化痰解郁湯對(duì)CUMS 抑郁癥模型大鼠HPA 軸的影響

李 慶，張 慧，馮衛(wèi)星，楊東東

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，成都 610072）

抑郁癥又稱(chēng)之為抑郁障礙（depressive disease，DD），是臨床中常見(jiàn)的心理疾病，為多因素致病，主要表現(xiàn)為持久而顯著的心境低落[1]。大部分患者表現(xiàn)為低落的情緒與其處環(huán)境不相符，終日悶悶不樂(lè)，心情低落消極，中重度患者可有悲痛欲絕，自卑自閉，部分患者有自殺的想法和行動(dòng)；部分患者同時(shí)合并有焦慮和沖動(dòng)等異常行為；嚴(yán)重的抑郁障礙患者會(huì)出現(xiàn)視聽(tīng)幻覺(jué)以及被害妄想等精神癥狀。因其高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高疾病負(fù)擔(dān)及高自殺率而備受關(guān)注[2]。我國(guó)每年因抑郁障礙產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)擔(dān)負(fù)高達(dá)數(shù)百億元人民幣。目前，我國(guó)因精神障礙類(lèi)疾病和自殺導(dǎo)致的疾病負(fù)擔(dān)已經(jīng)占到疾病總負(fù)擔(dān)的第一位[3]。

近年來(lái)，中醫(yī)藥治療抑郁癥的療效與機(jī)制研究取得了可喜的成就[4]?；到庥魷菞顤|東教授治療痰熱郁結(jié)型郁證的經(jīng)驗(yàn)方[5-6]，具有清熱化痰，行氣解郁的作用。本實(shí)驗(yàn)采用目前學(xué)術(shù)界公認(rèn)的CUMS 抑郁癥模型大鼠，從ACTH and CORT 進(jìn)一步探究化痰解郁湯治療抑郁癥的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 從成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限公司購(gòu)買(mǎi)成年健康SD 大鼠40 只，體質(zhì)量（190±20）g。許可證號(hào)：SCXK（川）2013.24，合格證書(shū)號(hào)：0015979?；到庥魷?藥物購(gòu)買(mǎi)于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房)由黃連3 g，夜交藤、酸棗仁各20 g，陳皮、茯苓、積實(shí)、竹茹、白芍、石菖蒲、柏子仁各15 g，生甘草5 g 組成。熬制濃縮為中藥藥液，放置在4 ℃冰箱中儲(chǔ)存。鹽酸氟西汀膠囊（百優(yōu)解）由PatheOn France 生產(chǎn)，批號(hào)：J20130010。大鼠CORT、ACTH 酶聯(lián)免疫分析ELISA 試劑盒，上海廣銳生物科技有限公司，批號(hào)分別為20151023、2015021。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組及造模 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，5%苦味酸溶液標(biāo)記，采用SPSS 19.0 將40 只大鼠隨機(jī)分為:A對(duì)照組、B模型組、C鹽酸氟西汀組、D化痰解郁湯組。根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)[7]報(bào)道的CUMS 方法造模。對(duì)照組正常飼養(yǎng)，其他各組均接受長(zhǎng)達(dá)21 d 的慢性不可預(yù)見(jiàn)溫和刺激。第1 周：前3 d 每天游泳20 min，后3 d 每天游泳40 min；第2 周：接受包括足底部電擊（40 V 電壓，每次10 s，每間隔50 s 刺激1 次，電擊30 次）、熱應(yīng)激（45 ℃，15 min）、夾尾（距大鼠尾根1 cm 處，止血鉗持續(xù)1 min）、冰水游泳（4 ℃，5 min）等環(huán)境刺激；第3 周：通過(guò)禁飲、禁食、擁擠、燈光的明暗交替（黑暗1 h，照明1 h，進(jìn)行12 h）、晝夜顛倒等刺激組成的慢性中等不可預(yù)見(jiàn)的溫和刺激，直至造模結(jié)束。

1.2.2 藥物干預(yù) 對(duì)照組可自由進(jìn)食、攝水，避免刺激；模型組予以氯化鈉注射液（0.9%）3 mL/d；化痰解郁湯組及氟西汀組予以16 g/（kg·d）；各組分別給予生理鹽水或相應(yīng)藥物16 g/（kg·d），連續(xù)灌胃21 d。根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[8]中的公式計(jì)算大鼠給藥劑量，人與大鼠的有效劑量換算系數(shù)為6.3，人的標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量按60 kg 計(jì)算。化痰解郁湯（生藥）：成人每日用藥劑量：153 g÷60 kg=2.55 g/kg，大鼠每日用藥劑量＝2.55 g/kg×6.3 ≈16 g/kg。

1.2.3 體質(zhì)量稱(chēng)量 藥物干預(yù)期實(shí)驗(yàn)第4 周、第5 周、第6 周用電子稱(chēng)稱(chēng)取大鼠的體質(zhì)量。

1.2.4 行為學(xué)觀察 曠箱試驗(yàn)（Open-f ieldTest）：實(shí)驗(yàn)大鼠分別放入體積為800 mm×800 mm×400 mm 的曠箱內(nèi)，且曠箱四周均為黑色不能透光，曠箱底面用白色線條區(qū)分為25 個(gè)160 mm×160 mm 的正方形。將各組每只實(shí)驗(yàn)大鼠分別置于曠箱正中央格子后開(kāi)始測(cè)定，以大鼠3 min 總共穿越箱底部方塊的數(shù)量作為水平運(yùn)動(dòng)得分，活動(dòng)時(shí)出現(xiàn)的前腳抬離箱底站立的次數(shù)作為垂直活動(dòng)得分，每只大鼠測(cè)評(píng)完畢后將大鼠排泄物清理干凈并除味后，方可再進(jìn)行下一只的測(cè)評(píng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程錄像。蔗糖溶液（1 %）消耗量：實(shí)驗(yàn)前各組大鼠均禁食禁飲24 h，給予蔗糖溶液（1 %）自由攝取1 h 后撤去，大鼠1 h 飲用1 %蔗糖溶液的量為計(jì)算前后水瓶的重量的差值得到。最后計(jì)算大鼠飲入1 %蔗糖溶液的量為：消耗1 %蔗糖溶液的量（mg）/動(dòng)物體質(zhì)量（g）。

1.2.5 血清 ACTH 及 CORT 含量測(cè)定 在實(shí)驗(yàn)第42天，大鼠股動(dòng)脈留取血液5 mL，置于含有10 %EDTA.NA230 μL和抑肽酶40 μL的試管中，設(shè)置離心機(jī)為4 ℃，轉(zhuǎn)速設(shè)定為3 000 r/min，共離心10 min，分離出血漿，儲(chǔ)存在-20 ℃冰箱中，使用Elisa 試劑盒，根據(jù)說(shuō)明書(shū)按步驟操作以測(cè)定標(biāo)本中ACTH 和CORT 的含量。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體質(zhì)量變化 見(jiàn)表1。

2.2 大鼠行為學(xué)變化 曠場(chǎng)試驗(yàn)（Open-f ieldTest ）見(jiàn)表2、表3。

表1 各組大鼠干預(yù)階段體質(zhì)量的比較（） g

表1 各組大鼠干預(yù)階段體質(zhì)量的比較（） g

注：與對(duì)照組的比較，# P ＜0.05；與模型組的比較，△P ＜0.05

表2 各組大鼠干預(yù)階段水平活動(dòng)比較（） 次/3 min

表2 各組大鼠干預(yù)階段水平活動(dòng)比較（） 次/3 min

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

表3 各組大鼠干預(yù)階段垂直活動(dòng)比較（） 次/3 min

表3 各組大鼠干預(yù)階段垂直活動(dòng)比較（） 次/3 min

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

2.3 蔗糖水消耗量 見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠干預(yù)階段糖水消耗量比較（） mg/g

表4 各組大鼠干預(yù)階段糖水消耗量比較（） mg/g

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

2.4 各組大鼠血清ACTH、CORT 含量變化 見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠血清ACTH、CORT 的比較（） ng/L

表5 各組大鼠血清ACTH、CORT 的比較（） ng/L

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

3 討論

抑郁癥模型大鼠大約20 余種，根據(jù)不同的建模方法，可將其分為應(yīng)激化模型、孤養(yǎng)和隔離動(dòng)物模型、基因敲除改造動(dòng)物模型、神經(jīng)生化功能轉(zhuǎn)化模型等[9]。在這些不同方法中與臨床抑郁癥患者病因相比較相似的是應(yīng)激抑郁模型。20 世紀(jì)90 年代Willner[10]在Katz[11-12]提出的慢性不可預(yù)見(jiàn)性的應(yīng)激模型（CUS）基礎(chǔ)上發(fā)展了CUMS 抑郁癥模型，其對(duì)造模方案的優(yōu)化主要體現(xiàn)在明顯降低了應(yīng)激因子的強(qiáng)度，減少了造模過(guò)程大鼠的死亡率。其在模型的評(píng)價(jià)上以大鼠快感缺乏與否作為標(biāo)準(zhǔn)。CUMS 抑郁癥模型建造需要花費(fèi)較多的時(shí)間，工作繁瑣，給研究者帶來(lái)較大的壓力[13]。但因?yàn)樵撘钟舭Y模型能更好的模擬人類(lèi)在抑郁中的快感缺失等核心癥狀，同時(shí)能夠很好的模擬重型抑郁障礙患者的社會(huì)交際能力下降、探索行為能力減少、性功能障礙等臨床表現(xiàn)。通過(guò)代謝組學(xué)、大鼠海馬形態(tài)學(xué)及神經(jīng)元糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)也已證實(shí)[14-16]CUMS抑郁模型較其他抑郁大鼠模型具有更好的成效，造模成功后大鼠所表現(xiàn)出的抑郁癥狀可持續(xù)數(shù)月之久，符合抑郁模型的要求，可以作為研究抑郁障礙的理想動(dòng)物模型，同樣此模型被國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)廣泛采用[17]。

中醫(yī)典籍中沒(méi)有抑郁癥病名的明確記載，根據(jù)抑郁癥臨床癥狀判斷，與中醫(yī)情志疾病“郁證 ”相似?？偨Y(jié)歸納本病病因?yàn)榕K腑功能失調(diào)[18]，與先天稟賦，飲食不節(jié)，生活創(chuàng)傷等相關(guān)，主要病機(jī)可歸納為氣機(jī)郁滯，情志不暢。脾胃歸屬于中焦，升清依賴(lài)于脾，降濁則主要為胃所主，二者共主氣機(jī)之升降。氣機(jī)失司，可進(jìn)一步導(dǎo)致了肝之疏泄功能障礙，脾不能運(yùn)化水谷，化生精血，心失所養(yǎng)，臟腑功能失去平衡。病位在肝，但與脾、胃、心、腎等臟器密切關(guān)聯(lián)，五臟皆參與情緒的調(diào)節(jié)[19]。郁證初起病理屬性多為實(shí)，病久則可見(jiàn)虛或虛實(shí)兼夾。郁證初始，主要為氣機(jī)郁滯，但常兼瘀邪，易化火夾雜痰及食滯等，即屬實(shí)證。病久則可由實(shí)轉(zhuǎn)虛，治療上實(shí)證當(dāng)以疏肝解郁，健脾清熱，化痰解郁，行氣安神為法。化痰解郁湯可清熱化痰，行氣安神。

抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中，神經(jīng)遞質(zhì)釋放異常、氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥[20-21]及腦神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)與功能障礙均參與其中[22]。近年來(lái)關(guān)于腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子（BDNF）能同時(shí)調(diào)控多條與抑郁癥發(fā)生相關(guān)的信號(hào)通路[23]也得到了高度重視。同時(shí)抑郁癥與認(rèn)知功能障礙相關(guān)，有學(xué)者就其內(nèi)在機(jī)制做了探究[24]。有研究證實(shí)[25]在抑郁癥患者的血漿中皮質(zhì)醇水平較正常人群增高明顯，反應(yīng)出抑郁癥患者的HPA 軸功能亢奮。本研究中通過(guò)對(duì)大鼠 HPA 軸激素水平變化的探究，發(fā)現(xiàn)模型組較對(duì)照組血清中ACTH、CORT 含量顯著增高，證實(shí)了抑郁癥模型大鼠存在HPA 軸功能亢進(jìn)。在與模型組比較中，化痰解郁湯組大鼠血清中 ACTH、CORT含量顯著降低。這也可以說(shuō)明，化痰解郁湯可能通過(guò)矯正功能亢進(jìn)的HPA 軸發(fā)揮其抗抑郁療效。對(duì)于郁證應(yīng)做到未病先防，已發(fā)早治，防止傳變，采取情志疏導(dǎo)、針?biāo)幗Y(jié)合等方法綜合治療，預(yù)防病情反復(fù)發(fā)作，遷延不愈[26-27]。中醫(yī)藥對(duì)于疾病的治療具有多途徑、多部位、多靶點(diǎn)的作用。化痰解郁湯能治療抑郁癥除能糾正HPA 軸亢進(jìn)外，是否還存在其他干預(yù)機(jī)制，尚需進(jìn)一步研究。