探討全自動微生物分析儀與細菌微量生化管鑒定細菌的結(jié)果分析

鐵嶺市疾病預防控制中心 （遼寧 鐵嶺 112000）

內(nèi)容提要：目的：探析采用細菌微量生化管和全自動微生物分析儀對細菌進行鑒定，以提高結(jié)果的準確性。方法：選取本實驗室研究的三種桿菌共400株進行不同方法檢測，其中將利用全自動微生物分析儀的桿菌設(shè)為觀察組，而將利用細菌微量生化管的桿菌設(shè)為對照組，桿菌種類主要包括葡萄球菌96株、不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌88株、腸桿菌科菌株216株，觀察并比較鑒定結(jié)果。結(jié)果：觀察組的總體符合率為94.50%（378/400），其中葡萄糖球菌符合率為93.75%（90/96），腸桿菌科菌符合率為99.07%（214/216），不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌84.09%（74/88）；對照組的總體符合率為94.75%（379/400），其中葡萄糖球菌符合率為100.00%（96/96），腸桿菌科菌符合率為98.61%（213/216），不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌79.55%（70/88）。結(jié)論：兩種檢測方式的特點為操作方便、準確度高、快速等，但在不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌鑒定中符合率都較低，所以要結(jié)合氣味、菌落特點等綜合考慮，從而得到更準確的檢測結(jié)果。

近幾年，電子計算機技術(shù)快速發(fā)展，且在自然科學中的各個領(lǐng)域逐漸應(yīng)用，檢測鑒定微生物技術(shù)也是從手工檢測逐漸向電腦化和儀器化過渡，臨床鑒定細菌的工作中自制的生化管也逐步被細菌微量生化管和自動化所替代[1]。所以，本文選取400株桿菌（葡萄球菌、不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌、腸桿菌科菌株三種）比較采用細菌微量生化管和全自動微生物分析儀鑒定細菌的結(jié)果，具體如下。

1.資料與方法

1.1 一般材料

利用VITEK-MAS系統(tǒng)和專用鑒定卡。（1）培養(yǎng)基和試劑：氧化酶試劑、觸酶試劑、微量生化管、血瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、TCBS瓊脂、EMB瓊脂、SS瓊脂、葡萄糖肉湯、腸道增菌肉湯、堿性蛋白胨水、SC增菌液、GN增菌液、營養(yǎng)肉湯等。（2）菌株來源：收集細菌科分離出的非重復的腸桿菌科細菌216株（其中耶爾森氏菌、克雷伯氏菌、沙雷氏菌、腸桿菌、變形桿菌、枸櫞酸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌分別為3株、25株、6株、40株、20株、10株、3株、3株、106株），87株不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌中芳香桿菌、產(chǎn)堿桿菌、不動桿菌、銅綠假單胞菌分別為5株、3株、23株、57株。96株葡萄球菌中包括奈瑟氏球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、黃金葡萄球菌分別為4株、8株、16株、68株。

1.2 方法

接種標本24h后取可疑菌落進行純培養(yǎng)，培養(yǎng)基為麥康凱瓊脂平板和血瓊脂平板。

觀察組：取平板上的純菌落，在生化卡上填充一定濃度的活菌懸液，利用檢測箱鑒定。

對照組：根據(jù)觸酶、氧化酶、OF試驗、革蘭染色等試驗結(jié)果。將不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌、腸桿菌科、奈瑟氏菌屬、葡萄球菌屬分別轉(zhuǎn)種于各自鑒定管內(nèi)鑒定。

當兩組檢查結(jié)果不一致時，根據(jù)伯杰細菌鑒定手冊第八版鑒定，以此為標準。

2.結(jié)果

由表1可知：觀察組、對照組總體符合率為94.50%（378/400）、94.75%（379/400）。觀察組鑒定96株葡萄球菌，1例不符合的是腐生葡萄球菌，其他菌株都符合，對照組鑒定符合率為100.00%。216例腸桿菌科，觀察組鑒定2例不符合為枸櫞酸桿菌，對照組3例不符合為克雷伯氏菌，其他菌株都符合。88例不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌觀察組鑒定符合率為84.09%（74/88），其中鑒定銅綠假單胞菌、不動桿菌、產(chǎn)堿桿菌、芳香桿菌符合率分別為為92.98%（53/57）、82.61%（19/23）、100.00%（3/3）、80.00%（4/5）。對照組符合率為，79.55%（70/88），細菌符合率分別為84.21%（48/57）、69.57%（16/23）、100.00%（3/3）、80.00%（4/5）。

表1.全自動微生物分析儀與細菌微量生化管鑒定細菌的結(jié)果及符合率(n,%)

3.討論

臨床細菌實驗室中，鑒定細菌是重要任務(wù)的一種[2]?，F(xiàn)階段，鑒定細菌的方法常常是傳統(tǒng)手工，自動化和編碼方法[3]。全自動微生物分析系統(tǒng)結(jié)合了計算機技術(shù)、微生物檢測技術(shù)、傳統(tǒng)生化反應(yīng)，利用概率最大近似值模型法實施自動微生物檢測的一種技術(shù)[4]。具體操作為：在固體培養(yǎng)基上放置待檢菌種，從而獲得單一菌落，變成菌懸液，并在已選好的各種細菌檢測卡上利用充液器將其充入，封口后置于恒溫35°C的箱中培養(yǎng)，利用讀出器根據(jù)光學掃描機制，對指示劑的濁度和顯色情況進行測定，在電腦內(nèi)輸入信息后進行分析，再同預定的閾值對比，通過數(shù)據(jù)端自動顯示并打印。盡管此方式存在重復性高、快速、操作簡單等優(yōu)勢，但是也存在“不能鑒定細菌”和鑒定錯誤的情況，原因較多，主要還包括：菌齡太老、菌液濃度不符合規(guī)定、反應(yīng)卡小孔有氣泡、細菌不純等。細菌微量生化管盡管結(jié)果可靠、操作簡單，但是此方式同樣存在對鑒定結(jié)果造成影響的因素，如顏色變化不明顯、交叉感染而出現(xiàn)假性結(jié)果等?？梢姡阼b定細菌繁重的工作期間，如何使勞動強度降低、工作效率提升，是檢驗者需要長時間探究的難題。本次實驗結(jié)果顯示，觀察組與對照組的符合率差異不大（94.50%/94.75%），其中葡萄糖球菌符合率（93.75%/100.00%）和腸桿菌科菌符合率（99.07%/98.61%）較為接近，但是不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌的符合率出現(xiàn)一定落差（84.09%/79.55%），說明兩種檢驗方式是此問題解決的一種有效途徑，都存在操作方便、準確性高、快速等，但是鑒定不發(fā)酵和需氧革蘭氏陰性桿菌的符合率都不是很高，所以在對此類細菌鑒定中需要綜合考慮涂片顏色、菌落顏色、氣味、特點等，從而提升鑒定此細菌的符合率。