瑤藥殺松涯重金屬及有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析

覃冬杰，陳榮珍，陸崢琳，盧 藝，黃瑞松*

（1.柳州市質(zhì)量檢驗(yàn)檢測研究中心，廣西 柳州 545006；2.廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院 壯瑤藥研發(fā)中心，廣西 南寧 530001）

瑤藥殺松涯是鱗始蕨科植物烏蕨 Odontosoria chinensis （L.） J. Smith 的全草，也稱大金花草，別名為野雞尾、金花草、土黃連、中華金粉蕨。我國主要分布于浙江、福建、臺(tái)灣、安徽、江西、廣東、廣西、海南、香港、湖南、湖北、四川、貴州及云南等省（區(qū)），廣西各地區(qū)均有分布。本品為瑤族民間常用藥，瑤醫(yī)認(rèn)為殺松涯具有清熱解毒、利濕、活血止血的作用，主要用于治療感冒、發(fā)熱、咳嗽、扁桃體炎、腮腺炎、腸炎、痢疾、黃疸型肝炎、肝膿瘍、跌打損傷、骨折、刀傷出血、狂犬咬傷、燒燙傷、傷口潰爛等癥。其單方和復(fù)方均具有清熱解毒、利濕、止血的功效[1]。研究表明，殺松涯化學(xué)成分主要為黃酮類和有機(jī)酚酸[2-4]，臨床用于治療腸炎、肝炎、咽喉炎等癥，民間用于治療胃癌、腸癌、食物中毒和農(nóng)藥中毒[5]。

近年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，自然環(huán)境受到了不同程度的污染[6-7]，全國范圍內(nèi)的中藥材受外源性污染問題依然嚴(yán)峻[8-11]。而殺松涯作為野生天然植物，在其自然生長過程中，有可能會(huì)受重金屬及有機(jī)氯農(nóng)藥的污染。因此，對(duì)瑤藥殺松涯的重金屬及有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測定十分有必要。本研究采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）測定鉛、砷、鎘、汞和銅，用氣相色譜法測定總六六六、總滴滴涕和五氯硝基苯，為瑤藥殺松涯的安全性使用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

7700x 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICP-MS）（美國安捷倫科技公司）；MARS-6 型微波消解儀（美國CEM 公司）；BHW-09C 型趕酸儀（上海博通化學(xué)科技有限公司）；XS205 型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；明澈24UV 型超純水器（德國默克密理博公司）；7890B 型氣相色譜儀（美國安捷倫科技公司）； TTL-DC Ⅱ型氮吹儀（北京通泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；R-300 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦有限公司）；SK8200HP 型超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液

硝酸（優(yōu)級(jí)純，德國默克公司）；實(shí)驗(yàn)用水為自制一級(jí)實(shí)驗(yàn)用水；鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：16063，中國計(jì)量科學(xué)研究院，1 000 μg/mL）；砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：18083-18，中國計(jì)量科學(xué)研究院，1 000 μg/mL）；鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：16012，中國計(jì)量科學(xué)研究院，1 000 μg/mL）；汞標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：18B012-2-18，國家有色金屬及電子材料分析中心，1 000 μg/mL）；銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：191039-3，國家有色金屬及電子材料分析中心，1 000 μg/mL）；ICP-MS混合內(nèi)標(biāo)液（批號(hào)：50-025CRY2，美國安捷倫科技公司，100 μg/mL）。

石油醚（60 ～ 90 ℃）、二氯甲烷、丙酮、硫酸、無水硫酸鈉、氯化鈉均為分析純，總六六六（BHC）和總滴滴涕（DDT）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（含α-BHC：50.0 μg/mL，β-BHC ：50.0 μg/mL，γ-BHC ：50.1 μg/mL，δ-BHC：50.2 μg/mL，p,p’-DDT：50.0 μg/mL，o,p’-DDT：50.1 μg/mL，p,p’-DDE：50.0 μg/mL，p,p’-DDD：50.2 μg/mL，中國計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)：19001），五氯硝基苯（PCNB）標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：201910，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所，100 μg/mL）。

1.3 殺松涯樣品

在廣西百色市右江區(qū)、靖西市、賓陽縣、恭城瑤族自治縣、西林縣、金秀瑤族自治縣、鳳山縣、上林縣共采集了12 批殺松涯樣品，經(jīng)廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院黃瑞松主任中藥師鑒定均為鱗始蕨科植物烏蕨 Odontosoria chinensis （L.） J. Smith。

2 方法與結(jié)果

2.1 重金屬元素的測定

2.1.1 儀器條件 ICP-MS 射頻功率：1 320 W；載氣流速：1.15 L/min；采樣深度：8 mm；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速：0.45 r/s；重復(fù)次數(shù)：3 次。

微波消解條件：室溫經(jīng)20 min 升至180 ℃，保持25 min，然后經(jīng)15 min 降至室溫。

2.1.2 測定方法 按照《中國藥典》2020 年版（四部）0412 電感耦合等離子體質(zhì)譜法進(jìn)行測定。測定時(shí)采用在線引入內(nèi)標(biāo)校正定量法。其中，銅、砷以鍺為內(nèi)標(biāo)，鎘以銦為內(nèi)標(biāo)，汞、鉛以鉍為內(nèi)標(biāo)。

2.1.3 對(duì)照品溶液的配制 分別精密吸取鉛、砷、鎘和銅標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用10%硝酸溶液稀釋并配制成含鉛、砷和鎘各為1 μg/mL、銅為10 μg/mL 的混合對(duì)照品貯備液。精密吸取混合對(duì)照品貯備液適量，用10%硝酸稀釋并配制成含鉛、砷和鎘分別為0、1、2、5、10、20、50 ng/mL、含銅0、10、20、50、100、200、500 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。精密吸取汞標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用10%硝酸溶液稀釋并配制成含汞為0.1 μg/mL 的對(duì)照品貯備液，精密吸取汞對(duì)照品貯備液適量，用10%硝酸稀釋并配制成含汞0、0.1、0.2、0.5、1、2、5 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.1.4 內(nèi)標(biāo)使用液的配制 精密吸取ICP-MS 混合內(nèi)標(biāo)液適量，用水稀釋并配制成含量為1 μg/mL 的內(nèi)標(biāo)使用液。

2.1.5 樣品溶液的制備 精密稱取粉碎成粗粉的樣品0.5 g 于消解罐中，加8 mL 硝酸，放置趕酸器中100 ℃預(yù)消解30 min，冷卻后蓋上罐蓋，旋緊罐蓋，按照微波消解儀的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟進(jìn)行消解，冷卻后取出，緩慢打開罐蓋排氣，用少量的超純水沖洗內(nèi)蓋，將消解罐放在趕酸儀上趕酸，100 ℃趕去棕色氣體，取出消解罐，將消解液轉(zhuǎn)移至50 mL 的容量瓶，用少量超純水分3 次洗滌消解罐，洗滌液合并于容量瓶并用超純水定容至刻度，混勻備用，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

2.1.6 線性關(guān)系的考察 取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和汞標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別上機(jī)測定，以待測元素濃度為橫坐標(biāo)，待測元素和相應(yīng)內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出各元素線性回歸方程，見表1。

表1 5 種重金屬元素線性方程及線性范圍Tab. 1 Linear equation and linear range of each element

2.1.7 檢出限試驗(yàn) 以11 次空白溶液測定值計(jì)算儀器檢出濃度，按照“2.1.5”項(xiàng)下方法計(jì)算出各元素的檢出限。結(jié)果鉛檢出限為0.007 mg/kg、砷檢出限為0.003 mg/kg、鎘檢出限為0.006 mg/kg、汞檢出限為0.000 5 mg/kg、銅檢出限為0.001 mg/kg。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)為1 的樣品各0.5 g 共6 份，按“2.1.5”項(xiàng)下方法平行操作，制備供試液，測定，計(jì)算各元素含量。結(jié)果各元素含量的RSD 分別為1.8%、2.2%、2.6%、3.0%和1.2%。表明方法重復(fù)性良好。

2.1.9 回收率試驗(yàn) 取編號(hào)為1 的樣品各0.25 g 共18 份，按下表分別加入鉛、砷、鎘、汞、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按“2.1.5”項(xiàng)下方法分別制備加樣回收試驗(yàn)供試液，測定，計(jì)算回收率，見表2。

2.1.10 樣品測定結(jié)果 分別取12 批樣品，按“2.1.5”項(xiàng)下方法制備樣品供試液,并按“2.1.2”項(xiàng)下方法測定樣品中鉛、砷、鎘、汞、銅元素含量。結(jié)果見表3。

2.2 有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測定

2.2.1 氣相色譜條件 彈性石英毛細(xì)管柱DBCLP1（30 m×0.32 mm×0.25 μm），ECD 電子捕獲檢測器，進(jìn)樣口溫度：230 ℃，檢測器溫度：340 ℃，不分流進(jìn)樣：1 μL，載氣：N2，流速：2 mL/min。柱溫：初始溫度150 ℃，保持0.2 min；以10 ℃/min 的速度升至250 ℃，保持0 min；以15 ℃/min 的速度升至300 ℃，保持0 min；以30 ℃/min 的速度升至330 ℃，保持0.5 min。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密量取總六六六（BHC）和總滴滴涕（DDT）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，五氯硝基苯（PCNB）標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，置于同一10 mL容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量約為5 μg/mL 的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL 置于50 mL 容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量約為100 ng/mL的混合對(duì)照品溶液。分別精密量取混合對(duì)照品溶液0、0.1、0.5、1、5、10 mL 置10 mL 容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量約為0、1、5、10、50、100 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

表2 5 種重金屬元素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab. 2 Recovery test results of each element

表3 12 批樣品5 種重金屬元素測定結(jié)果（mg/kg）Tab. 3 Detection results of each elements in samples（mg/kg）

2.2.3 樣品溶液的制備 精密稱取粉碎后過三號(hào)篩的樣品約2 g，精密稱定，置150 mL 具塞錐形瓶中，加水20 mL 混勻浸泡過夜，精密加入丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足失重，再加入氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足失重，靜置使分層，將有機(jī)相迅速移入裝有4 g 無水硫酸鈉的100 mL 具塞錐形容量瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60 ～90 ℃）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60 ～90 ℃）少量多次溶解轉(zhuǎn)移至10 mL 具塞刻度離心管中，加石油醚（60 ～90 ℃）精密稀釋至5 mL，小心加入濃硫酸1 mL，振搖1 min，離心（3 000 r/min），精密量取上清液2 mL，置刻度氮吹管中，于40 ℃下將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1 mL，即得。

2.2.4 線性關(guān)系及檢出限試驗(yàn) 取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)測定，以待測物濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出各成分線性回歸方程。檢出限以3 倍信噪比（S/N）所對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法計(jì)算各成分檢出限，見表4。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為50 ng/mL 混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5 次。結(jié)果各成分峰面積的RSD為3.7%～6.5%，表明精密度良好。

2.2.6 回收率試驗(yàn) 取編號(hào)為2 的樣品各2 g 共18份，按下表分別加入含量約為100 ng/mL 的六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）和五氯硝基苯（PCNB）混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備加樣回收試驗(yàn)供試液，測定，計(jì)算回收率，見表5。

2.2.7 樣品測定結(jié)果 分別取12 批樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下條件測定樣品中各有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。結(jié)果見表6。

表4 各成分線性方程及檢出限Tab. 4 Linear equation and detection limit of each composition

表5 各成分加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab. 5 Recovery test results of each composition

表6 樣品中9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測定結(jié)果（mg/kg）Tab. 6 Detection results of 9 kinds of organochlorine pesticide residues in samples（mg/kg）

3 討論

殺松涯為廣西瑤族民間常用藥，但未有標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定其重金屬及農(nóng)藥殘留量限度。故以《藥用植物及制劑出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》[12]中規(guī)定的鉛≤5.0 mg/kg、砷≤2.0 mg/kg、鎘≤0.3 mg/kg、汞≤0.2 mg/kg、銅≤20 mg/kg；總六六六≤0.2 mg/kg、總滴滴涕≤0.2 mg/kg、五氯硝基苯≤0.1 mg/kg 限度作為參考。測定結(jié)果表明，樣品中鉛、砷、鎘、汞、銅含量范圍分別為1.53 ～6.33 mg/kg、0.21 ～3.35 mg/kg、0.11 ～0.30 mg/kg、0 ～0.05 mg/kg、1.52 ～14.28 mg/kg；總六六六、總滴滴涕和五氯硝基苯的含量范圍分別為0 ～1.159 8 mg/kg、0.002 1 ～0.047 1 mg/kg、0.002 8 ～0.090 0 mg/kg。大部分樣品的重金屬及有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量均在安全范圍內(nèi)，但4 號(hào)樣品的砷和5 號(hào)樣品的鉛超標(biāo)，1 號(hào)和10 號(hào)樣品的總六六六超標(biāo)。說明殺松涯在重金屬和農(nóng)藥殘留方面尚存在一定的安全隱患，提示這類外源性污染物應(yīng)當(dāng)受到重視并加以防范。由于在同一地點(diǎn)采集的樣品量較少，樣品受生長地的環(huán)境影響較大，因此測試結(jié)果只能體現(xiàn)采集地點(diǎn)樣品的情況。本次檢測的樣品全部為野生品，其所受外源性污染物可能與生長地點(diǎn)的土壤、水質(zhì)以及附近人為使用農(nóng)藥有關(guān)?？刂莆廴緫?yīng)從源頭抓起，建議當(dāng)?shù)貞?yīng)從保護(hù)生態(tài)壞境入手，并加強(qiáng)對(duì)藥材的重金屬及有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測，以保證用藥的安全性。

4 結(jié)論

本研究采用的電感耦合等離子體質(zhì)譜法和氣相色譜法精密度高、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于瑤藥殺松涯重金屬和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的檢測。本次測定結(jié)果可為瑤藥殺松涯的用藥安全性提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。