免疫熒光染色在侵襲性肺曲霉病(IPA)診斷中的價值研究*

王騰勇（新余市人民醫(yī)院檢驗科，江西 新余338000）

侵襲性肺曲霉病(IPA)是一種肺侵襲性真菌感染，發(fā)病率及病死率均居高不下且呈逐年增長的趨勢，早期診斷和有效的抗真菌治療對降低與IPA相關(guān)的病死率至關(guān)重要［1，2］?，F(xiàn)有檢查曲霉菌的方法有直接涂片鏡檢法、革蘭染色涂片鏡檢法、培養(yǎng)法、特異性標(biāo)志物檢查等，以上檢測方法存在陽性率低、檢測周期長、特異性低等缺點［3］。而免疫熒光染色技術(shù)及10%氫氧化鉀（KOH）濕片法是當(dāng)前真菌檢查中較為高效的診斷技術(shù)，均越來越廣泛用于IPA患者痰或肺泡灌洗液中的曲霉菌的臨床診斷中，但針對二者診斷價值的比較尚無明確定論。本研究對免疫熒光染色及10%KOH濕片法在IPA中的診斷價值進行探討。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇我院2018年1月～2019年10月臨床診斷疑似為IPA患者60例，按隨機數(shù)字表法分為A、B組各30例。A組中男15例，女15例；年齡30～78(69.71±2.12）歲；體質(zhì)量65～80（75.00±1.50）kg。B組中男14例，女16例；年齡31～79(70.16±2.19)歲；體質(zhì)量66～82（76.00±1.55）kg。兩組一般資料相比，無顯著差異(P＞0.05)，具有可比性。本研究均經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床出現(xiàn)咳嗽、胸痛、呼吸困難等癥狀，可聞及胸膜摩擦音，肺部出現(xiàn)其他原因不能解釋的浸潤；有糖皮質(zhì)激素使用史；患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神疾病及意識障礙無法配合研究者；嚴(yán)重傳染性疾病者；肝、腎、腦等器官嚴(yán)重病變者。

1.3 方法所有患者均按要求采集痰液作為標(biāo)本。A組采用免疫熒光染色診斷，在標(biāo)本上滴加熒光染色液，然后加蓋蓋玻片，然后使用熒光顯微鏡或顯微成像系統(tǒng)（CCD）進行觀察，根據(jù)看到熒光標(biāo)記的真菌菌絲或孢子結(jié)構(gòu)得出結(jié)果。B組采用10%KOH濕片法診斷，取樣，然后滴加KOH溶液，經(jīng)酒精燈加熱溶解，使用光學(xué)顯微鏡觀察，找到真菌菌絲或孢子結(jié)構(gòu)得出結(jié)果。

1.4 臨床觀察指標(biāo)統(tǒng)計采取免疫熒光染色技術(shù)診斷及常規(guī)10%KOH濕片法診斷結(jié)果，以組織病理和真菌培養(yǎng)結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析兩種診斷方法在IPA中的診斷價值。以a表示陽性，以d表示陰性，以c表示假陽性，以b表示假陰性。準(zhǔn)確性=（a+d）/（a+b+c+d）×100%；敏感性=a/（a+c）×100%；特異性=d/（b+d）×100%；陽性預(yù)測值=a/（a+b）×100%；陰性預(yù)測值=d/（c+d）×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，計數(shù)資料以例（百分率）表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織病理和真菌培養(yǎng)結(jié)果分析經(jīng)組織病理和真菌培養(yǎng)明確A組30例疑似患者中IPA10例，B組30例疑似患者中IPA9例。

2.2 免疫熒光染色診斷與10%KOH濕片法診斷結(jié)果比較免疫熒光染色診斷IPA的準(zhǔn)確性為96.67%(29/30)、靈敏度為90.00%(9/10)、特異度為100.00%(20/20)、陽性預(yù)測值為100.00%(9/9)、均較10%KOH濕片法[66.67%(20/30)、44.44%(4/9)、76.19%(16/21)、44.44%(4/9)]高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；免疫熒光染色檢測的陰性預(yù)測值(95.24%，20/21)較10%KOH濕片法(76.19%，16/21)]高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1～3。

表1 免疫熒光染色診斷結(jié)果與組織病理和真菌培養(yǎng)結(jié)果比較（n）

表2 10%KOH濕片法診斷結(jié)果與組織病理和真菌培養(yǎng)結(jié)果比較（n）

表3 免疫熒光染色診斷與10%KOH濕片法診斷結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

IPA表現(xiàn)為低氧血癥等一系列呼吸功能障礙和暈輪征即磨玻璃樣影環(huán)繞病灶周圍等影像學(xué)浸潤，病情兇險。因此，采取針對性抗真菌治療對改善患者預(yù)后有十分重要的作用。本研究結(jié)果顯示，免疫熒光染色診斷IPA的準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值均較10%KOH濕片法診斷結(jié)果高，而陰性預(yù)測值比較未見明顯差異，表明免疫熒光染色用于IPA診斷中能獲取較高的診斷準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值，診斷價值較高。常規(guī)10%KOH濕片法進行診斷在取樣、滴加10%KOH溶液后需要經(jīng)酒精燈加熱溶解，然后才能使用光學(xué)顯微鏡進行觀察。而免疫熒光染色在取樣、滴加熒光染色液后直接加蓋蓋玻片進行熒光顯微鏡觀察，操作步驟更為簡便，操作用時短，適用于臨床大樣本的快速檢測［4，5］。另外，免疫熒光染色的熒光染料的主要成分是熒光增白劑（CFW），能與真菌細胞壁上的幾丁質(zhì)和纖維素親和，在350～400nm波長下發(fā)出亮藍色熒光，在熒光顯微鏡視野中能清晰觀察曲霉菌形態(tài)［6］。并利用染色液與真菌細胞壁中幾丁質(zhì)等多糖成分反應(yīng)的檢測原理，可排除檢測中其他因素的干擾，減少假陰性的發(fā)生，繼而降低漏診及誤診率，提升診斷的準(zhǔn)確性［7，8］。但需要注意的是，免疫熒光染色法的陽性結(jié)果可確定或提示真菌感染，但陰性結(jié)果也不能排除診斷，要在無菌體液的直接鏡檢中發(fā)現(xiàn)真菌成分可明確診斷，或有菌部位發(fā)現(xiàn)真菌菌絲，并結(jié)合臨床特點方可做出診斷。在使用免疫熒光染色診斷明確患者為IPA后，患者可以得到及時診斷，實施精準(zhǔn)有效的治療，大大提升治療效果，改善患者預(yù)后，能很大程度地降低家庭經(jīng)濟負擔(dān)。而免疫熒光染色技術(shù)的實用性強，具有良好的社會效益和經(jīng)濟效益，值得臨床推廣應(yīng)用。

綜上所述，免疫熒光染色診斷IPA具有檢測周期短、結(jié)果直觀的優(yōu)勢，且能獲得較高的準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，對IPA的診斷起到很好的輔助作用。