脂蛋白的能力下降，造成肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積。另外，有研究表明腸道的微生物菌群也與FLHS的產(chǎn)生有一定的聯(lián)系，通過利用益生菌改善腸道環(huán)境可對該病起預(yù)防作用[10]。

3 FLHS形成的分子機(jī)制

FLHS形成的潛在分子機(jī)制有很多，大多相互交織，互為聯(lián)系。如AMPK和JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以及表觀遺傳調(diào)控等都涉及其中。

3.1 AMPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路AMPK(AMP-activated protein kinase,AMPK)，全稱AMP激活的蛋白激酶，可整合來自全身各處的輸入調(diào)節(jié)能量的消耗與產(chǎn)出，維持代謝平衡，被稱之為“代謝的主開關(guān)”[11]。由于幾乎參與了生物體所有生理代謝的過程，故通常認(rèn)為FLHS的產(chǎn)生與AMPK信號通路有著密切聯(lián)系。AMPK活性由AMP/ATP調(diào)控，并由其上游的AMPK激酶(AMPKK)激活，在禽類中主要由LKB1進(jìn)行。PROSZKOWIEC等[12]研究表明，激活后的AMPK一般通過2種方式發(fā)揮作用。第1種是直接作用于代謝相關(guān)酶，通過調(diào)節(jié)酶活來控制代謝，如經(jīng)典的AMPK-ACC通路。乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)被AMPK磷酸化并滅活后會抑制脂肪酸的合成,同時導(dǎo)致丙二酸單酰輔酶A水平下降從而緩解了它對肉堿棕櫚酸轉(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)的抑制，促進(jìn)脂肪酸在線粒體中的氧化[13]。另一種是利用一些重要的轉(zhuǎn)錄因子影響代謝相關(guān)基因的表達(dá)，如AMPK-PPARα/HNF4α/SERBP1α。其中PPARα可通過介導(dǎo)體內(nèi)脂肪酸β-氧化相關(guān)酶的表達(dá)推動脂質(zhì)分解[14-15]。LIU等[16]研究發(fā)現(xiàn)高脂飲食可顯著下調(diào)AMPK的表達(dá)。DIHINGIA等[17]的研究表明通過高脂日糧飼喂的小鼠體內(nèi)ACC蛋白含量顯著上升，而當(dāng)經(jīng)過治療后小鼠ACC水平下降，說明ACC或許參與脂質(zhì)合成。而CHENG等[18]在研究高脂日糧誘導(dǎo)小鼠的非酒精性脂肪肝(NAFLD)時發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂甙元可通過上調(diào)AMPK表達(dá)從而減弱ACC活性，以達(dá)到預(yù)防NAFLD目的。以上結(jié)果表明AMPK確實可通過體內(nèi)的某些通路如AMPK-ACC來影響脂質(zhì)代謝，但多是針對以小鼠建立的模型為主。最近GAO等[19]用HELP日糧成功誘導(dǎo)了海蘭褐蛋雞FLHS模型，并經(jīng)研究指出FLHS蛋雞AMPK的mRNA及CPT1的mRNA較對照組表達(dá)量下降，而ACC、FAS、HMGR、HNF4α的mRNA表達(dá)量上升，暗示AMPK主要通過影響脂質(zhì)代謝中ACC、HMGR、FAS等相關(guān)酶的表達(dá)來影響脂質(zhì)在肝臟中的沉積。另外，受AMPK-SERBP1a、1c直接調(diào)控的Cidea基因最近也被研究證實在脂質(zhì)積累和誘導(dǎo)FLHS的過程中發(fā)揮重要作用[20-21]。近期，WANG等[22]在研究蛋雞脂肪肝模型的時候發(fā)現(xiàn)了與自噬及凋亡有關(guān)基因的異常表達(dá)。此前也有研究證明肝臟的損傷與自噬基因的失活有關(guān)[23]，表明自噬可能參與對肝臟的保護(hù)。mTOR作為AMPK通路的下游底物可抑制自噬，以AMPK-mTOR作為切入點，通過調(diào)控mTOR的表達(dá)也許可以為FLHS防治提供理論支持。

3.2 JAK-STAT信號通路JAK-STAT信號通路由酪氨酸激酶JAK、酪氨酸激酶相關(guān)受體及轉(zhuǎn)錄激活因子STAT共3部分組成，通過JAK-STAT的作用介導(dǎo)體內(nèi)某些細(xì)胞因子和生長因子(瘦素、IL-4、IL-6、IFN-γ等)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡、炎癥、免疫調(diào)節(jié)等生理過程。目前JAK家族有4種：JAK1-3、TYK2；STAT家族有7種：STAT1-4、STAT5A/B、STAT6。其作用機(jī)制為細(xì)胞因子與受體結(jié)合使得JAK發(fā)生自體磷酸化，JAK的激活使受體中的酪氨酸殘基也隨之磷酸化，STAT被招募至受體表面激活并以二聚體的形式轉(zhuǎn)移至核內(nèi)調(diào)節(jié)相應(yīng)靶基因的轉(zhuǎn)錄。該通路可受到SOCS、CIS、PTP等因子的影響。

STAT3作為JAK-STAT最重要的一員，常與體內(nèi)的各細(xì)胞因子和生長因子共同參與對體內(nèi)糖脂代謝的調(diào)節(jié)，此前大量的研究都證明了兩者間的關(guān)系。瘦素是脂肪組織中分泌的一種肽類激素，通過介導(dǎo)JAK2-STAT3促進(jìn)脂肪分解，抑制脂肪合成，維持肝臟內(nèi)的能量平衡。朱夢夢等[24]的研究表明化積健脾湯可通過上調(diào)瘦素受體(LepRb)、JAK2、STAT3的表達(dá)，下調(diào)SOCS-3、IL-6，通過調(diào)節(jié)JAK-STAT通路，改善瘦素抵抗，減少脂質(zhì)沉積。IL-6也是一種能量調(diào)節(jié)因子，IL-6/STAT3的組合被證實可改善體內(nèi)的脂肪沉積，緩解肝臟的脂肪變性。研究表明，長期的IL-6治療可通過激活STAT3上調(diào)Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡基因的表達(dá)，從而改善瘦素缺陷型的ob/ob小鼠及高脂飼喂、乙醇飼喂這3類小鼠脂肪變性程度，保護(hù)肝臟[25]。IL-6/STAT3還可通過影響胰島素抵抗參與脂質(zhì)代謝，但是積極還是消極影響目前仍有爭議[26-27]。IL-22是一種抗炎因子，也是一種重要的護(hù)肝因子。YANG等[28]研究指出，IL-22通過激活JAK1-STAT3可下調(diào)TG合成有關(guān)基因的表達(dá)，減緩脂肪沉積。祝娟娟等[29]研究表明，NAFLD小鼠經(jīng)藍(lán)莓與益生菌處理后，可抑制炎性因子的同時上調(diào)IL-22的表達(dá)，通過激活STAT從而下調(diào)SREBP-1c的表達(dá)，達(dá)到TG和膽固醇合成下降，改善肝臟炎癥及脂肪肝的目的。綜上，JAK可通過與細(xì)胞因子的合作參與對肝臟中脂肪代謝的調(diào)節(jié)。近期，ZHU等[30]通過對構(gòu)建的FLHS蛋雞與健康對照組的基因表達(dá)圖譜進(jìn)行比較，篩選出多個差異表達(dá)基因，其中IL-6、SOCS-3和CNTF被認(rèn)為可作為未來JAK-STAT中的潛在藥物靶點，通過抑制IL-6、SOCS-3及促進(jìn)CNTF的表達(dá)可增強(qiáng)胰島素作用和葡萄糖穩(wěn)態(tài)，緩解病癥。

3.3 表觀遺傳修飾與FLHS表觀遺傳學(xué)是近年來發(fā)展迅速的新興學(xué)科，它可在不影響基因序列的情況下通過DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控等表觀修飾來雙向改變基因表型。隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，由此也為FLHS致病機(jī)制的研究提供了新的視角。

3.3.2組蛋白修飾與FLHS 除DNA甲基化外，組蛋白修飾也可以影響脂質(zhì)的代謝。HU等[38]在往雞蛋注射甜菜堿時發(fā)現(xiàn)新生仔雞的肝臟內(nèi)AHCYL1、DNMT1的含量和H3K27me3水平出現(xiàn)了明顯波動，并伴隨著膽固醇代謝相關(guān)酶HMGCR、CYP7A1、ABCA1等的異常表達(dá)，證實甜菜堿可通過表觀遺傳修飾介導(dǎo)新生仔雞的膽固醇代謝。L-PK(L-型丙酮酸激酶)與NAFLD有著密切聯(lián)系，對細(xì)胞增殖和糖脂代謝有積極的推動作用。而ZHANG等[39]用黃連素飼喂NAFLD小鼠時L-PK啟動子的甲基化水平明顯下降，并且伴隨其周圍H3、H4(H3K9、H3K18、H4K8、H4K12等)的乙?；降娘@著上升，推動了L-PK的表達(dá)，加速了肝臟中糖脂類物質(zhì)的分解。此前還有大量研究表明異常的組蛋白修飾與Ⅱ糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)，易導(dǎo)致胰島素抵抗，進(jìn)而引發(fā)NAFLD[40]。并且研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD的產(chǎn)生往往與組蛋白的三甲基化修飾有著密切聯(lián)系，高脂飼喂的小鼠體內(nèi)H3K4me3、H3K9me3 水平的上升促進(jìn)了PPARα及其網(wǎng)絡(luò)周圍基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，進(jìn)一步加劇了脂質(zhì)堆積[41]。組蛋白修飾包括甲基化、乙?；⒎核鼗榷喾N修飾，其中乙?；揎椬顬閺V泛，受到HAT與HDAC的共同調(diào)控。LEE等[42]在研究中發(fā)現(xiàn)HAT與HDAC的不平衡會引起肝臟中基因表型的異常而導(dǎo)致肝功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致NAFLD。此外，在組蛋白的眾多修飾酶中研究較多的有P300(乙?；?和SIRT1、SIRT3(去乙?；?。P300主要介導(dǎo)與脂質(zhì)合成、糖酵解有關(guān)的ChREBP的乙?；ㄟ^上調(diào)其轉(zhuǎn)錄活性，誘發(fā)NAFLD。SIRT1、SIRT3都是屬于SIRTs家族的去乙?；D(zhuǎn)移酶，SIRT1主要發(fā)揮抗炎、抗高脂血、增強(qiáng)胰島素活性及調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)等作用。SIRT3則主要參與脂肪酸的氧化和維持線粒體的完整性。當(dāng)對小鼠特異性的敲除SIRT1或SIRT3后，小鼠表現(xiàn)出了脂肪變性、胰島素抵抗、高脂血癥、NAFLD、脂肪性肝炎等一系列癥狀[43]。由此可見，通過對特定組蛋白修飾酶的抑制與激活或許可為預(yù)防NAFLD或FLHS提供方向。

3.3.3microRNA與FLHS 近期非編碼小RNA調(diào)控也是研究FLHS的熱點。microRNA 作為一種小的、非編碼的RNA，主要通過阻止靶向mRNA 的翻譯來調(diào)控基因表達(dá)，參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡及對碳水化合物與脂類的代謝調(diào)節(jié)。此前有大量研究表明高脂飲食構(gòu)建的NAFLD動物模型中出現(xiàn)了肝組織內(nèi)miRs和靶基因的差異表達(dá)，如小鼠模型中miR-33a、miR-34a、miR-122等上調(diào)，miR-467b、miR-216、iR302a等下調(diào)的情況[44-49]。除此之外大量研究表明在NAFLD的發(fā)展過程中miR-122、miR-34a、miR-16及miR-21等在血漿中的水平也出現(xiàn)了明顯改變[50-53]，這表明特定miRs的血漿水平或許可作為診斷NAFLD及其嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。如豐度最高的miR122被認(rèn)為是評估NASH患者發(fā)展成HCC風(fēng)險的標(biāo)志分子，也被認(rèn)為是治療高膽固醇血癥及其他血脂異常的潛在治療靶點[54]。miR-34a也是參與膽固醇及脂肪酸合成的重要miR，它可抑制SIRT1與PPAR表達(dá)激活，當(dāng)其過表達(dá)時易引起脂肪的堆積變性，沉默時SIRT1、PPARa及其下游基因也相對的隨之恢復(fù)激活。此前DERDAK等[55]研究發(fā)現(xiàn)P53可通過抑制miR-34a從而活化SIRT1/(PGC1a)/PPARa通路來改善NAFLD小鼠體內(nèi)的肝損傷與脂肪變性。miRs在影響脂質(zhì)代謝和炎癥發(fā)展的過程中受到表觀調(diào)控，SERNA等[56]研究結(jié)果表明編碼H3K27的甲基轉(zhuǎn)移酶-EZH2活性的缺失，可通過上調(diào)促炎性因子以及miR-200b和miR-155的表達(dá)推動脂肪堆積，促進(jìn)NAFLD的發(fā)展。最近TAN等[57]研究篩選出了3個受DNA甲基化和IncRNA共同調(diào)控的靶基因(ABCD3、HAO1、BLMH)。目前miRs被認(rèn)為是NAFLD潛在的生物標(biāo)志物和治療靶點，通過對這些代謝相關(guān)靶基因的深入研究或許可推動對FLHS分子機(jī)制的理解及保肝類藥物的生產(chǎn)與發(fā)展，從而更好地防治FLHS的發(fā)生。

目前，有關(guān)表觀遺傳對FLHS調(diào)控的研究相對較少，其影響FLHS形成的機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。

4 診斷與防控

4.1 診斷

4.1.1臨床癥狀 發(fā)病初期，患雞無明顯的臨床癥狀，主要表現(xiàn)為過度肥胖、體質(zhì)量異常，超出正常值的25%，且產(chǎn)蛋量在短時間內(nèi)呈急劇下降，有些甚至出現(xiàn)產(chǎn)蛋停止現(xiàn)象。外表觀之雞冠和肉髯蒼白、萎縮、腹部膨大下垂、觸之柔軟，可摸到厚實的脂肪組織。隨著病情的發(fā)展，患病雞出現(xiàn)精神沉郁、排稀糞、嗜睡、癱瘓等癥狀，并在明顯癥狀出現(xiàn)后的1～2 d 內(nèi)死亡。

4.1.2病理剖檢 剖檢后可見患死雞心、肝、胃、腸等各器官表面有不同程度的脂肪沉積，腹腔含淡紅色積液或血凝塊。肝臟腫大、質(zhì)脆、顏色發(fā)黃、表面伴隨大小不一的出血點或壞死灶，切開后可見內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊，充滿脂肪。

4.1.3實驗室檢查 取病死雞的肝臟制成切片于顯微鏡下觀察，可見細(xì)胞的胞漿內(nèi)有數(shù)量不一的脂滴存在，不同脂滴融合將胞核壓向一側(cè)，呈現(xiàn)不同程度的脂肪變性現(xiàn)象。嚴(yán)重時，細(xì)胞間的界限消失，使得肝索與肝竇的結(jié)構(gòu)難以區(qū)分。隨之肝細(xì)胞會發(fā)生壞死，周圍并伴隨大量單核細(xì)胞浸潤，其間質(zhì)內(nèi)充滿脂肪。

4.1.4早期診斷 由于該病的病情發(fā)展迅速，患病雞常在工作人員尚未覺察的情況下便突然死亡，故以上方法均算不上最佳診斷方案。出于對經(jīng)濟(jì)效益的考量，目前通常采取早期診斷的方式來避免FLHS的發(fā)生。通過監(jiān)測蛋雞體內(nèi)特定物質(zhì)的血液生化指標(biāo)，可為早期診斷提供依據(jù)。劉鑫等[58]的研究結(jié)果表明，病雞體內(nèi)總伴隨著Che、HDL-Ch等物質(zhì)含量的上升及LDL-Ch、T-Ch等含量的下降，當(dāng)其中Che占血漿總膽固醇含量的百分比低于60%時可將其作為FLHS發(fā)病診斷的早期指標(biāo)。而HDL-Ch與LDL-Ch的比值低于50%時也預(yù)示著有患發(fā)FLHS的可能。此外，ALT與AST的升高則通常作為肝損傷的重要指標(biāo)。

4.2 防控措施

4.2.1藥物治療 對于病情較輕的FLHS患病雞可采用按每千克飼料中添加1 g氯化膽堿、900 mg肌醇、10 000 IU的VE及12 mg VB12的劑量服用3～4 周來緩解。由于該方法耗時較長，故也可對患病雞連續(xù)10 d單純性投喂0.1～0.2 mg氯化膽堿來治療。對于病情嚴(yán)重的，按嚴(yán)重程度在上述方法的基礎(chǔ)上多增加幾個療程。

4.2.2適時調(diào)整飼糧 盡量給蛋雞飼喂?fàn)I養(yǎng)豐富的全價糧，保證營養(yǎng)均衡，滿足產(chǎn)蛋需求，注意飼糧中的能量水平。由于產(chǎn)蛋期的能量需求高，故在不同的產(chǎn)蛋階段需對飼糧的蛋白能量比作出相應(yīng)調(diào)整。當(dāng)能量過高時，可將飼糧中的玉米用麩皮、大麥等替代。合理的使用添加劑VE、Se、黃酮類化合物及白芍、柴胡、龍膽草、山楂等中藥藥材也可在一定程度上預(yù)防脂肪肝的發(fā)生。除了調(diào)節(jié)飼糧營養(yǎng)，對于雞群中的某些肥胖個體也可通過采取限飼的措施來減少蛋雞脂肪肝的發(fā)病率。

4.2.3加強(qiáng)日常管理 保證雞舍內(nèi)的環(huán)境安寧和清潔衛(wèi)生，定期進(jìn)行消毒及維持通風(fēng)良好，避免有毒氣體在舍內(nèi)蓄積。盡量把握好飼養(yǎng)密度，保證每只雞都有足夠的運動空間。當(dāng)處于夏季高溫時注意給舍內(nèi)進(jìn)行降溫處理，減少熱應(yīng)激的發(fā)生。同時，在選種時也盡量避免選擇易感品種，定期檢查雞群，對于超出正常體質(zhì)量的15%～20%的雞只進(jìn)行淘汰處理，還要注意時常檢查飼糧，以免雞群誤食霉變帶毒的飼料，增加患上FLHS的風(fēng)險。

5 結(jié)語

只有深入了解FLHS形成的分子機(jī)制才能從根本上預(yù)防該病的發(fā)生，然而目前，有關(guān)FLHS致病機(jī)制的研究還不是很全面。針對脂肪肝的分子層面的研究也大多集中在以小鼠為模型的NAFLD上，對FLHS分子機(jī)制的研究依舊乏善可陳。盡管FLHS與人類的NAFLD的發(fā)病機(jī)制存在許多相似之處，然而大多數(shù)研究中揭示的結(jié)論由于樣本量小，缺乏在相應(yīng)蛋雞FLHS模型中進(jìn)行大量驗證而未能有統(tǒng)一定論。故未來應(yīng)進(jìn)一步大力開展相關(guān)生物學(xué)功能研究，揭示FLHS形成的分子機(jī)制，找出其作用的關(guān)鍵信號通路及其目標(biāo)位點，通過篩選出診斷相關(guān)分子標(biāo)記物和關(guān)鍵靶基因等來為促進(jìn)FLHS的預(yù)防和治療，推動保肝類藥物的研發(fā)生產(chǎn)提供理論支撐。