近5年針灸治療阿爾茨海默病的動物實驗研究情況分析＊

牟秋杰，姜 婧，王 鑫，李昱頡，田會玲，王 順，嵇 波＊＊，李志剛＊＊

（1. 北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院 北京 100029；2. 北京中醫(yī)藥大學護理學院 北京 100029；3. 首都醫(yī)科大學附屬北京中醫(yī)醫(yī)院 北京 100010；4. 北京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院 北京 100029）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD），又稱老年癡呆，其臨床特征主要表現(xiàn)為起病隱匿和認知功能障礙漸進性加重，屬中樞神經系統(tǒng)退行性疾病，是癡呆最常見的原因[1]，約占癡呆總數的60%-80%[2]。目前，全球的癡呆患者人數約5000 萬，預計到2050 年將增至1.52 億。中國作為人口大國，癡呆患者的人數已超過950 萬，約占世界總數的20%，預計到2030 年將超過1600 萬[3]。據統(tǒng)計，2018 年全球用于癡呆的花費就已達到了1 萬億美元，預計到2030 年將會達到2 萬億美元；僅2015 年，在中國用于癡呆的花費就達到了1677.4 億美元，預計到 2030 年將增至 5074.9 億美元[4]。由此可知，AD 給世界和中國帶來了沉重的經濟和社會負擔。由于AD 的病因、病機十分復雜，目前尚無特異性的治療方案，已成為當今世界公共衛(wèi)生領域所面臨的重大難題?，F(xiàn)有的治療藥物，如鹽酸多奈哌齊、利凡斯的明、加蘭他明、美金剛和甘露特鈉等，僅能改善患者的臨床癥狀，延緩疾病的發(fā)展進程，并不能根治AD，且副作用較大。針灸作為傳統(tǒng)醫(yī)學的重要組成部分，多項研究[5,6]均表明其對AD 具有較好的療效，且安全可靠，在AD 的防治過程中發(fā)揮著重要作用。近年來，業(yè)界對針灸治療AD 進行了系統(tǒng)、全面且較為深入的研究，取得了大量客觀、可靠的研究成果，在此基礎上，本文對近5年的動物實驗研究成果進行匯總、分析，以期為今后的實驗研究提供參考，并為AD 的針灸臨床治療提供相應的實驗依據。

1 文獻檢索

1.1 文獻檢索方法

查閱從 2015 年 1 月 1 日至 2019 年 12 月 31 日期間中國期刊全文數據庫（CNKI）、萬方數據庫（WANFANG）、維普全文期刊數據庫（VIP）、中國生物醫(yī)學文獻服務系統(tǒng)（SinoMed）、Pubmed、Medline 和Web of Science 數據庫發(fā)表的文獻。中文檢索詞：①針刺，②電針，③灸，④艾灸，⑤針灸，⑥阿爾茨海默病，⑦老年癡呆；檢索式為：[①or②or③or④or⑤]and[⑥or⑦]。英文檢索詞：①acupuncture，②electroacupuncture，③moxibustion，④moxa-moxibustion，⑤acupuncture and moxibustion，⑥alzheimer's disease，⑦senile dementia；檢索式為：[①or②or③or④or⑤]and[⑥or⑦]。

1.2 納入標準

①研究類型為動物實驗研究的文獻；②治療組的干預方式為單純的普通針刺、電針、艾灸或普通針刺加艾灸的文獻；③研究對象為單純AD 動物模型的文獻；④文獻語種限定為中文和英文。

1.3 排除標準

①綜述、系統(tǒng)評價和Meta 分析、醫(yī)家經驗、個案報道、理論探討、述評、臨床研究、學位論文及會議論文等；②重復發(fā)表或重復檢出的文獻；③無法獲取全文或信息不全的文獻；④沒有采用針灸治療的文獻；⑤采用針灸聯(lián)合其他方法治療的文獻；⑥研究數據不明確或統(tǒng)計學方法不恰當的文獻。

1.4 篩選方法

由2 名文獻評價員閱讀題目和摘要，按納排標準進行初篩，對符合標準的文獻進行全文下載并閱讀。存疑文獻經小組討論后決定是否納入，如仍有爭議則請專家稽波教授和李志剛教授仲裁。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

根據檢索策略，共檢索出中文文獻269篇，英文文獻53 篇，通過閱讀文章的題目、摘要，并結合全文閱讀，排除不符合納入標準的中文文獻212篇，英文文獻42篇，最終納入中文文獻57篇，英文文獻11篇。

2.2 文獻年度分布情況

2015-2019年，針灸治療AD 的動物實驗研究的總體趨勢呈波動狀態(tài)，其中2016年達到高峰，2016-2018年呈下降趨勢，2019 年回升。具體年度分布情況如下：2015年17篇，2016年19篇，2017年11篇，2018年5篇，2019年16篇。

2.3 納入研究的基本概況

2.3.1 動物的選取及模型制備

所選動物的品系主要有APP/PS1 雙轉基因小鼠、SAMP8小鼠、SD大鼠和Wistar大鼠四種。關于模型動物的性別，有55 篇選用雄性，6 篇選用雌性，6 篇選用雌雄各半或雌雄不拘，另有1 篇未闡明性別。文獻中所選用模型鼠的鼠齡差異較大，為1.5-15 月齡不等，其中APP/PS1 雙轉基因小鼠選用最多的為5 月齡和7月齡，SAMP8 小鼠選用最多的為6 月齡和7 月齡，SD大鼠選用最多的為2月齡和15月齡（其中有12篇文獻所選模型鼠的鼠齡不詳），Wistar 大鼠選用最多的為4-5 月齡，另有1 篇文獻同時選用了4 月齡、6 月齡和9月齡的模型鼠進行了研究。樣本量的選取，最少的為15 只，最多的為 115 只，出現(xiàn)頻次較多的有 40 只、60只、48 只和50 只等，所納入文獻的平均樣本量約為48只。造模方法主要有雙側海馬注射Aβ（Aβ1-40、Aβ1-42 或Aβ25-35）、雙側側腦室注射鏈脲佐菌素、腹腔注射D-半乳糖、氫溴酸東莨菪堿或直接選用APP/PS1、SAMP8 模型鼠。其中直接選用APP/PS1 雙轉基因小鼠的有12篇，直接選用SAMP8小鼠的有15篇，選用雙側海馬注射Aβ1-42 的有18 篇，選用雙側海馬注射Aβ1-40 的有 8 篇，選用雙側海馬注射 Aβ25-35 的有 7 篇，選用雙側側腦室注射鏈脲佐菌素的有5 篇，剩余3 篇則分別選用腹腔注射D-半乳糖加腹腔注射氫溴酸東莨菪堿、腹腔注射D-半乳糖加雙側海馬注射Aβ1-40和腹腔注射D-半乳糖加雙側側腦室注射鵝膏蕈氨酸進行造模（表1）。

2.3.2 針灸干預方式及穴位的選取

針灸對AD 模型動物的干預方法主要有普通針刺、電針、艾灸和普通針刺加艾灸4種。其中采用普通針刺進行治療的文獻有12 篇、電針治療的有34 篇，艾灸治療的有14 篇，普通針刺加艾灸治療的有8 篇。單次治療時間最短的為20-30 s，最長的為2 h，其中普通針刺的單次治療時間選取最多的為15 min 和30 min，電針選取最多的為20 min、30 min 和15 min，艾灸選取最多的為20 min和5 min，普通針刺加艾灸選取最多的為 30 min 和15 min。療程由 3 天至 90 天不等，其中普通針刺的療程選取最多的為28天，電針選取最多的為14 天和15 天，艾灸選取最多的為18 天，普通針刺加艾灸選取最多的為14 天。所納入的68 篇文獻中，共有58 篇選用了穴方進行治療，10 篇選用了單穴進行治療，共涉及穴方20 首，其中使用頻次較多的有“百會+腎俞”、“百會 + 印堂 + 人中”、“膻中 + 中脘 + 氣海 +血海+足三里”和“百會+涌泉”等；共涉及穴位27個，其中使用頻次較多的有百會、腎俞、足三里、印堂和大椎等（表2）。

此外，有3 篇文獻同時使用了脈沖電針和音樂電針治療，并比較了2 種電針之間的療效差異；有2 篇文獻比較了不同穴位之間的療效差異；有2 篇文獻比較了不同艾灸因素（艾煙、艾灸和無煙艾灸）之間的療效差異。關于電針頻率，在采用電針治療的34 篇文獻中，有 14 篇選用了 2 Hz，3 篇選用了 1/50 Hz，2 篇選用了 20 Hz，各有 1 篇選用了 30 Hz、1/20 Hz、2/15 Hz、2/50 Hz、4/30 Hz、20/30 Hz、20/100 Hz 和80/100 Hz；共有7篇同時選用了2種（2 Hz和50 Hz）或3種（2 Hz、30 Hz和50 Hz）電針頻率，并比較了不同電針頻率之間的療效差異。

表1 動物的選取及模型制備情況

表2 針灸干預方式及穴位、穴方的選取情況

2.3.3 對照組的設置及療效對比

所納入的68 篇文獻中，僅有10 篇設置了陽性藥物對照組，其中鹽酸多奈哌齊7 篇、雷帕霉素2 篇、美金剛1 篇；11 篇設置了假針刺或非穴對照組，分別為2篇和9 篇。療效對比結果顯示，無論是普通針刺、電針、艾灸還是普通針刺加艾灸，其療效都優(yōu)于或等于陽性藥物；同時，普通針刺和電針的療效明顯優(yōu)于假針刺或非穴（表3）。

2.3.4 檢測方法及結局指標的選取

結局指標主要分為行為學指標和生化指標，其中38 篇同時選取了行為學指標和生化指標，6 篇只選取了行為學指標，22篇只選取了生化指標，1篇僅采用了HE 染色進行觀察。行為學檢測方法主要有Morris 水迷宮、Y 迷宮和穿梭箱實驗3 種，在進行行為學檢測的44 篇文獻中，使用 Morris 水迷宮的有 42 篇，Y 迷宮和穿梭箱實驗的各1 篇；所涉及的行為學指標共有14個，其中使用頻次較多的有逃避潛伏期、穿越平臺次數、目標象限游泳時間、目標象限游泳時間/總時間和首次穿越平臺時間等。生化指標的檢測方法共涉及16 種，使用頻次較多的有Western blot、免疫組化、ELISA、免疫熒光和RT-PCR 等；所檢測的生化指標共有118 個，其中使用頻次較多的有Aβ1-42、Aβ、IL-1β、18F-FDG、TNF-α和APP等。所檢測部位共涉及13個，其中主要的檢測部位為海馬、皮質和血清等（表4）。

3 討論

在長期的醫(yī)療實踐中，針灸對AD 的有效性和安全性已被大量研究所證實。既往對針灸治療AD 的動物實驗研究主要從調控腦內蛋白質的異常表達[7,8]、調控小膠質細胞的生理病理狀態(tài)[5,6,9]、發(fā)揮神經元保護效應[10]、調控氧化應激反應[11]和改善突觸可塑性[12-14]等方面進行探究。本文通過文獻整理發(fā)現(xiàn)，近5 年針灸治療AD的動物實驗研究主要從調控線粒體自噬[15]、調控表觀遺傳修飾[16]和調控能量代謝[17,18]等方面進行探究。研究人員采用了多種針灸干預方法，對不同品系和鼠齡的AD 模型進行了不同時程的治療，并采用多種檢測方法，對行為學和多個腦區(qū)的不同生化指標進行了檢測分析，基于不同作用機制對其進行了系統(tǒng)、全面且較為深入的研究，已取得了長足的進展，但其中還有一些內容值得關注，現(xiàn)論述如下。

表3 對照組的設置及療效對比情況

表4 檢測方法及結局指標的選取情況

3.1 側重比較不同穴位和不同穴方之間的療效差異

現(xiàn)有的臨床研究和實驗研究均證實針灸特定的穴位或穴方對AD 均有較好療效，但對于不同穴位和不同穴方之間的療效差異目前尚無深刻認識。本研究所納入的文獻中，涉及的穴方多達20 首，穴位多達27 個，但對不同穴方之間療效差異進行對比研究的文獻為零篇，而對不同穴位之間療效差異進行對比研究的也只有2篇，僅占總文獻量的2.94%。其中1篇研究表明，艾灸神闕、足三里或“神闕＋足三里”均能提高AD 模型大鼠血清及脂肪組織中脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體的水平，從而改善其學習記憶能力，且神闕、足三里和“神闕+足三里”三者的療效相當[19]；另一篇研究表明，電針三陰交和關元均能改善AD 模型鼠的學習記憶能力和下丘腦-垂體-卵巢軸的性腺激素水平，且三陰交的療效明顯優(yōu)于關元[20]。由此可知，確定不同穴位和不同穴方之間的療效差異，篩選療效較好的穴位或穴方，能夠為臨床選穴、組方提供充足的實驗依據，進而提高臨床療效。

3.2 關注干預時長和療程對針灸療效的影響

眾所周知，干預時長和療程是影響針灸療效的兩個關鍵因素。本研究納入的文獻中，所涉及的干預時長多達 14 種，最短的為 20-30 s[21]，最長的為 2 h[22]，療程多達 17 種，最短的為 3 天[23]，最長的為 90 天[21]，研究證實這些不同的干預時長和療程均會對AD 的治療產生積極作用，但是對不同干預時長和不同療程之間進行療效對比研究的文獻為0 篇。因此，在今后的實驗研究中應重點關注這兩個關鍵因素對針灸療效的影響，篩選出療效更好的干預時長和療程，以期更好的服務臨床。

3.3 重視不同針灸干預方法和不同刺激參數之間的療效對比

本研究納入文獻所涉及的針灸干預方法主要有普通針刺、電針、艾灸和普通針刺加艾灸4 種，各種干預方法對AD 均有較好的療效，但缺乏對它們之間進行療效對比的研究，因此在AD 的臨床治療中，對具體針灸方法的選取也缺乏科學合理的指導。電針主要包括脈沖電針和音樂電針，對兩種電針治療AD 的療效進行對比研究的文獻只有3 篇，僅占文獻總量的4.41%，這3篇研究均表音樂電針的療效優(yōu)于或等于脈沖電針[9,18,24]；同樣，對于不同艾灸因素治療AD 的療效進行對比研究的文獻也相對較少，只有2篇，僅占文獻總量的2.94%，這2 篇研究表明艾煙、艾灸和無煙艾灸的療效相當[25,26]。此外，不同刺激參數也影響針灸的療效，如不同頻率的電針在AD 的治療中也存在療效差異，有研究表明，電針治療作用的強弱與電針頻率密切相關，高頻（50 Hz）電針的療效要優(yōu)于中頻（30 Hz）和低頻（2 Hz）[27-33]。由此可知，把握不同針灸干預方法和不同刺激參數之間的療效差異，是提高針灸治療AD臨床療效的重要保障。

4 結語

本文對近5 年針灸治療AD 的動物實驗研究文獻從動物的選取及模型制備、針灸干預方式及穴位的選取、對照組的設置及療效對比、檢測方法及結局指標的選取等諸多方面進行了較為全面、細致的整理分析，發(fā)現(xiàn)針灸對AD 模型動物的行為學和生化指標均有較好的改善作用，肯定了其有效性和安全性。針灸治療AD 的動物實驗研究，其最終目的是指導臨床，提高臨床療效，因此，在今后應注重以下幾方面的研究：①加強對不同穴位和不同穴方之間的療效對比研究，明確治療AD 的特異性穴位和優(yōu)勢穴方；②重點關注不同干預時長和不同療程對針灸療效的影響，篩選出適宜AD 的干預時長和療程；③動態(tài)把握不同針灸干預方法（普通針刺、電針和艾灸等）和不同刺激參數（電針頻率、捻轉角度和捻轉頻率等）之間的療效差異，有效提高針灸治療AD的臨床療效。