產(chǎn)α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的菌株篩選、鑒定與酶學(xué)性質(zhì)的初步研究

陶大煒，寧喜斌,2,3,4*

1(上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院，上海，201306)2(上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海，201306)3(農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險評估試驗室(上海)，上海，201306)4(國家淡水水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)分中心(上海)，上海，201306)

環(huán)糊精 (cyclodextrin，CD)通常由6個以上D-吡喃葡萄糖基通過α-1,4-糖苷鍵相連而成的，由于葡萄糖基個數(shù)的不同，又被分為α-CD、β-CD和γ-CD這3種，它們是應(yīng)用最廣泛的環(huán)糊精，也稱基礎(chǔ)環(huán)糊精，其中α-CD有6個葡萄糖基，β-CD有7個，而γ-CD有8個[1]。環(huán)糊精分子結(jié)構(gòu)的外面部分具有親水的特點，因為含有親水基團，分子結(jié)構(gòu)的內(nèi)部相對就是疏水的，正因為其分子結(jié)構(gòu)特殊，從而可以包絡(luò)不同化合物，以改變它們物理和化學(xué)等性質(zhì)，因此環(huán)糊精可以被廣泛并且有效的利用，并運用于如食品工業(yè)、化妝品、藥品、環(huán)保、化學(xué)分析與檢測等諸多領(lǐng)域里[2-5]。

環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(cyclodextrin glycosyltransferase，CGTase)可作用于淀粉等，使底物的葡萄糖基團發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而獲得環(huán)糊精。CGTase可以催化4種不同的反應(yīng)：歧化反應(yīng)、環(huán)化反應(yīng)、偶合反應(yīng)和水解反應(yīng)(其中前3種為3種轉(zhuǎn)糖基反應(yīng))[6]。在工業(yè)應(yīng)用中，主要是利用CGTase的環(huán)化反應(yīng)作用，與淀粉等發(fā)生反應(yīng)后生產(chǎn)環(huán)糊精。

目前大致可歸納為篩選產(chǎn)酶野生菌株進行發(fā)酵生產(chǎn)、結(jié)合基因庫對產(chǎn)酶菌株的基因進行克隆表達、使用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對已知的基因片段進行改良這3種方法獲取CGTase，其中產(chǎn)酶野生菌株的篩選是直接有效的，同時也是其他方法的基礎(chǔ)[7]。在自然界中有很多菌株可生產(chǎn)CGTase，它們的分布很廣泛，既存在于火山、沙石、溫泉、油井等[8-11]環(huán)境，還存在于富含淀粉土壤的玉米、薯類、土豆、南瓜、甘蔗等[12]的種植地，同時這些野生菌株的種類眾多。

國內(nèi)外學(xué)者主要致力于篩選高產(chǎn)且性質(zhì)穩(wěn)定的野生菌株、提高酶的熱穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性、優(yōu)化菌株的產(chǎn)酶條件提高酶活性、物理化學(xué)誘變與在工程菌株中的異源表達提高酶活性等。MARTINS等[8]篩選出的包含黏瓊脂芽孢桿菌(Bacillusagaradhaerens)所產(chǎn)CGTase酶活性較低，僅有0.31 U/mL，需要通過產(chǎn)酶條件優(yōu)化等方式提高其酶活性。COELHOSL等[12]篩選出的芽孢桿菌(Bacillussp.)產(chǎn)β-CGTase的熱穩(wěn)定性較差，限制了其在工業(yè)上的應(yīng)用能力。張佳瑜等[13]將來自于浸麻類芽孢桿菌(Paenibacillusmacerans)的產(chǎn)α-CGTase酶的基因進行克隆，并優(yōu)化產(chǎn)酶條件，酶活性從1.9 U/mL提高到4.5 U/mL，說明基因的克隆表達和產(chǎn)酶條件優(yōu)化有助于提高酶活性。雷新輝[5]篩選出的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)產(chǎn)α-CGTase酶活性為0.64 U/mL，經(jīng)復(fù)合誘變處理后，活性提高到5.68 U/mL，說明誘變育種對于菌株的產(chǎn)酶活性有很大影響。

為了使環(huán)糊精的工業(yè)化生產(chǎn)能夠?qū)崿F(xiàn)，同時降低成本，找到產(chǎn)酶活性高、穩(wěn)定性良好的野生菌株是關(guān)鍵。本試驗從上海浦東新區(qū)新場鎮(zhèn)某農(nóng)場馬鈴薯、紅薯、玉米種植田分離、篩選產(chǎn)α-CGTase的菌株，對其中1株酶活性較高的菌株進行形態(tài)學(xué)特征、生理生化試驗鑒定和16S rRNA序列比對分析，對其酶學(xué)性質(zhì)進行了初步研究，以期為進一步工業(yè)化開發(fā)利用性狀穩(wěn)定且高產(chǎn)α-CGTase的菌株提供借鑒，旨在為工業(yè)生產(chǎn)α-CGTase及其應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種來源

2019年8月于上海浦東新區(qū)新場鎮(zhèn)某農(nóng)場馬鈴薯、紅薯、玉米種植田(121.658 766 °E，31.052 923 °N)采集樣品，用無菌采樣器采集3～10 cm深的土壤樣品，樣品采集后放入無菌取樣袋，并在2 h內(nèi)送回試驗室進行處理分析。

1.1.2 試劑

PCR擴增試劑盒、酵母浸粉、DNA提取試劑盒、可溶性淀粉、蛋白胨等, 上海生工生物工程股份有限公司；α-CD, Sigma(上海)公司；NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O,國藥集團化學(xué)試劑有限公司；Na2CO3，上?？蚂`斯試劑有限公司；酚酞、甲基橙，上海麥克林生化科技有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基

初篩培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉10，蛋白胨5，酵母浸粉5，瓊脂15，NaCl 5，Na2CO31，K2HPO4·3H2O 1，MgSO4·7H2O 0.2，酚酞 0.3，甲基橙 1，自然pH，121 ℃，0.1 MPa滅菌20 min。

復(fù)篩培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉10，蛋白胨5，酵母浸粉5，NaCl 1，Na2CO30.5，K2HPO4·3H2O 1，MgSO4·7H2O 0.2，pH 7.0，121 ℃，0.1 MPa滅菌20 min。

發(fā)酵培養(yǎng)基及種子培養(yǎng)基，同復(fù)篩培養(yǎng)基。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1800PC紫外可見分光光度計，上海美譜達儀器有限公司；立式高壓蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；超凈工作臺，蘇凈集團安泰公司；THZ-300C恒溫培養(yǎng)搖床、GHP-9 270隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HWT-6B恒溫水浴箱，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司；CX41RF顯微鏡，東京奧林匹斯公司；高速臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；PTC-200 PCR儀、GelDoc XR凝膠成像系統(tǒng)，美國Bio-Rad公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 產(chǎn)α-CGTase菌株的初篩

分別取土豆、紅薯、玉米種植田土樣10 g加入到90 mL含玻璃珠的無菌水中，充分振蕩40 min。取1 mL 上述混合液加入99 mL營養(yǎng)肉湯，37 ℃，170 r/min條件富集培養(yǎng)24 h。使用生理鹽水進行梯度稀釋，并將稀釋液(100 μL)均勻涂布于初篩培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)48 h。以出現(xiàn)黃色透明圈作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，將篩選出的菌株分離純化，4 ℃條件下進行保藏。

1.3.2 產(chǎn)α-CGTase菌株的復(fù)篩

粗酶液的制備：發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量100 mL/250 mL，菌種接種量為4%的種子培養(yǎng)基，37 ℃、170 r/min搖床培養(yǎng)48 h，于10 000 r/min離心10 min后所得上清液即為粗酶液。

α-CGTase活力的測定：采用甲基橙褪色法測定酶的環(huán)化活力。在酸性(pH 1.1～1.4)條件下，α-CD與甲基橙發(fā)生反應(yīng)，形成絡(luò)合物，使溶液的吸光度下降。在一定范圍內(nèi)，吸光度的下降與α-CD的濃度存在著線性關(guān)系[4,14]。用50 mmol/L Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液(pH 6.0)配制40 g/L的可溶性淀粉溶液做底物，取0.9 mL于試管中，加入適當(dāng)稀釋的粗酶液0.1 mL，均勻混合。50 ℃水浴反應(yīng)10 min，加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL中止反應(yīng)。再加入0.1 mmol/L 甲基橙溶液1 mL，于20 ℃靜置15 min， 507 nm測定吸光度[15]。對應(yīng)α-CD標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，1個酶活單位(U)定義為上述條件下1 min生成1 μmol α-CD所需的酶量。

1.4 菌種鑒定

1.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定

觀察純化后菌株的菌落形態(tài)。挑取單菌落進行革蘭氏染色鏡檢，觀察菌體形態(tài)。

1.4.2 生理生化鑒定

根據(jù)相關(guān)文獻[16-17]，對菌株進行生理生化鑒定試驗，主要包括水解淀粉試驗、吲哚試驗、硝酸鹽還原、接觸酶、分解酪氨酸、甘露醇、葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、阿拉伯糖、棉籽糖利用等。

1.4.3 16S rRNA基因序列分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹

根據(jù)細菌總DNA提取試劑盒說明提取菌株DNA。PCR擴增采用通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1 492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)。PCR擴增產(chǎn)物送至上海生工生物公司測序，登入NCBI(National Center for Biotechnology Information)，BLAST比對測序結(jié)果，獲取同源性高的菌株的16S rRNA基因序列，使用MEGA-X軟件中的鄰接法(neighbor-joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并對其分析鑒定[18]。通過Bankit將菌株鑒定的16S rRNA基因的部分序列向GenBank申請登錄號(GenBank Accession)。

1.5 酶學(xué)性質(zhì)初步研究

1.5.1 酶的最適作用溫度

用Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液(pH 6.0)稀釋粗酶液和甲基橙溶液，設(shè)定20、30、40、45、50、55、60、70、80 ℃，9個反應(yīng)溫度。按照上述不同反應(yīng)溫度的條件，對各反應(yīng)溫度條件下的樣品分別測定其α-CGTase活性，將酶活性最高者定義為100%，并計算相對酶活性。

1.5.2 酶的熱穩(wěn)定性

取適量無菌粗酶液分裝于離心管，分別在40、45、50、55、60 ℃，5個保溫溫度條件下分別保溫不同時間。按照上述不同保溫溫度和時間的條件，對各保溫條件下的樣品分別在不同保溫時間下分別測定其α-CGTase活性，將未進行保溫處理的酶活性定義為100%，并計算相對酶活性。

1.5.3 酶的最適作用pH

分別配制濃度為50 mmol/L的檸檬酸鹽緩沖液(pH 3.0～5.0)、Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液(pH 6.0～8.0)、甘氨酸-NaOH緩沖液(pH 8.0～10.0)，Na2HPO4-NaOH緩沖液(pH 11.0～12.0)[15]。設(shè)定pH 3.0～12.0，10個反應(yīng)pH。按照上述不同反應(yīng)pH的條件，對各反應(yīng)pH條件下的樣品分別測定其α-CGTase活性，將酶活性最高者定義為100%，并計算相對酶活性。

1.5.4 酶的pH穩(wěn)定性

先將粗酶液與不同pH值(3.0～12.0)的緩沖液混合，放置處理1、2 h。按照上述不同反應(yīng)pH和處理時間的條件，對各pH處理條件下的樣品分別在1、2 h下分別測定其α-CGTase活性，將未經(jīng)過不同pH緩沖液處理的酶活性定義為100%，并計算相對酶活性。

1.5.5 金屬離子對酶活力的影響

配制濃度為1 mmol/L的不同金屬離子(K+、Zn2+、Mn2+、Cu2+、Mg2+、Ca2+、Fe2+、Co2+)溶液，分別取適量與粗酶液混勻。對添加不同金屬離子的樣品分別測定其α-CGTase活力，將未添加金屬離子的酶液作為對照組，定義其酶活力為100%，并計算各組相對酶活力。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種篩選

初篩培養(yǎng)基因加入酚酞而呈紅色，菌株所產(chǎn)α-CGTase可降解培養(yǎng)基中的可溶性淀粉形成環(huán)糊精，環(huán)糊精可包埋酚酞，使菌株周圍呈現(xiàn)黃色透明圈，透明圈越大，說明菌株產(chǎn)α-CGTase越多[19]。據(jù)此從土壤中篩選出117株產(chǎn)α-CGTase的菌株，從中挑選出透明圈直徑與菌落直徑比值較大的菌株30株進行發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)復(fù)篩，通過甲基橙褪色法分別測定酶活性，獲得酶活性較高(表1)菌株TLLY7。本試驗將菌株TLLY7作為出發(fā)菌株，進行后續(xù)試驗，其酶性活為1.35 U/mL，這與其他學(xué)者篩選出的野生菌株的酶活性相似，例如陳龍然[4]篩選出的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)產(chǎn)α-CGTase的酶活性(0.95 U/mL)、陳龍軍等[20]篩選出的嗜熱芽胞桿菌(Gebacilliussp.)產(chǎn)α-CGTase的酶活性(0.66 U/mL)、葉學(xué)軍[21]篩選出的地芽孢桿菌(Geobacilluscaldoxylosilyticus)產(chǎn)α-CGTase的酶活性(1.29 U/mL)，低于他們進行復(fù)合誘變、產(chǎn)酶條件優(yōu)化和基因的克隆與表達等方法后的酶活性，分別為2.28、5.3和6.18 U/mL，這說明篩選出活性高的野生菌株只是完成了第1步，只依靠野生菌株發(fā)酵有很大的局限性，需要結(jié)合其他方法提高酶活性，才有更大的工業(yè)應(yīng)用潛力。

表1 產(chǎn)α-CGTase部分菌株的篩選結(jié)果Table 1 Screening results of α-CGTase producing strains

2.2 菌種鑒定

2.2.1 菌種的形態(tài)觀察

菌株TLLY7為革蘭氏陽性，菌體成桿狀，有芽孢產(chǎn)生。圖1-a為菌株TLLY7在初篩培養(yǎng)基上的菌落透明圈形態(tài)。圖1-b為菌株TLLY7平板菌落形態(tài)，菌落呈黃白色，圓形隆起，不光滑，不透明，大小2～5 mm，有褶皺，邊緣整齊。圖1-c為菌株TLLY7經(jīng)革蘭氏染色后在油鏡下的觀察圖。

a-初篩培養(yǎng)基菌落透明圈形態(tài)；b-平板菌落形態(tài)；c-細胞顯微形態(tài)圖1 菌株 TLLY7 菌落形態(tài)和在油鏡下的細胞形態(tài)Fig.1 The colony morphology and cell morphology under oil immersion lens of strain TLLY7

2.2.2 生理生化鑒定

根據(jù)相關(guān)文獻[16-17]，對菌株TLLY7進行生理生化鑒定。表2為菌株TLLY7的生理生化鑒定結(jié)果。

表2 菌株TLLY7的生理生化特征Table 2 Biochemical characteristics of strain TLLY7

2.2.3 16S rRNA鑒定及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

圖2為菌株TLLY7的PCR產(chǎn)物電泳條帶圖。由圖2可知菌株TLLY7經(jīng)PCR擴增后，條帶約1 500 bp，擴增產(chǎn)物經(jīng)測序得到的16S rRNA序列為1 480 bp，登錄NCBI官網(wǎng)上傳序列并進行BLAST比對，結(jié)果顯示高于Ident值96%的菌株有100多株，說明較多菌株與菌株TLLY7序列相似，將它們序列下載后通過MEGA-X的NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)[18, 22]。由圖3可發(fā)現(xiàn)菌株TLLY7和P.maceransNBRC 15 307T(NR 112729.1)在同一分支上，其相似性高達98.91%，說明兩者同為類芽孢桿菌屬，且Bootstrap檢驗值為100，說明發(fā)育樹所表示的2種菌株之間的進化關(guān)系可信[23]。結(jié)合形態(tài)學(xué)、生理生化鑒定可確定菌株TLLY7為浸麻類芽孢桿菌(P.macerans)。將菌株TLLY7的核酸序列通過Bankit向GenBank申請的登錄號為MT 705866。

圖3 基于16S rRNA序列分析的菌株TLLY7的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of strain TLLY7 based on 16S rRNA sequence analysis

2.3 菌株TLLY7酶學(xué)性質(zhì)初步研究

2.3.1 α-CD標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法繪制α-CD標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為y=0.546 1x-0.000 8，R2=0.999 1，表明線性良好。

2.3.2 酶的最適作用溫度

圖4為溫度對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase活性的影響。當(dāng)反應(yīng)溫度在20～50 ℃，酶活性不斷升高，從30 ℃開始酶活性升高的很快。溫度高于50 ℃，酶活性開始下降。尤其是溫度高于60 ℃后，酶活性下降的很快，在80 ℃時酶活性僅15%。溫度在40～60 ℃，酶活性保持在80%以上。所以酶的最適作用溫度為50 ℃，是中溫酶。該酶的最適反應(yīng)溫度低于張曉磊[19]從黃海海域中篩選出的包含黏瓊脂芽孢桿菌所產(chǎn)α-CGTase的最適反應(yīng)溫度(55 ℃)，低于張昌志[24]從羅漢果中篩選出的解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)所產(chǎn)β-CGTase的最適反應(yīng)溫度(60 ℃)，具有節(jié)約工業(yè)應(yīng)用的能源，提高發(fā)酵效率的潛力。

圖4 溫度對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase活力的影響Fig.4 Effects of temperature on the α-CGTase produced by TLLY7

2.3.3 酶的熱穩(wěn)定性

圖5為溫度對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase熱穩(wěn)定性的影響。在40 ℃下保溫2 h酶活性保留82%，保溫6 h保留30%的酶活性。在45 ℃保溫1 h酶活性保留90%，保溫5 h保留30 %酶活性。在50 ℃保溫1.5 h，酶活性保留50%。在55 ℃保溫0.75 h酶活性喪失50%。在60 ℃保溫1 h酶活性保留28%。陳龍然[4]從淀粉廠泥土中篩選出的地衣芽孢桿菌所產(chǎn)α-CGTase在60 ℃保溫1 h酶活性保留17%。本試驗所產(chǎn)α-CGTase熱穩(wěn)定性相對較好，但熱穩(wěn)定性仍需要提高。因為酶的熱穩(wěn)定性不足會限制酶的工業(yè)化應(yīng)用，所以還需要進行試驗提高酶的熱穩(wěn)定性。

圖5 溫度對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase穩(wěn)定性的影響Fig.5 Effects of temperature on the stability of α-CGTase produced by TLLY7

2.3.4 酶的最適作用pH

圖6為pH對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase的影響。pH 3.0～4.0，酶活力很低。pH 4.0～6.0，酶活性升高的很快。pH>6.0，酶活性不斷下降。pH 12.0時，酶活性僅5%。表明本試驗所產(chǎn)α-CGTase的最適作用pH值為6.0，是弱酸性酶。

圖6 pH對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase活力的影響Fig.6 Effects of pH on the α-CGTase produced by TLLY7

2.3.5 酶的pH穩(wěn)定性

圖7為pH對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase穩(wěn)定性的影響。在pH 6.0～8.0，處理1 h酶活性保留95%以上，處理2 h酶活性保留90%以上。pH值<6.0或>8.0，酶活性明顯下降。pH 3.0和12.0處理1 h分別保留9%和11%酶活性，處理2 h酶幾乎失活。該酶在pH 10.0處理1 h保留77%酶活性。曹冬梅[25]從長白山溫泉泥土中篩選出的高溫芽孢桿菌所產(chǎn)β-CGTase在pH 10.0處理1 h保留60%酶活性。本試驗的pH穩(wěn)定性相對較好，具有更寬pH范圍的應(yīng)用前景。

圖7 pH對TLLY7所產(chǎn)α-CGTase穩(wěn)定性的影響Fig.7 Effects of pH on the stability of α-CGTase produced by TLLY7

2.3.6 金屬離子對酶活的影響

由圖8可知，對酶有不同程度的促進作用的是Zn2+、Mn2+和Ca2+，而對酶的促進作用最強的是Ca2+，相對酶活性約為空白對照的1.25倍。對酶有不同程度的抑制作用的是Cu2+、Fe2+和Co2+，其中對酶的抑制作用最強的是Cu2+，酶活性被抑制33%左右，可能由于離子結(jié)合蛋白的作用區(qū)域而抑制酶活。K+、Mg2+對酶活力的影響不是很明顯。這與國內(nèi)外學(xué)者篩選的菌株所產(chǎn)α-CGTase的性質(zhì)相似，具有參考意義[26-27]。

圖8 金屬離子對α-CGTase活力的影響Fig.8 Effects of metal ions on the α-CGTase activity

3 結(jié)論與討論

本試驗利用甲基橙-酚酞平板法和甲基橙褪色法從上海浦東新區(qū)新場鎮(zhèn)某農(nóng)場土豆、紅薯、玉米種植田分離出1株高產(chǎn)α-CGTase的菌株TLLY7，16S rRNA測序分析其基因序列，經(jīng)BLAST比對后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、生理生化鑒定后確定該菌株為浸麻類芽孢桿菌，命名為P.maceransTLLY7。將菌株TLLY7的核酸序列通過Bankit向GenBank申請的登錄號為MT 705866。

菌株TLLY7產(chǎn)α-CGTase的酶活性為1.35 U/mL，酶學(xué)性質(zhì)的初步研究表明，50 ℃、pH 6.0為該酶的最適反應(yīng)條件，為弱酸性中溫酶。該酶在40～45 ℃保溫1 h保留90%以上的酶活性，在60 ℃保溫1 h保留27%酶活性，pH 6.0～9.0處理1 h保留95%以上的酶活性，處理2 h保留90%以上的酶活性，熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性較好。Zn2+、Mn2+和Ca2+對酶有促進作用，Cu2+、Fe2+和Co2+對酶有抑制作用。其中Ca2+對酶的促進作用最強，Cu2+對酶的抑制作用最強。K+、Mg2+對酶活性的影響作用較小。

由于環(huán)糊精具有特殊的分子結(jié)構(gòu)，可以包絡(luò)不同化合物，改變它們理化性質(zhì)，目前被應(yīng)用到了多個領(lǐng)域，例如在食品領(lǐng)域中可以達到抗氧化、保護色素等效果，使使提高食品的貯藏時間、改善食品的保存；在醫(yī)藥領(lǐng)域中可以改變藥物的性質(zhì)使得藥物刺激減少、提高藥物的穩(wěn)定性和降低毒副作用等效果，使藥品更能被人們接受，還可被應(yīng)用于化妝品、環(huán)保、化學(xué)分析與檢測等諸多領(lǐng)域，因此對CGTase的產(chǎn)酶菌株進行分離純化和酶學(xué)性質(zhì)的研究是很有意義的[5]。本試驗篩選出的產(chǎn)α-CGTase野生菌株可為未來的工作奠定基礎(chǔ)，也為酶的分離純化與工業(yè)化應(yīng)用提供了依據(jù)。