原發(fā)星形細胞瘤中TP53、PDGF、EGFR的表達及與臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性

孫曉玲，張曉娟，張清泉，邱雷，王林娜，侯素平

0 引言

原發(fā)星形細胞瘤（primary astrocytoma,PA）由星形膠質(zhì)細胞所形成，是一種發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，呈浸潤性生長的惡性腫瘤，其病因尚不明確，多緩慢進行性發(fā)展，病程可長達數(shù)年，常以癲癇為首發(fā)癥狀，大多數(shù)患者預(yù)后欠佳[1]。因此，早期診斷和預(yù)后判斷的相關(guān)性研究對于疾病的轉(zhuǎn)歸具有重要作用。研究顯示TP53基因、血小板源性生長因子（PDGF）、表皮生長因子受體（EGFR）是臨床比較常用的癌癥檢測指標，對原發(fā)星形細胞瘤的起始和進展均有一定程度的影響[2-3]。但是對原發(fā)性星形細胞瘤的影響程度國內(nèi)外研究尚不一致，且均未闡述TP53、PDGF及EGFR與原發(fā)性星形細胞瘤病理特征及預(yù)后的相關(guān)性[4-7]。為進一步完善患者預(yù)后判斷指標，制定輔助治療方案，本研究對90例原發(fā)星形細胞瘤患者臨床病理資料進行回顧性分析，探討TP53、PDGF、EGFR的表達與臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)排除標準，選取2000年1月—2015年1月衡水市人民醫(yī)院收治的90例經(jīng)病理確診為原發(fā)性星形細胞瘤患者進行回顧性分析，記錄患者入院時相關(guān)信息。其中男53例，女37例；≥60歲24例，<60歲66例；依據(jù)2016年WHO指南中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類第4版修訂方案分為：Ⅰ期28例，Ⅱ期47例，Ⅲ期12例，Ⅳ期3例。KPS評分≥70分31例，<70分59例。采用門診和電話的方式隨訪五年，統(tǒng)計患者生存時間及生存率。選取20例正常腦組織樣本作為對照組。排除標準：（1）患腦血管疾病（如腦缺血，腦出血、腦梗死等）者；（2）其他腦腫瘤（腦膜瘤）及癲癇等患者；（3）肝、肺、腎功能不全者；（4）未按時隨訪者；（5）交流障礙者；（6）患者細胞瘤組織未保存于本院病理科者；（7）經(jīng)化學和放射治療等患者。WHO分級標準:Ⅰ級：以毛細胞型星形細胞瘤為主；Ⅱ級：星形細胞瘤或星形-少突細胞瘤；Ⅲ級：間型星形細胞瘤；Ⅳ級：膠質(zhì)母細胞瘤。

1.2 病理形態(tài)學觀察及分級

1.2.1 制備組織切片 90例星形細胞瘤患者手術(shù)切除后的腫瘤組織，用4%中性甲醛固定4～6 h后，取1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm大小的組織塊，5～10倍固定液中固定3～24 h，脫水、過夜（水洗、脫水、透明、浸蠟），石蠟包埋，3～5 μm切片，展平、烘烤。

1.2.2 免疫組織化學檢測 免疫組織化學SP染色，每例均選取腫瘤病例典型的蠟塊，選取4 μm厚切片4張。切片經(jīng)過脫蠟、水化、抗原修復后，滴加4種不同的第一抗體（GFAP、TP53、PDGF、EGFR）。按試劑盒說明書操作，溫浴30～60 min后加二抗，DAB顯色，蘇木精對比染色，常規(guī)脫水、透明、封片。以已知含有和不含有待測抗原的組織作對照。

1.2.3 結(jié)果判讀 選擇腫瘤組織內(nèi)陽性染色密集區(qū)，400倍鏡下計數(shù)500個細胞，計算陽性百分率。未發(fā)現(xiàn)陽性細胞為-；≤10%為+；10%～50%為++；＞50%的細胞陽性為+++。陽性標準：+或++或+++。以已知陽性表達的蛋白和陰性表達的蛋白作為陽性對照和陰性對照。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料用百分比表示，將所有病理材料分為原發(fā)星形細胞瘤組和正常腦組織組，采用χ2檢驗比較兩組間 TP53、PDGF、EGFR陽性表達率差異性。兩組間生存期比較采用Log rank檢驗，采用Cox回歸分析分析預(yù)后的影響因素，檢驗水準為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 TP53、PDGF、EGFR在原發(fā)星形細胞瘤中的表達

TP53表達在細胞核，PDGF、EGFR表達在細胞質(zhì)和細胞膜，TP53、PDGF、EGFR星形細胞瘤組織中陽性表達率分別為58.89%、51.11%和48.89%，陽性表達率顯著高于正常腦組織，差異有統(tǒng)計學意義（均P<0.05），見圖1、表1。

2.2 TP53、PDGF、EGFR表達與原發(fā)星形細胞瘤臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤大小≥3 cm患者TP53陽性表達率高于腫瘤大小<3 cm患者，WHO分期Ⅲ～Ⅳ患者TP53、PDGF、EGFR陽性表達率高于分期Ⅰ～Ⅱ患者，差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05），見表2。

2.3 TP53、PDGF、EGFR表達與原發(fā)星形細胞瘤預(yù)后的關(guān)系

2020年1月為末次隨訪時間，所有患者均獲得5年的隨訪，隨訪率100%。隨訪時間為60～89月，中位隨訪時間65月。分別繪制TP53、PDGF、EGFR陽性和陰性患者生存曲線并比較，TP53、PDGF、EGFR陽性表達患者的生存期均短于陰性表達患者（均P<0.05）。進一步進行Cox回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WHO分期、TP53、PDGF、EGFR均是原發(fā)星形細胞瘤預(yù)后的影響因素，見圖2、表3。

表1 原發(fā)星形細胞瘤和正常腦組織中TP53、PDGF、EGFR陽性表達率比較 (n(%))Table 1 Comparison of positive expression rates of TP53,PDGF and EGFR between primary astrocytoma and normal brain tissues (n(%))

3 討論

原發(fā)星形細胞瘤是一種惡性程度較高的神經(jīng)上皮腫瘤，預(yù)后差，并發(fā)癥嚴重，手術(shù)切除不完全者五年生存率僅為12%[8]。而據(jù)相關(guān)國內(nèi)外文獻報道：原發(fā)星形細胞瘤發(fā)生率占顱內(nèi)腫瘤的13%～14%，其具有高度侵襲性，常常因為與周圍正常腦組織邊界不清，使手術(shù)無法完整切除[9-10]。常規(guī)治療為藥物治療、手術(shù)、放射治療等。相關(guān)學者雖然在化學療法、放射療法方面獲得了一定的進展，但是患者的五年生存率仍然較低[11]。TP53功能失活、PDGF受體和配體過表達、EGFR擴增等對于原發(fā)星形細胞瘤起始、進展階段均有一定程度的影響。

3.1 TP53、PDGF、EGFR在原發(fā)星形細胞瘤中的表達

圖1 TP53、PDGF、EGFR在原發(fā)星形細胞瘤和正常腦組織中的表達 (IHC ×200)Figure 1 Expression of TP53,PDGF and EGFR in primary astrocytoma and normal brain tissue (IHC ×200)

表2 TP53、PDGF、EGFR表達與原發(fā)星形細胞瘤臨床病理特征的關(guān)系 (n(%))Table 2 Relation between expression of TP53,PDGF,EGFR and clinicopathological features of primary astrocytoma patients (n(%))

圖2 TP53、PDGF、EGFR陽性和陰性患者5年生存曲線Figure 2 Five-year survival curves of patients with positive or negative expression of TP53,PDGF and EGFR

表3 原發(fā)星形細胞瘤預(yù)后影響因素的Cox回歸分析Table 3 Cox regression analysis of prognostic factors of primary astrocytoma patients

研究表示，TP53激活了一個具有高度分布的腫瘤抑制功能的基因強大的轉(zhuǎn)錄程序，在不同的細胞環(huán)境中發(fā)揮作用，是一個重要的抑癌基因，該基因失活可導致細胞周期失調(diào)，促進原發(fā)星形細胞瘤、胃癌、乳腺癌等發(fā)生[12-13]。TP53突變可見于大部分星形細胞瘤[12]。PDGF及其受體在包括神經(jīng)元祖細胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞在內(nèi)的多種細胞類型中均有表達。PDGF介導的信號轉(zhuǎn)導在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中調(diào)節(jié)多種功能，如神經(jīng)發(fā)生、細胞存活等，且在血管生成中起關(guān)鍵作用，在原發(fā)星形細胞瘤中大多過表達[14]。EGFR基因在很多惡性腫瘤中呈明顯的擴增、突變和過表達。EGFR擴增在星形細胞瘤中也是比較常見的，近期研究表明這是原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤的標志[15]。本研究結(jié)果顯示：TP53表達在細胞核，PDGF、EGFR表達在細胞質(zhì)和細胞膜。原發(fā)性星形細胞瘤組織中TP53、PDGF和EGFR陽性表達率均顯著高于正常腦組織。三者的變化可能與原發(fā)性星形細胞瘤的發(fā)生、增殖和侵襲等相關(guān)。

3.2 TP53、PDGF、EGFR表達與原發(fā)星形細胞瘤臨床病理特征的關(guān)系

通過觀察患者樣本臨床病理特征和TP53、PDGF、EGFR的陽性表達，結(jié)果顯示：腫瘤大小≥3 cm患者TP53陽性表達率高于腫瘤大小<3cm患者。WHO分期Ⅲ～Ⅳ患者TP53、PDGF、EGFR陽性表達率高于分期Ⅰ～Ⅱ患者。根據(jù)研究報告,40%～60%的原發(fā)性星形細胞瘤存在TP53基因突變[16]。TP53突變主要通過影響細胞周期促進癌細胞增殖和侵襲。因此，TP53突變在腫瘤大小和分級中存在差異性。PDGF通過PI-3K和PLC-γ通路誘導膠質(zhì)瘤細胞的侵襲和擴散，生長因子及其受體的高表達可能刺激血管生成[17]，對腫瘤擴增、侵襲等有較大影響，因此PDGF陽性表達率在不同腫瘤分期間具有差異性。EGFR主要作用于胞外信號調(diào)節(jié)激酶以及三磷酸肌醇激酶途徑,是細胞增殖和存活的促進劑，與患者腫瘤分期息息相關(guān)，因而EGFR陽性表達率在不同腫瘤分期間具有差異性[18]。

3.3 TP53、PDGF、EGFR表達與原發(fā)星形細胞瘤預(yù)后的關(guān)系

隨訪5年后發(fā)現(xiàn)，入院時TP53、PDGF、EGFR陽性表達患者的生存期均短于陰性表達患者。進一步進行Cox回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WHO分期、TP53、PDGF、EGFR均是原發(fā)星形細胞瘤預(yù)后的影響因素。據(jù)相關(guān)文獻報道：TP53陽性表達通常為原發(fā)性星形細胞瘤預(yù)后不良的標志，但是對于復發(fā)性星形細胞瘤預(yù)后較好，目前機制不明[19]。PDGF、EGFR陽性表達對原發(fā)星形細胞瘤進展期有較大的影響，因此，通常PDGF、EGFR高表達與預(yù)后有一定的影響。而 WHO分期是對腫瘤惡性程度的綜合判斷，分期越高，惡性程度越高，預(yù)后越差。

綜上所述，TP53、PDGF、EGFR在原發(fā)星形細胞瘤中高表達，且與腫瘤進展密切相關(guān)。且TP53、PDGF、EGFR陽性表達、WHO分期均是影響患者預(yù)后的因素。臨床上可以通過TP53、PDGF、EGFR檢測和WHO分期判斷患者預(yù)后，計劃適宜的治療方案。然而，關(guān)于TP53、PDGF、EGFR是否存在關(guān)聯(lián)還有待進一步研究。