QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定番茄中胺鮮酯的殘留含量

白雪梅 楊金川

摘要 [目的]建立一種適用氣相色譜-質(zhì)譜 （GC-MS）測(cè)定番茄中胺鮮酯（DA-6）的方法。[方法]樣品經(jīng)過(guò)乙腈提取、PSA凈化，濃縮，采用GC-SIM-MS檢測(cè)，基質(zhì)外標(biāo)法定量。[結(jié)果]胺鮮酯進(jìn)樣質(zhì)量濃度在10～500 μg/L與峰面積間線性關(guān)系良好，決定系數(shù) （R2）為0.999 4，定量限 （LOQ）為0.010 mg/kg;在添加水平分別為0.01、0.05、0.20 mg/kg時(shí)，該方法的平均回收率在83.9%～102.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 （RSD）在3.4%～9.3%。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便、快速，具有良好的靈敏度、重復(fù)性，可適用于番茄中胺鮮酯含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞 胺鮮酯;氣相色譜-質(zhì)譜法;殘留含量;番茄

中圖分類號(hào) TS 207.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）05-0200-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.05.056

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Determination of Diethyl Aminoethyl Hexanoate Residues in Tomatos by QuEChERS-Gas Chromatography-Mass Spectrometry

BAI Xue-mei1，YANG Jin-chuan2

（1.Guizhou Adverting Monitoring Center，Guiyang，Guizhou 550001;2.Institution of Supervision and Inspection Product Quality of Guizhou Province，Guiyang，Guizhou 550016）

Abstract [Objective]A residue analytical method was developed for diethyl aminoethyl hexanoate （DA-6） in tomato with gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）.[Method]The samples were extracted with acetonitrile，purified by PSA，concentrated，detected by GC-SIM-MS，and quantified by the matrix external standard method.[Result]The injection mass concentration of diethyl aminoethyl hexanoate had a good linear relationship with the peak area between 10-500 μg/L，the coefficient of determination （R2） was 0.9994，and the limit of quantification （LOQ） was 0.010 mg/kg.The average recoveries at three spiking levels （0.01，0.05，0.20 mg/kg） in tomatos were 83.9%- 102.0%，and the relative standard deviations （RSD） were 3.4%-9.3%.[Conclusion]The method is simple，fast，has good sensitivity and repeatability，and can be applied to the determination of diethyl aminoethyl hexanoate in tomato.

Key words Diethyl aminoethyl hexanoate （DA-6）;Gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）;Residues;Tomato

胺鮮酯（己酸二乙氨基乙醇酯，DA-6），分子式為C 12H 25NO 2，相對(duì)分子質(zhì)量為215.33。胺鮮酯是20世紀(jì)90年代美國(guó)科學(xué)家首先發(fā)現(xiàn)的一種新型廣譜高效植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，有促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)、顯著提高作物產(chǎn)量等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)又有高效、低毒、低殘留、環(huán)境相容性好等特點(diǎn)，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于玉米、白菜、葡萄、番茄等作物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)上。目前，關(guān)于胺鮮酯在農(nóng)產(chǎn)品上的檢測(cè)研究已有很多報(bào)道，主要有氣相色譜法[1]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[2-4]、超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）[5-7]等。

關(guān)于胺鮮酯在番茄上的應(yīng)用已有研究，如劉忠德[8]研究2%胺鮮酯水劑在番茄上的應(yīng)用;劉海濤[9]研究了3%胺鮮酯·復(fù)硝酚鈉水劑對(duì)溫室大棚番茄產(chǎn)量及品質(zhì)的影響;徐加利等[10]研究了復(fù)硝酚鈉和胺鮮酯·復(fù)硝酚鈉對(duì)大棚番茄生長(zhǎng)和果實(shí)品質(zhì)的影響。這些研究說(shuō)明胺鮮酯已經(jīng)被研究施用于番茄的生長(zhǎng)生產(chǎn)調(diào)節(jié)上。但關(guān)于胺鮮酯在番茄上的檢測(cè)研究卻鮮見報(bào)道。該研究以番茄中的胺鮮酯為研究對(duì)象，建立了一套快速、準(zhǔn)確、靈敏的GC-MS殘留分析方法，可用于測(cè)定番茄中胺鮮酯的殘留量，也可為該藥在其他果蔬中殘留檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 （Agilent GC7890A/MS5975C，美國(guó)安捷倫公司）;振蕩混勻器 （MultiReax，Heieloph公司）;冷凍離心機(jī) （Allegra X-22R ，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）;數(shù)顯混勻儀 （IKA MS3，KA公司）;自動(dòng)氮吹儀 （TufboVap LV，Biotage公司）。乙腈 （分析純）;乙酸乙酯 （色譜純）;氯化鈉 （分析純）;胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g （≥97.3%，Dr.Ehrenstorfer公司）。

1.2 樣品處理方法

1.2.1 樣品的制備。

取番茄樣品1 kg （個(gè)體較小的取全果處理;個(gè)體加大的以對(duì)稱軸切塊后處理），將其樣品切碎后混勻，通過(guò)四分法或?qū)⑷繕悠忿D(zhuǎn)入到組織搗碎機(jī)中搗碎成勻漿，放入聚乙烯瓶中，于-18 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 樣品的前處理。

1.2.2.1 提取。勻漿的樣品稱取10 g （精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入乙腈10 mL振蕩提取30 min，再加入4～5 g NaCl振蕩提取5 min，然后以6 000 r/min離心5 min，待取上清液，凈化。

1.2.2.2 凈化。取6 mL上述上清液于15 mL聚丙烯QuEChERS凈化管（1 200 mg MgSO 4+400 mg PSA）中，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min，然后取2 mL離心上清液于玻璃試管中，45 ℃水浴中，氮吹吹至近干，用1 mL乙酸乙酯定容后，渦旋混合復(fù)溶，過(guò)0.22 μm濾膜到進(jìn)樣小瓶中，待GC-MS檢測(cè)。

1.3 色譜條件

1.3.1 氣相色譜條件。色譜柱為石英毛細(xì)管柱HP-5 MS（30 m×0.25 mm ×0.25 μm）;載氣為He，純度≥99.999%;氣體流速為1.00 mL/min;尾吹氣 （He）為60 mL/min;進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣體積1 μL。程序升溫：初溫40 ℃，保持1 min，然后以30 ℃/min升至130 ℃，再以5 ℃/min升至160 ℃，最后以20 ℃/min升至300 ℃，保持5 min;共22 min。進(jìn)樣口溫度250 ℃。

1.3.2 質(zhì)譜條件。

離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃;接口溫度240 ℃;電子轟擊 （EI） 離子源;電子能量70 eV;采集模式：選擇離子掃描 （SIM）模式，選擇離子為m/z 86、100、143，其中m/z 86為定量離子;溶劑延遲5 min。

上述條件下，胺鮮酯的保留時(shí)間為8.51 min。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g（精確到0.000 1 g）于100 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至100 mL，得100 mg/L胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)母液，然后再用乙酸乙酯稀釋至10、20、50、100、500 ng/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在“1.3”條件下進(jìn)行測(cè)定。以目標(biāo)物定量離子的峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸分析。

1.5 添加回收試驗(yàn)

取一定量的空白對(duì)照樣品，加入一定量的胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“1.2.2”進(jìn)行提取、凈化，以“1.3”色譜條件檢測(cè)，測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。胺鮮酯在番茄中的添加水平分別為0.01、0.05、0.20 mg/kg，每個(gè)添加濃度5次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

在實(shí)際的檢測(cè)中，既要保證待測(cè)物的完全分離，同時(shí)又要保證所有組分流出色譜柱，且分析時(shí)間越短越好，所以對(duì)于復(fù)雜的樣品，通常采用程序升溫方式。該研究參考文獻(xiàn)選用HP-5 MS色譜柱對(duì)胺鮮酯進(jìn)行檢測(cè)摸索，并對(duì)升溫程序的升溫速率及分離效果進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，優(yōu)化后的程序升溫速率見“1.3.1”。在此儀器條件下，胺鮮酯和雜質(zhì)有很好的分離效果，色譜見圖1。

2.2 提取凈化條件的選擇

胺鮮酯在有機(jī)溶劑中有良好的溶解性，而乙腈可以和水混合互溶形成很好的共萃物，可以充分地提取目標(biāo)物，然后在通過(guò)加氯化鈉（或飽和氯化鈉溶液），使乙腈和鹽水分層，分離出有機(jī)層，因此該試驗(yàn)采用乙腈作為提取溶劑;而對(duì)凈化條件的選擇，該研究主要是參考文獻(xiàn)，使用QuEChERS （1 200 mg MgSO 4+400 mg PSA，賽分公司）凈化管按“1.2.2”方法凈化。

通過(guò)凈化和非凈化樣品對(duì)比，發(fā)現(xiàn)PSA能夠有效去除有機(jī)酸、部分色素等雜質(zhì)，以及可以有效去除干擾峰，而對(duì)胺鮮酯沒有什么影響，所以該試驗(yàn)采用乙腈作為提取溶劑，用PSA （QuEChERS凈化管）凈化。

2.3 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限

基質(zhì)效應(yīng)是指基質(zhì)成分和目標(biāo)化合物在進(jìn)行離子化時(shí)相互競(jìng)爭(zhēng)而導(dǎo)致目標(biāo)化合物信號(hào)強(qiáng)度有不同程度的增強(qiáng)或減弱的現(xiàn)象，其包括基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)和基質(zhì)抑制效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)=B/A×100%，式中，A 為在純?nèi)軇┲修r(nóng)藥的響應(yīng)值;B 為樣品基質(zhì)中添加的相同含量農(nóng)藥的響應(yīng)值。

以濃度500 ng/mL為例，在番茄基質(zhì)樣品中的基質(zhì)效應(yīng)為215%，說(shuō)明存在著明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。由于胺鮮酯在GC-MS上存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，為了減小基質(zhì)效應(yīng)的影響，該研究采用基質(zhì)標(biāo)曲定量。以番茄作為基質(zhì)，再將其稀釋成質(zhì)量濃度為10、20、50、100、500 μg/L的一系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述“1.3”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以目標(biāo)物定量離子的峰面積 （y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度 （x）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果表明，胺鮮酯進(jìn)樣質(zhì)量濃度在10～500 μg/L與峰面積呈良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)R2為0.999 4。以3倍信噪比（S/N）時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度為分析方法的檢出限（LOD），以最小添加濃度作為方法的定量限（LOQ），該方法的LOD和LOQ分別為0.005、0.010 mg/kg。

2.4 方法的精密度與回收率

當(dāng)樣品中的添加水平分別為0.01、0.05、0.20 mg/kg時(shí)，胺鮮酯在番茄樣品中的平均添加回收率在83.9%～102.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 （RSD）在3.4%～9.3% （表1），結(jié)果表明該方法具有良好的精密度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。

2.5 番茄樣品的檢測(cè)

30份市售番茄樣品，通過(guò)“1.2”前處理，以“1.3”質(zhì)譜條件檢測(cè)，結(jié)果顯示，有2份樣品檢測(cè)出陽(yáng)性，檢出率為6.7%，其中最高的檢出值為0.04 mg/kg;其余樣品均未檢出。

3 討論與結(jié)論

謝柳青等[1]介紹的GC-FID測(cè)定胺鮮酯在小白菜中的殘留方法，該方法前處理操作繁瑣，基質(zhì)干擾強(qiáng)，且氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）容易出現(xiàn)假陽(yáng)性;梁林等[2-4]報(bào)道的方法中采取傳統(tǒng)提取過(guò)程，該方法操作煩瑣復(fù)雜且耗時(shí)，消耗大量有機(jī)溶劑。該研究建立了GC-MS法快速測(cè)定番茄中胺鮮酯含量的分析方法，該方法用乙腈提取，QuEChERS凈化濃縮，GC-MS檢測(cè)，

該方法前處理簡(jiǎn)單快速、易于操作、重現(xiàn)性好、靈敏度和準(zhǔn)確度高、線性范圍寬且線性關(guān)系良好，解決了傳統(tǒng)方法操作煩瑣復(fù)雜耗時(shí)且消耗大量有機(jī)溶劑的缺點(diǎn)，更適用于番茄中胺鮮酯的快速定性和定量檢測(cè)，也可為胺鮮酯在其他果蔬中的檢測(cè)提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1]

謝柳青，孟昭禮，江樹人，等.氣相色譜法測(cè)定土壤和小白菜中胺鮮酯殘留量[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（11）：68-70.

[2] 梁林，薄瑞，蔣家珍，等.胺鮮酯在大白菜和土壤中的殘留分析及消解動(dòng)態(tài)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（1）：99-102.

[3] 潘志明，周路明，黃瓊，等.食品中胺鮮酯的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定方法研究[J].世界科技研究與發(fā)展，2015，37（2）：134-137.

[4] 孔祥吉，孔順，張雪梅，等.改進(jìn)QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定蘋果中胺鮮酯殘留[J].色譜，2019，37（12）：1363-1367.

[5] 劉峰，張曉波，任紅波，等.大豆與土壤中胺鮮酯和甲哌鎓的殘留分析[J].農(nóng)藥，2013，52（8）：585-586，608.

[6] 李敏敏，劉新剛，董豐收，等.80%胺鮮酯·甲哌鎓在棉花和土壤中的殘留及消解動(dòng)態(tài)[J].環(huán)境化學(xué)，2013，32（2）：289-294.

[7] 張文，閆君，彭濤，等.UPLC-MS/MS測(cè)定葡萄中的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及其中7種外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的殘留消解動(dòng)態(tài)[J].食品工業(yè)科技，2019，40（23）： 183-188，192.

[8] 劉忠德.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑2%胺鮮酯水劑在番茄上的應(yīng)用研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（9）：10，12.

[9] 劉海濤.3%胺鮮酯·復(fù)硝酚鈉水劑對(duì)溫室大棚番茄產(chǎn)量及品質(zhì)的影響[J].中國(guó)農(nóng)技推廣，2016，32（7）：69-71.

[10] 徐加利，尹紅增，周海燕，等.復(fù)硝酚鈉和胺鮮酯·復(fù)硝酚鈉對(duì)大棚番茄生長(zhǎng)和果實(shí)品質(zhì)的影響[J].植物醫(yī)生，2019，32（1）：23-26.