AT1-AA通過上調(diào)細(xì)胞自噬誘導(dǎo)大鼠心功能不全*

張志楠， 康曉慶， 王 瑾， 靳文文， 王雪嬌， 焦向英△

（1山西醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室，山西太原030001；2山西省心血管病醫(yī)院，山西太原030024）

心血管疾病是我國乃至全世界最常見的疾病之一，多數(shù)患者最后可轉(zhuǎn)為慢性心力衰竭而導(dǎo)致死亡［1-2］。心肌細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞，在心力衰竭的發(fā)展進(jìn)程中，各種致病原因引起的心肌細(xì)胞凋亡使得有功能的細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，引起心功能逐漸下降，直至最后無法代償而出現(xiàn)心力衰竭［3-4］，因此抑制心肌細(xì)胞凋亡可以有效延緩心功能不全的發(fā)生，是治療心力衰竭的重要策略［4-5］。近年來的研究表明，在各類心血管類疾病（包括心衰）患者血清中均檢測到血管緊張素Ⅱ1 型受體自身抗體（angiotensin Ⅱtype 1 receptor autoantibody，AT1-AA），其水平明顯高于正常人［6-7］，提示AT1-AA 可能參與心力衰竭進(jìn)程，但在整體情況下，該抗體是否可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡引起心功能不全及其具體機(jī)制尚不清楚。

細(xì)胞自噬是真核細(xì)胞蛋白降解的途徑之一，通常被認(rèn)為是細(xì)胞的一種正常保護(hù)機(jī)制，是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)所必需的［8］。在營養(yǎng)充足的條件下，可保護(hù)細(xì)胞免受錯誤折疊蛋白或受損細(xì)胞器的影響，從而防止某些疾病的發(fā)生（如神經(jīng)退行性疾病和腫瘤）；饑餓等也可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，通過降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器為細(xì)胞活動提供營養(yǎng)和能量來促進(jìn)細(xì)胞存活［9］。然而，過多的和不受控制的自噬激活會導(dǎo)致必需分子和細(xì)胞器的耗竭，引起細(xì)胞凋亡［10-11］。這表明，自噬具有雙向功能，根據(jù)誘導(dǎo)的背景和程度不同，它可能會拮抗疾病的發(fā)病機(jī)制，也可能促進(jìn)疾病的進(jìn)展［12］。自噬與心血管疾病密切相關(guān)，在心力衰竭進(jìn)程中發(fā)揮著多種作用［13-14］。已證實(shí)，血管緊張素Ⅱ（angiotension Ⅱ，Ang Ⅱ）可以誘導(dǎo)自噬［15-16］，AT1-AA 具有類Ang Ⅱ的激動樣作用［17］，那么AT1-AA 是否也會對心肌細(xì)胞的自噬產(chǎn)生影響，如果有影響，自噬在AT1-AA引起的心功能不全及心肌細(xì)胞凋亡中的作用如何，值得我們深入探討。

研究發(fā)現(xiàn)，AT1-AA 是一種G 蛋白偶聯(lián)受體（Gprotein-coupled receptor，GPCR）自身抗體，可以特異性結(jié)合血管緊張素Ⅱ1 型受體（angiotensin Ⅱtype 1 receptor，AT1R），通過專一性識別AT1R 細(xì)胞外第二環(huán)（the second extracellular loop of AT1R，AT1R-ECⅡ）功能表位肽段而發(fā)揮類Ang Ⅱ激動效應(yīng)［18］。因此，我們猜測AT1-AA 可能通過與AT1R 結(jié)合引起心功能不全。因此，本研究的主要目的是觀察AT1-AA是否通過AT1R，使大鼠心肌細(xì)胞自噬上調(diào)，誘導(dǎo)在體大鼠心肌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而引起心功能不全，參與心力衰竭的進(jìn)程。

材料和方法

1 動物和材料

SD 大鼠和AT1aR基因敲除8 周齡雄性SD 大鼠，由首都醫(yī)科大學(xué)劉慧榮教授贈送（南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院制備）。PCR 引物購于上海生工生物工程股份有限公司，具體序列見表1；AT1R-ECⅡ（序列 為165～191，IHRNVFFIENTNITVCAFHYESQN?STL）肽段購于上海吉爾生化公司；3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司；TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購于江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒購于Bio-Rad；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG和HE檢測試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司；微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）、beclin-1、P62、caspase-3和β-actin抗體購于CST。

表1 PCR引物序列Table 1. Primer sequences for PCR

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組 PCR 基因鑒定后分組，分為空白對照（vehicle）組、AT1-AA 免疫（AT1-AA）組、AT1-AA+3-MA 組和AT1aR-/-+AT1-AA 組。前3 組為8 周齡雄性SD大鼠（AT1aR基因敲除SD大鼠子代中陰性純合子），第4 組為8 周齡雄性AT1aR基因敲除鼠，每組6 只。除空白對照組大鼠外，其余大鼠均進(jìn)行首次免疫［將人同源性AT1R-ECⅡ肽段（0.4 μg/g）溶于Na2CO3稀釋溶液溶解，與完全弗氏佐劑1∶1 混勻后，多點(diǎn)背部皮下注射］及加強(qiáng)免疫（將完全佐劑換為不完全弗氏佐劑，每2 周1 次，共免疫12 周），每次加強(qiáng)免疫前從尾靜脈取血，留取大鼠血清；vehicle 組將抗原溶液換位等量Na2CO3溶液，其余同免疫組。AT1-AA+3-MA組，免疫8周時從AT1-AA免疫組隨機(jī)分出6只腹腔注射3-MA（10 mg/kg），隔天1次，共4周。

2.2 SA-ELISA 法檢測血清抗體水平 用人工生物合成的AT1R-ECⅡ抗原肽段包被抗原于96 孔板，4℃過夜。加入封閉液，37℃水浴箱中封閉1 h，PBST 溶液清洗。37℃水浴1.5 h 孵育I 抗，PBST 溶液清洗，靜置風(fēng)干。37℃水浴孵育Ⅱ抗羊抗大鼠IgG 1 h，PBST 溶液清洗。加鏈酶卵白素37℃水浴箱1 h，PBST 溶液清洗。加入底物ABTS 緩沖液水浴箱中30 min 顯色。用酶標(biāo)儀檢測吸光度（A）值，得到血清抗體濃度。

2.3 小動物超聲儀檢測心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化異氟烷輕度麻醉大鼠，左側(cè)前胸脫毛。GE Vivid 7 Dimension Ultrasound 超聲儀進(jìn)行超聲心動圖檢查，取短軸切面。測定左心室舒張末期內(nèi)徑（left ven?tricular end-diastolic inner dimension，LVIDd）、左心室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end-systolic inner diameter，LVIDs）、左心室舒張末期后壁厚度（left ventricular end-diastolic posterior wall thickness，LPWDd）、左心室收縮末期后壁厚度（left ventricular end-systolic posterior wall thickness，LPWDs）、左心室舒張末期容積（left ventricular end-diastolic volume，LVEDV）和左心室收縮末期容積（left ventricular endsystolic volume，LVESV）作為反映心臟結(jié)構(gòu)的指標(biāo)。測定左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection frac?tion，LVEF）和左心室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）作為反映心臟功能的指標(biāo)。連續(xù)測量3次，取平均值。

2.4 HE 染色 采用4%多聚甲醛固定和石蠟包埋的大鼠心臟。取左室橫切面3 μm 連續(xù)切片，常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色。Olympus BX51 正置顯微鏡獲取圖像。

2.5 TUNEL 染色檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況 將石蠟包埋的心臟組織左室橫切面2 μm 連續(xù)切片，根據(jù)TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書操作檢測。Olympus BX51正置顯微鏡獲取圖像。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（apoptotic index，AI）=凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/心肌細(xì)胞核總數(shù)×100%。

2.6 Western blot 檢測自噬和凋亡相關(guān)蛋白水平分別檢測自噬起始的重要調(diào)節(jié)因子beclin-1、自噬體形成的標(biāo)志蛋白LC3 及自噬底物P62 的表達(dá)和凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平。取0.05 g 心臟組織，加500 μL 裂解液和5 μL 蛋白酶抑制劑PMSF，眼科剪剪碎后超聲碎裂，冰上裂解2.5 h，12 000 r/min、4℃離心15 min，取上清。BCA 法測蛋白濃度，SDS-PAGE 分離，轉(zhuǎn)膜，封閉，I 抗和Ⅱ抗孵育，滴加ECL 發(fā)光液曝光。ImageJ 軟件分析曝光條帶灰度值。以β-actin作為蛋白表達(dá)的內(nèi)參照。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 16.0 和GraphPad Prism 6.02 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示。兩組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較使用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間兩兩比較使用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 AT1-AA陽性大鼠模型的建立

SA-ELISA 方法檢測大鼠血清中的AT1-AA 水平。結(jié)果顯示，與vehicle 組相比，AT1-AA 免疫組免疫第2 周時血清AT1-AA 含量升高（P＜0.05），隨著免疫時間延長，血清中AT1-AA 抗體滴度逐漸升高，免疫8 周時AT1-AA 抗體滴度達(dá)到峰值并到實(shí)驗(yàn)結(jié)束一直維持在高水平（P＜0.01），提示AT1-AA 陽性大鼠造模成功，見圖1A。

PCR 鑒定不同基因型大鼠DNA 的水平。圖1B結(jié)果顯示，1和2為SD 大鼠（AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陰性純合子），3 和4 為AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陽性雜合子，5 為AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陽性純合子。

2 AT1-AA 長期存在可以引起大鼠心肌損傷、心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)的改變

心臟超聲結(jié)果圖見圖2A，與vehicle 組相比，AT1-AA 免疫組大鼠在免疫12 周時的LVIDs 和LVESV 均顯著增加（P＜0.05），LVEF 和LVFS 均明顯下降（P＜0.05），見圖2。

HE 染色結(jié)果顯示，vehicle 組心肌細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞致密，細(xì)胞核大小均一，橫紋清晰，細(xì)胞間隙正常，心肌纖維未見明顯斷裂。與vehicle 對照組相比，AT1-AA 免疫組大鼠在免疫12 周時心肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞核大小明顯不同，細(xì)胞質(zhì)空泡化，橫紋模糊，細(xì)胞間隙扭曲增寬，心肌纖維走向紊亂且破裂，見圖2J。

以上結(jié)果提示AT1-AA 長期存在可以引起大鼠心肌損傷、心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)改變。

3 AT1-AA長期存在可以引起心肌細(xì)胞凋亡增加

TUNEL 染色結(jié)果顯示，與vehicle 組相比，在免疫12 周時免疫組大鼠心臟組織中TUNEL 染色陽性即棕黃色細(xì)胞核增多，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增加（P＜0.05），見圖3A。

Western blot 檢測凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平，結(jié)果顯示：與vehicle 組相比，AT1-AA 免疫組在免疫12 周時心臟組織的cleaved caspase-3/caspase-3 蛋白水平增加（P＜0.05），說明凋亡水平上升，見圖3C。以上結(jié)果提示AT1-AA 長期存在可以誘導(dǎo)心臟組織凋亡增加。

Figure 1. AT1-AA positive rats were successfully established. A：characteristics of AT1-AA in serum. Mean±SEM. n=6. **P＜0.01 vs vehicle group. B：PCR results for AT1aR knockout rats. M：marker；P：positive control；1，2：AT1aR-/- mice；3，4：AT1aR-/+mice；5：AT1aR+/+mice.圖1 AT1-AA陽性大鼠造模成功的鑒定結(jié)果

4 AT1-AA 長期存在可以引起心臟組織自噬水平升高

Western blot 檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、beclin-1 和P62 的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示與vehicle 組相比，AT1-AA 免疫組在免疫12周時心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1 蛋白的水平增加（P＜0.05），而P62 蛋白的水平降低（P＜0.05），見圖4。提示AT1-AA 可以誘導(dǎo)心臟組織細(xì)胞自噬水平升高。

5 自噬抑制劑3-MA可以抑制AT1-AA誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬和凋亡水平，改善心功能不全

腹腔注射3-MA 4 周后，取大鼠心臟組織用Western blot 檢測自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示與AT1-AA免疫組相比，AT1-AA+3-MA組心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1 蛋白的水平降低（P＜0.05），而P62 蛋白的水平升高（P＜0.05），見圖4，提示自噬抑制劑3-MA可以抑制AT1-AA誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬水平。

腹腔注射3-MA 4 周后，TUNEL 染色檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況，Western blot 檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。TUNEL 染色結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫組相比，AT1-AA+3-MA 組大鼠心臟組織棕黃色顆粒較少，心肌細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05），見圖3A；Western blot 結(jié)果顯示與AT1-AA 組相比，AT1-AA+3-MA 組心臟組織的cleaved caspase-3/caspase-3蛋白水平下降（P＜0.05），說明凋亡減少，見圖3B。以上結(jié)果提示抑制自噬可減少AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡。

小動物超聲儀檢測心臟功能和結(jié)構(gòu)變化，HE 染色觀察心臟結(jié)構(gòu)變化。超聲檢測結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫 組相 比，AT1-AA+3-MA 組大鼠 的LVIDs 和LVESV 均下降（P＜0.05），LVEF 和LVFS 均顯著增加（P＜0.05），見圖2。HE 染色結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫組相比，AT1-AA+3-MA 組心肌細(xì)胞排列紊亂減少，細(xì)胞質(zhì)空泡化減少，橫紋較清晰，細(xì)胞間隙扭曲增寬程度降低，心肌纖維走向紊亂且破裂程度較輕，心肌細(xì)胞溶解減少，見圖2J。以上結(jié)果提示自噬抑制劑3-MA 可以減輕AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變及心功能不全。

6 AT1aR 敲除可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織自噬和凋亡水平降低，心功能不全改善

AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時，Western blot 檢測大鼠心臟組織自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示與AT1-AA 免疫組相比，AT1aR-/-+AT1-AA 組心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1 蛋白的水平降低（P＜0.05），而P62 蛋白的水平則升高（P＜0.05），見圖4，提示敲除AT1aR可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬水平降低。

Figure 2. AT1-AA positive rats had decreased cardiac function and damaged heart structure，and both autophagy inhibitor 3-MA and AT1a receptor knockout reduced the functional and structural damages of heart and attenuated cardiac insufficiency in the rats. A：the images of representative of echocardiography；B：left ventricular end-systolic inner diameter（LVIDs）；C：left ventricular end-systolic volume（LVESV）；D：left ventricular ejection fraction（LVEF）；E：left ventricular fraction shortening（LVFS）；F：left ventricular end-diastolic inner diameter（LVIDd）；G：left ventricular end-diastolic volame（LVEDV）；H：left ventricular end-systolic wall thickness（LPWDs）；I：left ventricular end-diastolic wall thickness（LPWDd）；J：the results of HE staining（scale bar=200 μm）. Mean±SEM. n=6. *P＜0.05 vs vehicle group；#P＜0.05 vs AT1-AA group.圖2 AT1-AA陽性大鼠心臟功能下降和結(jié)構(gòu)損傷，自噬抑制劑3-MA和AT1aR敲除都可以減輕大鼠心臟功能和結(jié)構(gòu)損傷，改善心功能不全

AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時，TUNEL 染色和Western blot 檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況。TUNEL染色結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫組相比，AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠心臟組織棕黃色顆粒較少，心肌細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05），見圖3A。Western blot 結(jié)果顯示與AT1-AA 組相比，AT1aR-/-+AT1-AA 組心臟組織凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平下降（P＜0.05），見圖3B，說明凋亡水平下降，提示敲除AT1aR可減輕AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡水平。

Figure 3. The apoptosis of AT1-AA positive rat heart tissue was increased，and both autophagy inhibitor 3-MA and AT1aR knockout reduced the apoptosis induced by AT1-AA in heart tissue. A：results of TUNEL staining（the scale bar=200 μm）；B：the protein levels of caspase-3 protein in different rat heart tissues determined by Western blot. Mean±SEM. n=6. * P＜0.05 vs vehicle group；#P＜0.05 vs AT1-AA group.圖3 AT1-AA陽性大鼠心臟組織細(xì)胞凋亡增加，自噬抑制劑3-MA和AT1aR敲除均可降低AT1-AA誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡

AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時，小動物超聲檢測心臟功能和結(jié)構(gòu)變化，HE 染色觀察心臟結(jié)構(gòu)變化。超聲檢測結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫組相比，AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠的LVIDs 和LVESV 均下降（P＜0.05），LVEF 和LVFS 均顯著增加（P＜0.05），見圖2。HE 染色結(jié)果顯示，與AT1-AA 免疫組相比，AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠的心肌細(xì)胞排列紊亂減輕，橫紋較清晰，細(xì)胞間隙扭曲增寬程度降低，心肌纖維走向紊亂且破裂程度較輕，見圖2J。以上結(jié)果提示AT1aR敲除可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷和心臟結(jié)構(gòu)改變程度減輕，改善心功能不全。

討 論

近年來，心血管疾病已成為威脅人類健康的重大疾?。?-2］。許多心血管疾病的最終結(jié)果是心力衰竭，這是一種心臟無法滿足身體代謝需求的綜合征，已經(jīng)成為心血管疾病的主要死亡原因［1-2］。臨床心衰患者血清中可檢測出高滴度的AT1-AA［6-7］。本研究通過使用小動物超聲儀檢測大鼠心臟功能變化，小動物超聲和HE 染色檢測大鼠心臟結(jié)構(gòu)的變化。左心室射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率、左心室收縮末期內(nèi)徑及左心室收縮末期容積等指標(biāo)是評價左心室整體功能的重要指標(biāo)，即診斷心衰的重要指標(biāo)［2］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AT1-AA 的長期存在可以使心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)改變。

心肌細(xì)胞損傷和死亡在心功能不全的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞凋亡作為細(xì)胞程序性死亡的方式之一，心肌細(xì)胞凋亡的持續(xù)存在可以增加心肌細(xì)胞死亡，導(dǎo)致心功能不全，抑制心肌細(xì)胞死亡可有效改善心功能［4-5］。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)心肌細(xì)胞中給予AT1-AA 處理能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡［19］，本實(shí)驗(yàn)使用TUNEL 染色和Western blot 技術(shù)發(fā)現(xiàn)AT1-AA 長期存在可以引起心臟組織細(xì)胞凋亡增加，提示AT1-AA 可能參與心力衰竭進(jìn)程，但在心功能不全中AT1-AA 誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制尚不清楚。

Figure 4. The expression of autophagy-related proteins was changed in the heart tissues of AT1-AA positive rats，and both autophagy inhibi?tor 3-MA and AT1aR knockout changed the expression of autophagy-related proteins in heart tissues induced by AT1-AA. Mean±SEM.n=6. *P＜0.05 vs vehicle group；#P＜0.05 vs AT1-AA group.圖4 AT1-AA 陽性大鼠心臟組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)變化，自噬抑制劑3-MA 和AT1aR 敲除均可改變AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織自噬相關(guān)蛋白的水平

自噬是溶酶體降解并清除受損細(xì)胞器的過程。通過平衡細(xì)胞合成和分解，自噬可以穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境［8］。然而，過多的和不受控制的自噬可致細(xì)胞的程序性死亡［10-11］。自噬的程度可用LC3-Ⅱ/LC3-I 比值評價，隨著自噬增加，LC3-Ⅱ表達(dá)逐漸增多［10］。P62受體是自噬的底物結(jié)合物，在自噬溶酶體降解過程中，P62 受體被降解清除，而當(dāng)自噬受阻，P62 蛋白的表達(dá)則顯著增加［3］。Beclin1 作為哺乳動物同系物，有促進(jìn)自噬活性的作用［10］。本研究通過用Western blot 法檢測自噬相關(guān)蛋白，發(fā)現(xiàn)AT1-AA 可以激活自噬；為了進(jìn)一步探討自噬對AT1-AA誘導(dǎo)心臟組織細(xì)胞凋亡的影響，我們給大鼠腹腔注射自噬抑制劑3-MA，發(fā)現(xiàn)自噬參與AT1-AA 誘導(dǎo)心功能不全中心肌細(xì)胞凋亡的過程。

研究表明，AT1-AA 可以通過專一識別、結(jié)合AT1R 來發(fā)揮類血管緊張素Ⅱ的激動樣作用［18］。因此為了進(jìn)一步探討AT1aR 在AT1-AA 陽性大鼠心功能不全進(jìn)程中的作用及意義，我們使用AT1aR敲除大鼠，主動免疫構(gòu)建AT1-AA 陽性大鼠模型，觀察AT1aR敲除對AT1-AA 陽性大鼠心肌細(xì)胞損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變及心功能的影響，同時檢測心肌細(xì)胞凋亡和自噬水平的變化。結(jié)果提示敲除AT1aR可以抑制AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心臟組織自噬和凋亡水平，減弱AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變，改善心功能不全。本結(jié)果證明AT1-AA 確是作為受體激動劑，需要與AT1R 結(jié)合，才能發(fā)揮其誘導(dǎo)自噬和凋亡，導(dǎo)致大鼠心肌損傷的作用。

綜上所述，AT1-AA 可以作用于AT1aR，上調(diào)大鼠心臟組織自噬，誘導(dǎo)在體大鼠心肌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而引起心功能不全，參與心力衰竭的進(jìn)程。本研究結(jié)果可為臨床治療心力衰竭特別是AT1-AA 陽性心力衰竭提供理論依據(jù)和治療的潛在靶點(diǎn)。