血漿miR-26b 表達(dá)鑒別診斷急性呼吸窘迫綜合征和急性心力衰竭的臨床價(jià)值

呂小波,郜長(zhǎng)江,胡洪磊

急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是臨床常見(jiàn)的急危重癥,病死率極高[1]。ARDS 是在嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等非心源性肺內(nèi)外疾病過(guò)程中,肺部毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫,導(dǎo)致急性低氧性呼吸功能不全或衰竭[2]。急性心力衰竭(acute heart failure,AHF)是指繼發(fā)于心臟功能異常而迅速發(fā)生或惡化的癥狀和體征,并伴有血漿利鈉肽水平提高,既可能是急性起病,也可能表現(xiàn)為慢性心力衰竭急性失代償,其中后者更為常見(jiàn),占70%～80%,臨床上又以急性左心衰竭最為常見(jiàn)[3]。AHF 常危及病人生命,必須快速診斷并進(jìn)行緊急施救和治療[4]。由于臨床上重癥監(jiān)護(hù)室(intensive care unit,ICU)病人常處于平臥位,且由于鎮(zhèn)靜原因不能遵照指令呼氣、吸氣,在胸部X 線(xiàn)片上多表現(xiàn)出心影增大,因此,ARDS 病人需要與AHF 病人進(jìn)行鑒別[5]。目前,臨床常用超聲心電圖對(duì)二者進(jìn)行鑒別,但易受外界因素干擾,在快速鑒別兩種疾病過(guò)程中存在不足。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一類(lèi)由19～25nr組成的小分子編碼RNA,通過(guò)與靶基因3"非翻譯區(qū)堿基的互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因蛋白表達(dá)[6]。miR-26b 存在于2 號(hào)染色體CTDSP1 基因第4 個(gè)內(nèi)含子,多富集于心臟[7]。miR-26b 與心臟功能有關(guān),但是否能夠作為AHF 與ARDS 疾病鑒別診斷的指標(biāo)仍缺乏相關(guān)研究,因此,本研究探討血漿miR-26b 水平對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月—2019 年8 月我院收治的ARDS 病人45 例作為ARDS 組,年齡(63.7±12.5)歲,其中男24 例,女21 例;AHF 病人50 例作為AHF 組,年齡(65.4±11.8)歲,其中男28 例,女22 例。兩組年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn):①胸部X 線(xiàn)片顯示雙肺均有滲出性表現(xiàn);②ARDS 組符合2012 年柏林會(huì)議制訂的ARDS 標(biāo)準(zhǔn)[8];③AHF 組符合2010 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):①有慢性心力衰竭、繼發(fā)肺動(dòng)脈栓塞、肺源性心臟病、慢性肺阻塞肺疾病、肺間質(zhì)纖維化病人;②超聲心動(dòng)圖檢查圖像不清晰者。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),病人及家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 主要試劑及儀器 RNA 提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司,DP443)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京天根生化科技有限公司,FP209);臺(tái)式離心機(jī)(美國(guó),Beekman 公司)、高速冷凍離心機(jī)(德國(guó),EPPENDORF 公司)、超低溫冷凍冰箱(德國(guó),Siemens 公司)、多功能酶標(biāo)儀(瑞士,TECAN 公司)、熒光定量PCR 儀AB17500(美國(guó),ABI 公司)。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 兩組受試者于入院第2 日清晨空腹?fàn)顟B(tài)下,抽取靜脈血5 mL,以3.8%枸櫞酸鈉抗凝,常溫下靜置1～2 h,再使用離心機(jī)在4 ℃下3 000 r/min 離心15 min。離心后取出離心管,將上層血漿移至滅菌的EP 管中,并放置于-80 ℃保存。

1.3.2 qRT-PCR 法檢測(cè)血漿中miR-26b 水平 按試劑盒說(shuō)明書(shū)提取血漿總RNA,按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,產(chǎn)物置于- 20 ℃保存。使用 Reverse Transcription Kit(Takara)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRTPCR)檢測(cè)miR-26b 含量。利用ABI7500 系統(tǒng)進(jìn)行qRT-PCR 反應(yīng)。反應(yīng)條件為:95 ℃10 min,95 ℃15 s,72 ℃15 s,共40 個(gè)循環(huán)。采用2-△△CT法對(duì)血清miR-26b 表達(dá)水平進(jìn)行定量分析,以U6 為內(nèi)參,記錄每個(gè)反應(yīng)的Ct 值。引物序列見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.4 觀察指標(biāo) ARDS 病人于入院第1 天、AHF 病人于發(fā)病第1 天尚未采取利尿措施時(shí),進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)、床旁胸片檢測(cè)及血?dú)夥治觥３曅碾妶D由心臟超聲科專(zhuān)業(yè)醫(yī)師進(jìn)行檢測(cè)。左室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD):采用二維超聲胸骨旁長(zhǎng)軸圖像測(cè)量二尖瓣腱索水平的左室短軸內(nèi)徑;下腔靜脈直徑(inferior vena cava diameter,IVCD):病人于俯臥位,測(cè)量劍突下下腔靜脈長(zhǎng)軸距離右房入口2 cm 處的內(nèi)徑;左房壓測(cè)量:采用多普勒超聲技術(shù)測(cè)量二尖瓣最大反流速度,估測(cè)左房壓;肺動(dòng)脈壓力:采用連續(xù)多普勒超聲技術(shù)測(cè)量三尖瓣最大反流速度,估測(cè)肺動(dòng)脈收縮壓。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn);采用受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC)分析血漿中miR-26b、超聲心動(dòng)圖對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別診斷價(jià)值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組病人一般資料比較 兩組病人年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、空腹血糖比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 兩組病人一般資料比較

2.2 兩組血漿miR-26b 表達(dá)水平比較 ARDS 組血漿miR-26b 表達(dá)水平高于AHF 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳見(jiàn)表3。

2.3 兩組超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較 ADRS 組LVEDD、IVCD 均低于AHF 組(P＜0.05),兩組左房壓升高及肺動(dòng)脈壓升高例數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見(jiàn)表4。

表3 兩組血漿miR-26b 表達(dá)水平比較(±s)

表3 兩組血漿miR-26b 表達(dá)水平比較(±s)

注:t =7.577,P ＜0.001。

組別 例數(shù) miR-26b ARDS 組 45 9.48±2.47 AHF 組 50 6.08±1.89

表4 兩組超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較

2.4 血漿miR-26b、LVEDD、IVCD 對(duì)急性呼吸窘迫及AHF 的鑒別診斷價(jià)值 ROC 結(jié)果顯示,血漿miR-26b表達(dá)水平鑒別診斷ARDS 和AHF 的ROC 曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.855,敏感度為71.1%,特異性為86.0%,95%CI(0.781,0.929);超聲心動(dòng)圖(LVEDD 聯(lián)合IVCD)鑒別診斷ARDS 和AHF 的AUC 為0.799,敏感度為82.2%,特異性為72.0%,95%CI(0.709,0.899)。miR-26b 與超聲心動(dòng)圖對(duì)ARDS、AHF 的診斷結(jié)果一致(P＞0.05)。詳見(jiàn)表5 及圖1。

表5 miR-26b、超聲心動(dòng)圖對(duì)ARDS、AHF 鑒別診斷價(jià)值比較

圖1 血漿中miR-26b 水平、超聲心動(dòng)圖鑒別診斷ARDS、AHF 的ROC 曲線(xiàn)圖

3 討 論

ARDS 是常見(jiàn)的危重病,嚴(yán)重危害病人生命健康,已成為重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題[9]。ARDS 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且不完全明確,目前認(rèn)為主要有兩種可能機(jī)制:①細(xì)菌負(fù)荷、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及炎癥介質(zhì)的釋放[10];②肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡及肺泡表面活性物質(zhì)系統(tǒng)的變化。越來(lái)越多的研究證明miRNAs 參與了ARDS 的發(fā)生與發(fā)展[11]。AHF 在臨床上以急性左心衰最為常見(jiàn)。急性左心衰是急性發(fā)作或加重的左心功能異常所導(dǎo)致的心肌收縮力明顯降低,心臟負(fù)荷加重,造成急性心排血量驟減,肺循環(huán)壓力突升,周?chē)h(huán)阻力增大,引起肺循環(huán)充血而出現(xiàn)急性肺淤血、肺水腫的臨床綜合征[12]。急性右心衰竭是某些原因?qū)е掠倚氖倚募∈湛s力急劇下降或右心室前后符合突然加重,導(dǎo)致右心排血量急劇降低的臨床綜合征[13]。ARDS 與AHF 在臨床診斷過(guò)程中具有極高的相似度,為了確保病人的病情得到及時(shí)診治,采取有效的手段鑒別兩種疾病迫在眉睫。臨床鑒別兩種疾病常采用超聲心動(dòng)圖,但是其操作過(guò)程受操作者能力的影響較大,診斷指標(biāo)存在一定局限性,而miR-26b 檢測(cè)具有方便、快捷、結(jié)果規(guī)范統(tǒng)一等優(yōu)點(diǎn)。因此,本研究探討miR-26b 作為鑒別兩種疾病指標(biāo)的可能性與診斷價(jià)值。ARDS 和AHF都可導(dǎo)致胸腔積液增多,在胸部X 線(xiàn)片上表現(xiàn)為雙肺滲出[14-15]。有研究表明,ARDS 病人及AHF 病人胸部X 線(xiàn)片均有部分表現(xiàn)為心影增大,因此,ARDS 及AHF疾病很難以彌散性滲出的胸片來(lái)進(jìn)行鑒別[16]。目前已有研究證明,miRNAs 與ARDS 的發(fā)生發(fā)展有關(guān),證實(shí)miRNAs 在炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡中具有重要作用[17];且miRNAs 被認(rèn)為是心血管診斷和預(yù)后具有研究前景的生物標(biāo)志物。有研究表明,miR-26b 水平與冠狀動(dòng)脈病變具有相關(guān)性,可作為冠狀動(dòng)脈病變程度的參考指標(biāo)[18]。本研究結(jié)果表明,與AHF 組相比,ARDS 組血漿miR-26b 水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),提示miR-26b 是鑒別ARDS 及AHF疾病的潛在生物學(xué)指標(biāo)。

超聲心動(dòng)圖是一種利用超聲原理進(jìn)行心血管疾病診斷的方法,具有較高的靈活性,能對(duì)心臟進(jìn)行全方位多角度的檢查,具有經(jīng)濟(jì)、無(wú)創(chuàng)、無(wú)放射性等優(yōu)點(diǎn)[19]。目前,有研究表明,超聲心動(dòng)圖檢測(cè)一定程度上能夠鑒別ARDS 及AHF[20]。本研究通過(guò)對(duì)兩組病人進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢測(cè),結(jié)果顯示,LVEDD 與IVCD 能夠協(xié)助鑒別ARDS 與AHF,左房壓升高及肺動(dòng)脈壓升高則對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別無(wú)顯著性影響。ROC 結(jié)果顯示,miR-26b 對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別具有較好的診斷價(jià)值,AUC 為0.855,敏感度為71.1%,特異性為86.0%;超聲心動(dòng)圖鑒別診斷ARDS 及AHFF 的AUC 為0.799,敏感度為82.2%,特異性為72.0%,miR-26b 與超聲心動(dòng)圖對(duì)ARDS、AHF 的診斷結(jié)果一致,miR-26b 對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別診斷與超聲心動(dòng)圖診斷相比效果一致,表明超聲心動(dòng)圖和miR-26b 均能對(duì)ARDS 及AHF 進(jìn)行鑒別,但miR-26b 的操作更為簡(jiǎn)單、規(guī)范,受人為操作及客觀外在條件影響較小,具有更快捷、高效的優(yōu)勢(shì),提示miR-26b 可以作為ARDS、AHF 鑒別診斷的指標(biāo)。

綜上所述,miR-26b 在ARDS 病人血漿中呈高表達(dá),在AHF 病人血漿中呈低表達(dá),且ROC 結(jié)果顯示,miR-26b 與超聲心動(dòng)圖對(duì)ARDS、AHF 的鑒別診斷結(jié)果一致,但miR-26b 能夠更為快捷、規(guī)范,對(duì)ARDS 及AHF 的鑒別診斷具有一定價(jià)值。