餌料種類對青蟹生長和營養(yǎng)品質的影響

■徐夢謙 鄔伊田 張 麗 王秀娟 吳玉波 方懷義 張艷秋

（1.廣西北部灣海洋生物多樣性養(yǎng)護重點實驗室，廣西欽州535011；2.臺州學院生命科學學院，浙江臺州318002；3.北部灣大學海洋學院，廣西欽州535011）

青蟹(Scylla paramamosain)隸屬于甲殼綱、十足目、短尾亞目、梭子蟹科、青蟹屬，廣泛分布于我國浙江、福建、廣西等省份，是我國東南沿海地區(qū)主要的海洋經濟蟹類之一[1]。青蟹因生長速度快、養(yǎng)殖周期短、經濟效益高等特點，已成為臺州三門地區(qū)主要的養(yǎng)殖蟹類。在青蟹傳統養(yǎng)殖過程中，主要投喂低值貝類、海水捕撈的鮮雜魚及冰鮮魚等餌料，餌料利用效率低，養(yǎng)殖成本高，水體污染嚴重[2]。隨著我國漁業(yè)轉型升級的推進，青蟹配合飼料逐漸開始推廣和應用，但配合飼料對青蟹生長和營養(yǎng)品質的影響仍有待分析。

評價青蟹營養(yǎng)價值的主要指標包括常規(guī)營養(yǎng)成分、氨基酸和脂肪酸的組成和含量等，這些指標直接影響青蟹的營養(yǎng)價值和風味[3]。近年來，相關學者已對不同環(huán)境下鋸緣青蟹[4]、三疣梭子蟹[5-6]和中華絨螯蟹[7-9]等甲殼類養(yǎng)殖動物的營養(yǎng)成分進行了分析，但以不同餌料飼喂青蟹后其營養(yǎng)品質的研究尚未見報道。本研究通過對青蟹主要營養(yǎng)成分的分析，探討投喂配合飼料和鮮雜魚對青蟹生長和營養(yǎng)品質的影響，旨在為青蟹配合飼料的配制提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 材料

在三門縣六橫線青蟹海水養(yǎng)殖池塘內，采用配合飼料（粗蛋白42%、粗脂肪9%、灰分15%、磷1.9%）和鮮雜魚餌料（粗蛋白19.1%、粗脂肪14.3%、灰分4.8%、磷0.7%）分別投喂青蟹8 個月，每種餌料3 個重復池塘。每天早晚兩次（8：00 和16：00）飽食投喂。飼養(yǎng)結束后，隨機采集池塘內雌雄青蟹各10只，群體稱重。

1.2 儀器

Agilent1100液相色譜儀（美國安捷倫公司）、HH-2數顯恒溫水浴鍋（常州市金壇區(qū)環(huán)宇科學儀器廠）、HGC-12A 氮吹儀（天津恒奧公司）、Agilent7890-5975氣相色譜質譜聯用儀（美國安捷倫公司）、Agilent7890氣相色譜儀（美國安捷倫公司）等。

1.3 方法

1.3.1 形態(tài)學參數的測定

青蟹洗凈、擦干、稱重，測量殼長和殼寬后，將其放入樣品袋保存于-20 ℃的超低溫冰箱中，作為終末體成分分析的樣品。

1.3.2 常規(guī)營養(yǎng)成分的測定

青蟹樣品化凍后在高壓蒸汽滅菌鍋內蒸煮（120 ℃）20 min，然后置于烘箱內75 ℃下烘干。根據AOAC[10]方法分析青蟹樣品的水分、蛋白質、脂肪和灰分含量，采用釩鉬酸銨法測定磷含量。

1.3.3 氨基酸的測定

稱取20～50 mg 均勻樣品于密封瓶中，加入5 mL 6 mol/L HCl（含1%苯酚），充氮氣1 min，封瓶，110 ℃水解24 h。取出冷卻，定容至5 mL，取1 mL 95 ℃下氮氣吹揮干，準確加入1 mL 0.01 mol/L HCl 溶解，過膜測定。采用安捷倫公司自動在線衍生化方法，一級氨基酸與鄰苯二甲醛（OPA）、二級氨基酸與芴甲氧羰酰氯（FMOC）衍生后過柱檢測。

沙溝泥石流位于重慶市南川區(qū)金山鎮(zhèn)金獅村四社，柏枝溪左岸，屬季節(jié)性流水沖溝。沙溝為老泥石流溝，該泥石流曾于19世紀的60年代和80年代及近期2016年暴發(fā)過三次泥石流，造成嚴重的損失。這三次泥石流均為暴雨洪水誘發(fā)，主溝泥石流性質為稀性泥石流。沙溝泥石流全貌見圖1。

1.3.4 脂肪的提取與甲酯化

稱取100 mg 脂質加入2 mL 14%三氟化硼-甲醇，60 ℃水浴30 min 進行甲酯化，冷卻至室溫，加入1 mL 蒸餾水和2 mL 正己烷振蕩，靜置分層完全后吸取上層有機層，N2吹揮干溶劑后用1 mL正己烷溶解，樣品上GC/MS分析。

1.3.5 脂肪酸的GC/MS分析

色譜條件為色譜柱HP-5MS(60 m×0.25 mm，0.25 μm)；進樣口溫度為280 ℃；進樣量1.0 μL，分流比20∶1；載氣為氦氣；恒線速度流速1.5 mL/min；升溫程序如下：初始柱溫120 ℃，保持1 min，然后以6 ℃/min速率升到170 ℃，保持0 min，再以2.5 ℃/min速率升到215 ℃，保持12 min，以4 ℃/min 速率升到230 ℃，保持10 min，最后以10 ℃/min 速率升到280 ℃，保持15 min。質譜條件包括離子源溫度200 ℃、四級桿150 ℃、連接線溫度260 ℃、電子轟擊能量70 eV、質量掃描范圍m/z40～550、溶劑切除時間為4.4 min。

1.3.6 脂肪酸的定性和定量分析

利用計算機NIST 11 譜庫數據庫檢索、參考脂肪酸標準譜圖和各脂肪酸的保留時間，定性出所有的脂肪酸。將脂肪酸甲酯封面乘以相應校正系數f，再按面積歸一化法進行計算，求得各脂肪酸百分含量。

1.4 數據統計分析

采用雙因素方差分析(two-way ANOVA)方法檢驗餌料種類和性別對青蟹生長、形態(tài)學參數、體成分組成(水分、蛋白質、脂肪、灰分、磷)、氨基酸含量和脂肪酸含量的影響。為比較各組青蟹之間的差異，采用單因素方差分析上述參數(one-way ANOVA)，差異有顯著性的變量再進行多重比較(Duncan's test檢驗)。取P＜0.05為差異顯著性水平。利用SPSS 21.0軟件進行統計分析。

2 結果

2.1 餌料種類對青蟹生長和形態(tài)學參數的比較(見表1)

由表1 可知，餌料種類顯著影響青蟹的體增重（two-way ANOVA，P＜0.05）。投喂鮮雜魚組青蟹的體增重顯著高于投喂配合飼料組（one-way ANOVA，P＜0.05）。雌雄性別和餌料種類不會對體長比和體寬比產生顯著影響（one-way ANOVA，P＞0.05）。

2.2 餌料種類對青蟹蟹體組成的比較（見表2）

由表2 可知，餌料種類、雌雄性別以及兩者的交互作用不會顯著影響青蟹蟹體的水分、蛋白質、脂肪和磷含量(two-way ANOVA，P＞0.05)，但餌料種類顯著影響青蟹蟹體的灰分含量(two-way ANOVA，P＜0.05)。投喂鮮雜魚組雄性蟹體的灰分含量顯著低于投喂配合飼料組雄性蟹體的灰分含量(Duncan's test，P＜0.05)。投喂配合飼料組雄性蟹體的磷含量顯著高于投喂鮮雜魚組雄性蟹體的磷含量(Duncan's test，P＜0.05)。

表1 餌料種類對青蟹生長和形態(tài)學參數的比較

表2 餌料種類對青蟹蟹體組成的比較（%）

2.3 餌料種類對青蟹氨基酸組成的比較(見表3)

由表3可知，蟹體的Leu含量顯著受青蟹雌雄性別的影響（two-way ANOVA，P＜0.05），而蟹體的Tyr和Ser含量則顯著受餌料種類的影響（two-way ANOVA，P＜0.05）。必需氨基酸方面，餌料種類和雌雄性別不會對青蟹蟹體的Lys、Thr、Met、Ile、Leu、His、Phe、Arg和Val產生顯著差異（one-way ANOVA，P＞0.05）。非必需氨基酸方面，餌料種類和雌雄性別不會對青蟹蟹體的Ala、Cys、Glu、Gly、Pro和Asp產生顯著影響（one-way ANO?VA，P＞0.05），而投喂鮮雜魚組的雄性蟹體Tyr顯著低于投喂配合飼料組（Duncan's test，P＜0.05），投喂鮮雜魚組的雄性蟹體Ser 顯著低于投喂配合飼料組雄性蟹體（Duncan's test，P＜0.05）。總體來說，不同餌料類型和雌雄性別之間的必需氨基酸總量、呈味氨基酸總量和鮮味氨基酸總量無顯著差異（one-way ANOVA，P＞0.05）。

2.4 脂肪酸組成的比較（見表4）

餌料種類顯著影響青蟹蟹體的C14∶0、C16∶1(n-7)、C18∶4(n-3)、C18∶2(n-6)、C18∶1(n-9)、C18∶0、C20∶4(n-6)、C20∶5(n-3)、C20∶3(n-6)、C20∶2(n-6)、C22∶5(n-6)、C22∶4(n-6)、C22：5(n-3)、脂肪酸總量、PUFA(n-3)和PUFA(n-6)含量（two-way ANOVA，P＜0.05）。投喂鮮雜魚組的C16∶1(n-7)、C20∶5(n-3)、C22∶5(n-6)和C22∶5(n-3)顯著低于投喂配合飼料組（Duncan's test，P＜0.05），而其C18∶2(n-6)、C20∶4(n-6)、C20∶3(n-6)、C20∶2(n-6)和C22∶4(n-6)則顯著高于投喂配合飼料組（Duncan's test，P＜0.05）。總體而言，餌料種類和雌雄性別不會顯著影響蟹體飽和脂肪酸總量、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的含量（one-way ANOVA，P＞0.05），但投喂鮮雜魚組雌蟹脂肪酸總量顯著高于投喂配合飼料組雌蟹（Duncan's test，P＜0.05），且餌料種類顯著影響PUFA(n-3)和PUFA(n-6)組成，投喂鮮雜魚組青蟹蟹體的PUFA(n-3)含量顯著低于投喂配合飼料組，而其PUFA(n-6)含量顯著高于投喂配合飼料組（Duncan's test，P＜0.05）。

3 討論

3.1 不同餌料類型對青蟹生長的影響

本研究采用鮮雜魚和配合飼料兩種餌料投喂青蟹，試驗結束后發(fā)現投喂鮮雜魚組青蟹的體增重顯著高于投喂配合飼料組，表明投喂鮮雜魚餌料的飼養(yǎng)效果較好，更有利于青蟹的快速生長。然而，由于海洋漁業(yè)資源的匱乏，海水增養(yǎng)殖過程中配合飼料必將逐漸取代冰鮮魚餌料。因此，在青蟹池塘養(yǎng)殖過程中，還需進一步優(yōu)化配合飼料的營養(yǎng)結構和組成，提高配合飼料的利用效率以便更好地滿足青蟹快速生長的需要。

表3 餌料種類對青蟹氨基酸組成的比較

3.2 不同餌料類型對青蟹常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

研究發(fā)現，養(yǎng)殖水域環(huán)境、餌料種類、生長階段等因素顯著影響?zhàn)B殖動物的營養(yǎng)成分[11]。高露嬌等[12]以不同餌料飼喂褐牙鲆后，發(fā)現攝食雜魚組褐牙鲆魚體的粗蛋白和粗脂肪含量顯著高于攝食人工飼料組。李旭光等[13]采用冰凍魚為主的動物性餌料飼喂中華絨螯蟹后將導致蟹體脂肪含量顯著高于人工飼料組。然而，投喂冰鮮魚和人工飼料組后大黃魚背部、腹部肌肉的粗蛋白和粗脂肪含量無顯著性差異[14]。楊志剛等[15]以配合飼料替代雜魚飼喂中華絨螯蟹后，其肌肉中的水分、粗蛋白、粗脂肪含量不會發(fā)生顯著變化。這與本研究中的結果相一致，投喂不同餌料也不會對雌雄青蟹蟹體的水分、蛋白質和脂肪含量產生影響。此外，投喂配合飼料組雄性青蟹的灰分和磷含量顯著高于投喂鮮雜魚組。其原因可能是配合飼料中所含較高的灰分（15%）和磷（1.9%）含量所致。

3.3 不同餌料類型對青蟹氨基酸的影響

人體對食物蛋白質的需求，其本質是對構成蛋白質的氨基酸的需求[16]。氨基酸分為非必需氨基酸和必需氨基酸，其中，必需氨基酸是人體不能合成或合成速度較慢，不能滿足機體快速生長的需要，需要從食物中額外獲得[17]?？梢?，青蟹所含必需氨基酸的種類、數量及組成比例是決定其蛋白質營養(yǎng)價值高低的主要因素。本試驗中，青蟹攝食配合飼料和鮮雜魚后，其必需氨基酸組成一致，且雌雄青蟹之間必需氨基酸含量均無顯著性差異，表明餌料種類不會影響雌雄青蟹蛋白質的營養(yǎng)價值，投喂鮮雜魚餌料或配合飼料均可獲得營養(yǎng)價值較高的優(yōu)質蟹類。研究發(fā)現，呈味氨基酸和鮮味氨基酸含量的多少在一定程度上決定了青蟹蛋白質口感的鮮美程度。本試驗中，青蟹蟹體的呈味氨基酸（精氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、天冬氨酸）和鮮味氨基酸（谷氨酸、天冬氨酸）無顯著性差異，表明投喂鮮雜魚餌料和配合飼料不會影響青蟹的鮮美程度。Glu構成了青蟹蟹體主要鮮味感來源[18]，其含量高達18.77～27.57 mg/g，這與野生青蟹所含25.5 mg/g谷氨酸含量相似[19]，表明養(yǎng)殖方式的不同不會造成青蟹鮮美程度的降低。

3.4 不同餌料類型對青蟹脂肪酸的影響

機體脂肪酸的種類、數量及組成比例在一定程度上能夠反映養(yǎng)殖動物對內外環(huán)境變化所做出的理化調節(jié)反應[20]。黃蘇紅等[21]指出脂肪酸組成對養(yǎng)殖蟹類的營養(yǎng)價值、風味、品質等特性具有重要的意義。本研究中，投喂鮮雜魚組雌蟹的脂肪酸總量顯著高于投喂配合飼料組雌蟹，表明餌料種類顯著影響雌青蟹蟹體的脂肪酸含量。此外，與投喂配合飼料組相比，投喂鮮雜魚組雌雄青蟹蟹體的PUFA(n-3)顯著降低，而其亞油酸、花生四烯酸等PUFA(n-6)顯著升高，表明餌料種類會顯著影響青蟹PUFA 的組成和比例。PUFA不能通過自身的脂類代謝途徑所合成，必須通過食物途徑攝取[22-23]。由此可見，餌料來源的不同是引起雌雄青蟹的脂肪酸差異的一個主要因素。

綜上所述，相較于配合飼料，投喂冰鮮魚餌料飼養(yǎng)青蟹的效果較好。餌料種類不會對青蟹的蛋白質、必需氨基酸、呈味氨基酸總量和鮮味氨基酸總量產生影響，但會顯著影響蟹體脂肪酸總量及PUFA(n-3)和PUFA(n-6)的組成和比例。只有根據青蟹的營養(yǎng)需求，合理優(yōu)化配合飼料配方以滿足青蟹快速生長的需要，才能為配合飼料全面取代鮮雜魚養(yǎng)殖青蟹奠定基礎。