麒麟尾組培苗繁殖生產(chǎn)技術(shù)

傅海平 陳生龍 江 南 謝小堅(jiān) 韋 晴

（1.東莞市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心，廣東 東莞 523000；2.東莞市訊禾園藝科技有限公司，廣東 東莞 523000）

麒麟尾（Epipremnumpinnatum）屬天南星科多年生常綠藤本觀葉植物，原產(chǎn)我國(guó)南部的廣東、廣西、海南等?。ㄗ灾螀^(qū)）及東南亞等地。麒麟尾葉長(zhǎng)卵心形，葉綠且富有光澤，成熟葉為羽裂狀，易攀爬，其因特殊的品種特性近年來(lái)被廣泛用于垂直綠化。

扦插繁殖是麒麟尾繁殖方法中的一種，但扦插繁殖量少，整齊度不好，不能滿足市場(chǎng)需求。組培法是短期內(nèi)快速繁殖大批量種苗的方法，不受氣候季節(jié)等影響。關(guān)于麒麟尾組織培養(yǎng)的研究報(bào)道不多，有研究為了品種的進(jìn)一步推廣繁殖，用TDZ誘導(dǎo)叢生芽［1］。本試驗(yàn)用6-BA對(duì)麒麟尾進(jìn)行愈傷組織及叢生芽誘導(dǎo)、小苗溫室馴化研究，以期為品種規(guī)?；a(chǎn)尋找良好的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選取生長(zhǎng)良好的麒麟尾盆栽，品種來(lái)源于廣東省東莞市訊禾園藝科技有限公司。先用農(nóng)地樂(lè)1 000倍液灌根處理，滅除基質(zhì)中的蟲卵；再干水處理；待三四天水分完全干后，選一年生無(wú)病蟲害的健壯頂芽作外植體，切5～6 cm的帶頂芽莖稈（見(jiàn)圖1）。

圖1 麒麟尾消毒后的頂芽

1.2 方法

1.2.1 外植體處理。對(duì)新剪切的麒麟尾取其頂芽，放到凈水中用毛筆輕刷干凈，放在流動(dòng)的自來(lái)水中沖洗0.5h。用無(wú)菌水沖洗莖段3次后用75%乙醇消毒10 s，再用無(wú)菌水沖洗兩三次，用0.1%氧化汞消毒8 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～7次（以上每次無(wú)菌水沖洗時(shí)分別手搖1 min），用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分。在超凈工作臺(tái)上用手術(shù)刀片將消毒后的莖切成2～3 cm小段［2-3］。

1.2.2 愈傷組織誘導(dǎo)。以MS為基本培養(yǎng)基，共設(shè)計(jì)了4種培養(yǎng)基用于麒麟尾外植體愈傷組織的誘導(dǎo)，分別為C1，MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C2，MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C3：MS+6-BA4.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C4：MS+6-BA5.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；所有培養(yǎng)基的pH值均為5.8～6.0，每個(gè)配方加蔗糖30 g/L、卡拉膠5 g/L。共接20瓶，每瓶接種1個(gè)莖段，試驗(yàn)重復(fù)3次。接種后放入培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，前7 d暗培養(yǎng)，7 d后光照培養(yǎng)，光照度為40～50μmoL/（m·s），光照時(shí)間為12h/d，培養(yǎng)溫度（25±2）℃［4-6］。調(diào)查愈傷組織誘導(dǎo)率。

1.2.3 不定芽誘導(dǎo)和繼代。挑選直徑在1 cm左右的帶芽小塊，轉(zhuǎn)入4種不同的分化培養(yǎng)基中。對(duì)芽直徑大于2.5 mm的粗芽按2～4芽/團(tuán)進(jìn)行切割，并采用對(duì)剖方式破壞其生長(zhǎng)點(diǎn)，若新芽抽出長(zhǎng)度大于20 mm，去頂；對(duì)芽直徑小于或等于2 mm的細(xì)小芽，以8～10 mm的團(tuán)塊直徑進(jìn)行切割，將切割好的芽團(tuán)接種于不同培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)。

不定芽增殖培養(yǎng)基為B1，MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L；B2，MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L；B3，MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.mg/L；B4，MS+6-BA2.5 mg/L+NAA0.5 mg/L，生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.5 mg/L+1%活性炭+蔗糖30g/L+卡拉膠5.4g/L。在光照條件下培養(yǎng)，光照度為40～50μmoL/（m·s），光照時(shí)間為12h/d，溫度（25±2）℃。

1.2.4 麒麟尾組培苗移栽。當(dāng)生根培養(yǎng)的瓶苗長(zhǎng)至2.5～3.0 cm時(shí)，用自來(lái)水洗凈根部的培養(yǎng)基后放于1 000倍多菌靈消毒液中浸泡30 s，移栽到裝有不同基質(zhì)［如按照m（細(xì)泥炭或泥炭）∶m（珍珠巖）=6∶1混合的基質(zhì)或使用、國(guó)產(chǎn)泥炭］的穴盤中，每種處理1 000株。種植過(guò)程中大小分級(jí)，不要損害根系，前期每天早晚各噴水1次，溫度控制在27～30℃。后期濕度可降低到60%左右，待新根長(zhǎng)出后施肥1次。馴化7 d后逐漸撤去薄膜，30 d待新根長(zhǎng)出后進(jìn)行種苗正常管理并統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體愈傷組織形成的過(guò)程

麒麟尾莖段質(zhì)地堅(jiān)硬，形成愈傷組織的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。外植體接種30 d后開始觀察愈傷組織的形成過(guò)程，結(jié)果如圖2所示。接種30 d后，基部開始膨大，不同培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織，但只有部分莖段形成愈傷組織時(shí)，愈傷組織為白色，絮狀且松軟，圍繞基部生長(zhǎng)。60 d后，有的莖段基部開始形成叢生芽，如圖3所示。部分莖段形成愈傷組織的同時(shí)也出現(xiàn)新芽，剔除愈傷組織后，部分莖段能肉眼看出新的細(xì)微芽點(diǎn)，為下一階段形成叢生芽做準(zhǔn)備。所以，培養(yǎng)30 d后外植體在不同培養(yǎng)基環(huán)境下部分莖段能產(chǎn)生少量愈傷組織，但不同培養(yǎng)基有不同的誘導(dǎo)反應(yīng)。C3培養(yǎng)基愈傷誘導(dǎo)率達(dá)到48.3%，多于其他處理。C3是適合麒麟尾愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（見(jiàn)表1）。雖然本研究外植體在適宜的培養(yǎng)基中均能產(chǎn)生愈傷組織，但是數(shù)量相對(duì)較少，愈傷組織松軟、分散，不容易形成不定芽。為了獲得良好、足夠數(shù)量的芽，需將新芽點(diǎn)挑選出來(lái)進(jìn)行分切，然后誘導(dǎo)叢生芽。另外，愈傷組織隨著時(shí)間加長(zhǎng)逐步褐化失去活性。本試驗(yàn)采用了幼嫩和老的莖段，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，新芽和老芽對(duì)愈傷組織及不定芽形成沒(méi)有顯著影響。

圖2 外植體接種后30 d后的生長(zhǎng)狀態(tài)

圖3 外植體接種后60 d后的生長(zhǎng)狀態(tài)

表1 不同激素梯度配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效果

2.2 不同激素組合對(duì)不定芽誘導(dǎo)率的影響

研究表明，將剔除愈傷組織的芽點(diǎn)放置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d后，誘導(dǎo)的總芽數(shù)及不定芽是不同的。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類及質(zhì)量其濃度組合是調(diào)控外植體產(chǎn)生不定芽的主導(dǎo)因素。外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)30 d后，基部開始膨大，60 d后形成不定芽，結(jié)果如表2所示。在不同種類和質(zhì)量濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)下，都能產(chǎn)生一定數(shù)量的不定芽，但對(duì)不同種類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)不同。4種不同培養(yǎng)基培養(yǎng)后不定芽數(shù)量不一樣。這些在培養(yǎng)基上再生的不定芽繼續(xù)培養(yǎng)30 d后，再生了許多具有根和芽的小苗，B2培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)率高達(dá)275%，培養(yǎng)后的芽數(shù)最多（圖4），說(shuō)明此培養(yǎng)基適合麒麟尾不定芽的誘導(dǎo)。

表2 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑梯度配比對(duì)外植體不定芽誘導(dǎo)的效果

圖4 麒麟尾叢生芽誘導(dǎo)

2.3 小苗的生根培養(yǎng)

小芽點(diǎn)在增殖培養(yǎng)后，產(chǎn)生了大量的不定芽，將芽分切成單株，在附加有1 mg/L 6-BA和1 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個(gè)月30 d后，再生了帶有根和芽的小苗。當(dāng)團(tuán)塊上的芽長(zhǎng)度在15～20 mm，具有2片完整葉且葉片平展時(shí)，按單芽切割，將切下來(lái)的單芽接種到附帶活性炭的培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)15 d后開始長(zhǎng)根，42 d后長(zhǎng)根率達(dá)到98%，具有3片葉且長(zhǎng)勢(shì)健壯，小苗葉片呈綠色。

2.4 組培苗溫室馴化

麒麟尾組培生根苗轉(zhuǎn)移到溫室中經(jīng)過(guò)自然光練苗5 d后，根系較多，莖稈直徑大且呈直立狀（圖5）。麒麟尾組培生長(zhǎng)速度慢，前期生長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)較弱，生根后練苗很關(guān)鍵，能彌補(bǔ)前期不足。復(fù)壯后開袋種植，能顯著提高成活率，節(jié)省后期育苗時(shí)間。溫室管理著重水分調(diào)節(jié)，間干間濕能強(qiáng)化根系生長(zhǎng)，待其長(zhǎng)到一定程度后適當(dāng)加強(qiáng)光照，使穴苗生長(zhǎng)健壯、光亮，整個(gè)過(guò)程中注意通風(fēng)保濕，全程做好細(xì)節(jié)管理，病蟲害以防為主。經(jīng)3種基質(zhì)種植后，純泥炭基質(zhì)種出來(lái)的品質(zhì)比較好，見(jiàn)表3。

圖5 溫室馴化苗

表3 不同基質(zhì)組培苗移栽成活率

3 討論

3.1 愈傷組織不易形成不定芽

麒麟尾選擇外植體誘導(dǎo)時(shí)，取材部位對(duì)誘導(dǎo)影響較大，是后期組培成功的關(guān)鍵因素。因此，本試驗(yàn)選擇一年生生長(zhǎng)勢(shì)旺、無(wú)病害植株頂芽做外植體。通過(guò)本誘導(dǎo)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)添加不同質(zhì)量濃度的6-BA對(duì)愈傷誘導(dǎo)有明顯的差異，6-BA（4.0 mg/L）有利于愈傷組織的形成。高質(zhì)量濃度植物生長(zhǎng)能產(chǎn)生大量愈傷組織，但是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑偏高不利于后期培養(yǎng)，高植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑易產(chǎn)生玻璃化，后期容易退化、形成石頭苗等。本試驗(yàn)的愈傷組織在后期容易褐化，不能形成不定芽，和許渝花等研究的愈傷組織直接生成不定芽結(jié)論不一致［4-6］，可能是在不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑下有不同的效果。

3.2 1.5 mg/L6-BA有利于不定芽增殖

由于早期植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑高質(zhì)量濃度偏高，為了減少植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑累積影響，在訊禾公司規(guī)?；a(chǎn)中應(yīng)用1.5 mg/L6-BA的誘導(dǎo)繁殖系數(shù)為1.40～2.75，是比較理想的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基高質(zhì)量濃度適度即可保證一定的增殖率，又不至于使植株過(guò)早老化，是穩(wěn)定生產(chǎn)的基礎(chǔ)。不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及不同濃度對(duì)誘導(dǎo)有不同的效果［7-9］，可以試驗(yàn)使用其余植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)。

3.3 麒麟尾品種性狀比較特殊，苗期生長(zhǎng)慢，組培成本相對(duì)較高

早期母本的選擇和組培過(guò)程中及時(shí)轉(zhuǎn)切可降低生產(chǎn)成本，切割過(guò)程中剔除老化、質(zhì)量不好的芽和組織；轉(zhuǎn)切時(shí)適當(dāng)去頂有利于提高增殖系數(shù)，并及時(shí)挑出污染苗。當(dāng)根系數(shù)量為兩三條時(shí)轉(zhuǎn)移到煉苗溫室，經(jīng)過(guò)自然光照射15 d后苗挺立，稈子粗壯，根系發(fā)達(dá)，保證后期溫室馴化苗的品質(zhì)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)以麒麟尾一年生盆栽頂芽為材料，篩選其誘導(dǎo)、增殖的最佳培養(yǎng)基，優(yōu)化溫室馴化方法，以規(guī)模化生產(chǎn)種苗為研究對(duì)象。麒麟尾的愈傷組織誘導(dǎo)率最高的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.2 mg/L，MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L為不定芽增殖最佳培養(yǎng)基，增殖率275%，加之適度的光溫條件，可生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的組培苗，經(jīng)自然光照煉苗后的組培苗移栽成活率達(dá)到98%。溫室馴化以進(jìn)口品氏泥炭（0~10#）為最佳種植基質(zhì)，后期間干間濕、適度提高光照的生產(chǎn)養(yǎng)護(hù)管理能保證品質(zhì)。通過(guò)麒麟尾組織培養(yǎng)和溫室生產(chǎn)技術(shù)的研究，建立麒麟尾組培快繁體系，為麒麟尾工廠化生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)支撐。