完整結(jié)腸系膜切除術(shù)后DC-CIK聯(lián)合奧沙利鉑、卡培他濱治療結(jié)腸癌對(duì)免疫水平的影響

劉固，趙廷江

結(jié)腸癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤，患病率居于胃腸道惡性腫瘤的第三位。完整結(jié)腸系膜切除術(shù)是當(dāng)前治療結(jié)腸癌的有效手段，是規(guī)范結(jié)腸癌的手術(shù)項(xiàng)目，完整切除腫瘤病灶，在最大限度上清除淋巴結(jié)，提高患者生存率[1-2]。有研究表明完整結(jié)腸系膜切除術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率5.26%、腫瘤復(fù)發(fā)率3.51%明顯低于傳統(tǒng)根治術(shù)的17.54%、19.30%(P<0.05)[3]。但完整結(jié)腸系膜切除術(shù)后仍有部分患者伴腫瘤復(fù)發(fā)，因此探索一種合理有效的術(shù)后輔助化療方法，降低腫瘤復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)性成為研究熱點(diǎn)。隨著生物治療及靶向治療的進(jìn)展，為腫瘤治療提供一條新的思路。但是部分患者在分子靶向治療以及輔助化療時(shí)，機(jī)體免疫功能受到不同程度的損傷，增加免疫逃逸的風(fēng)險(xiǎn)。樹突狀細(xì)胞-細(xì)胞因子(DC-CIK)是聯(lián)合樹狀細(xì)胞(DC)及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIKs)，增殖速度迅速、殺傷腫瘤細(xì)胞作用顯著[4-5]。本研究對(duì)結(jié)腸癌完整結(jié)腸系膜切除術(shù)后患者采用DC-CIK聯(lián)合奧沙利鉑、卡培他濱治療，旨在為臨床用藥的選擇提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

回顧性分析2016年1月至2019年1月湖南省郴州市第一人民醫(yī)院收治的128例結(jié)腸癌患者，按不同治療方法分為兩組，對(duì)照組54例，觀察組74例，兩組患者基線資料有同質(zhì)性(P>0.05)，可進(jìn)行比較，見表1。本研究符合湖南省郴州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批標(biāo)準(zhǔn)，審核通過。

表1 兩組基線資料比較

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為結(jié)腸癌[6]；②初次接受完整結(jié)腸系膜切除術(shù)；③術(shù)前未經(jīng)放化療、DC-CIK治療；④術(shù)前無免疫系統(tǒng)疾病、凝血機(jī)制障礙；⑤知情研究，簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心力衰竭、心律失常、心絞痛等心臟疾?。虎谠心X出血、肝腎功能不全者；③伴哮喘、慢性阻塞性肺疾病等呼吸系統(tǒng)疾?。虎苣[瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；⑤臨床資料不完整者。

1.3 方法

兩組患者均由同一組經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)嫻熟的手術(shù)醫(yī)師操作，實(shí)施完整結(jié)腸系膜切除術(shù)。對(duì)照組患者術(shù)后行奧沙利鉑、卡培他濱治療，奧沙利鉑注射液(深圳海王藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20031048)130 mg/m2，靜脈滴注，第1天；卡培他濱片(上海羅氏制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20073024)，口服，500 mg/m2，早晚各1次服用，第1～14天；3周1個(gè)療程，連續(xù)6個(gè)療程。觀察組患者采用DC-CIK聯(lián)合奧沙利鉑、卡培他濱治療，奧沙利鉑、卡培他濱和對(duì)照組一樣。DC-CIK的制備與用法：術(shù)后于切除的腫瘤標(biāo)本內(nèi)切取1.0×1.0×0.5 cm3腫瘤組織標(biāo)本，避開壞死液化區(qū)、周圍組織交界部位，使用慶大霉素鹽水對(duì)腫瘤組織反復(fù)沖洗，置入無菌瓶?jī)?nèi)，加入8萬U慶大霉素注射液(輔仁藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20068112)浸泡，于-80 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。備存的腫瘤組織復(fù)溫融化后，使用1640培養(yǎng)基，對(duì)腫瘤標(biāo)本反復(fù)沖洗，剪碎后放置200目網(wǎng)塞，并對(duì)組織進(jìn)行研磨，沖洗，收集沖洗液于-80 ℃冰箱內(nèi)冷凍。37 ℃水浴復(fù)溫，離心15 min，采集上清液，作為全腫瘤細(xì)胞抗原，于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。DC腫瘤疫苗、CIK細(xì)胞制備：先取重組人粒細(xì)胞集落刺激因子200 μg，皮下注射，在第二天采集外周血80～100 mL，肝素抗凝，F(xiàn)icoll梯度離心法，對(duì)單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離并采集；使用RPMI 1640反復(fù)對(duì)其進(jìn)行洗滌3次，置于RPMI 1640完全血清培養(yǎng)基內(nèi)，按2×106個(gè)/mL細(xì)胞懸浮；培養(yǎng)2～4 h，置于5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，37 ℃。選擇貼壁細(xì)胞作為DC，將其置于DC培養(yǎng)基，每2天更換1次培養(yǎng)液，連續(xù)6 d，加入rhTNF 15 ng/mL與腫瘤細(xì)胞裂解物，連續(xù)培養(yǎng)24 h，采集成熟的負(fù)載全腫瘤抗原的DC腫瘤疫苗，使用生理鹽水洗滌，分別制作腫瘤細(xì)胞以及加入CIK細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，隨后回輸治療。CIK細(xì)胞添加IFN-γ(1 000 U/mL)、IL-2(500 U/mL)，培養(yǎng)24 h，置于5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，37 ℃。培養(yǎng)1 d后，置入抗CD3單克隆抗體(100 μg/L)、IL-15(10 U/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)；每3天更換1次培養(yǎng)基，形成2×106/mL細(xì)胞濃度。于第10天采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞，檢查陰性后使用生理鹽水洗滌，加入1%人血白蛋白，配置DC-CIK細(xì)胞，行靜脈回輸，1支200 mL?；颊呙看屋斪?×109/個(gè)輸注細(xì)胞數(shù)，每天輸注1次，1個(gè)療程5 d。輸注結(jié)束后，靜脈滴注IL-2注射液100萬U，于腹股溝淋巴結(jié)附近，皮下注射DC，1個(gè)療程3次。連續(xù)治療3個(gè)療程。

1.4 觀察指標(biāo)

兩組患者于療程結(jié)束后評(píng)價(jià)本次治療效果：①比較兩組治療前后的免疫功能，即采集患者治療前后外周血3 mL，抗凝，淋巴細(xì)胞分離液處理，以流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞亞群，CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3+CD56+及Treg細(xì)胞；②比較兩組患者治療前后的癌胚抗原(CEA)水平，于化療前、化療3個(gè)療程結(jié)束后，采集患者外周血3 mL，離心，分離血清，電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定；③比較兩組治療期間的毒副反應(yīng)，包括骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、皮膚癥狀、神經(jīng)毒性反應(yīng)等。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后的免疫功能比較

治療前，兩組的CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3+CD56+及Treg細(xì)胞比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，觀察組治療后CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3+CD56+細(xì)胞較治療前增加，Treg細(xì)胞較治療前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)照組CD8+、Treg細(xì)胞較治療前下降(P<0.05)，治療后，觀察組CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3+CD56+細(xì)胞高于對(duì)照組，Treg細(xì)胞低于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組治療前后的免疫功能比較

2.2 兩組患者治療前后CEA表達(dá)水平比較

治療前兩組CEA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組CEA表達(dá)水平低于治療前(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

表3 兩組治療前后CEA表達(dá)水平比較

2.3 兩組治療期間的毒副反應(yīng)比較

觀察組骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、神經(jīng)毒性反應(yīng)、皮膚癥狀不良反應(yīng)發(fā)生率低于對(duì)照組(P<0.05)，見表4。

表4 兩組治療期間的毒副反應(yīng)比較[n(%)]

3 討論

完整結(jié)腸系膜切除術(shù)是治療結(jié)腸癌的主要技術(shù)，明確腫瘤區(qū)域淋巴結(jié)回流路徑，將肌層筋膜內(nèi)結(jié)腸系膜組織完整切除，以期增加淋巴結(jié)清掃數(shù)目[7]。黃文偉等[8]研究對(duì)比傳統(tǒng)結(jié)腸癌根治術(shù)與完整結(jié)腸系膜切除術(shù)治療老年結(jié)腸癌的近期效果，觀察組并發(fā)癥發(fā)生率9.30%低于對(duì)照組的17.95%(P<0.05)，且能降低腫瘤復(fù)發(fā)率。結(jié)腸癌術(shù)后聯(lián)合化療延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間、提高生存率已得到證實(shí)，奧沙利鉑是第3代鉑類抗癌藥物，以腫瘤細(xì)胞DNA作為靶作用部位，形成交叉聯(lián)結(jié)，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄，促使腫瘤細(xì)胞凋亡[9-10]?？ㄅ嗨麨I常用于結(jié)腸癌術(shù)后患者，口服經(jīng)腸黏膜迅速吸收，轉(zhuǎn)化為無活性的中間體5’-脫氧-5’氟胞苷，在腫瘤組織內(nèi)轉(zhuǎn)為氟尿嘧啶，以此抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制，促使其凋亡[11-12]。雖然化療藥物對(duì)一定比例的腫瘤細(xì)胞有相應(yīng)作用，但無法清除微小腫瘤病灶；加之部分患者癌細(xì)胞對(duì)化療不敏感，易出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況[13]。另外部分患者多周期化療時(shí)，免疫功能受到損傷，使其無法耐受化療治療，以此影響臨床治療效果。因此免疫治療成為術(shù)后化療時(shí)常見的聯(lián)合治療方案。

DC-CIK細(xì)胞是一種臨床應(yīng)用廣泛的過繼免疫治療方法，DC是專職抗原遞呈細(xì)胞，惡性腫瘤患者DC細(xì)胞數(shù)量減少，其功能逐漸減退[14]；及時(shí)補(bǔ)充機(jī)體逐漸減少的DC細(xì)胞，能增強(qiáng)細(xì)胞的抗原遞呈能力以及T細(xì)胞活性，發(fā)揮顯著的抗腫瘤作用[15]；CIK細(xì)胞可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，對(duì)腫瘤病灶起到靶向性凋亡、抑制作用[16]。一般結(jié)腸癌患者常出現(xiàn)免疫功能抑制狀態(tài)，免疫功能越低，越容易出現(xiàn)“免疫漂移”改變，使機(jī)體抗腫瘤能力下降[17]。本研究觀察組治療后CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3+CD56+細(xì)胞高于對(duì)照組，Treg細(xì)胞低于對(duì)照組(P<0.05)。研究表明，結(jié)腸癌術(shù)后患者在常規(guī)化療時(shí)聯(lián)合DC-CIK治療，能誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)，刺激初始T細(xì)胞活化以及T淋巴細(xì)胞的增殖，糾正機(jī)體免疫缺陷。李國(guó)華等[18]研究也證實(shí)DC-CIK可提高結(jié)腸癌術(shù)后患者的免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)。

CEA是評(píng)價(jià)腫瘤的重要血清標(biāo)志物，檢測(cè)結(jié)腸癌復(fù)發(fā)有較高的敏感性，一般術(shù)中完全切除腫瘤后，CEA表達(dá)在術(shù)后6周逐漸恢復(fù)正常值，但有腫瘤殘留或復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移者，CEA表達(dá)降低，卻無法恢復(fù)正常[19-20]。本組研究中，觀察組CEA低于對(duì)照組，骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、神經(jīng)毒性反應(yīng)、皮膚癥狀不良反應(yīng)發(fā)生率低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌術(shù)后患者在常規(guī)化療時(shí)聯(lián)合DC-CIK治療，可降低CEA表達(dá)，說明細(xì)胞免疫治療能夠有效控制腫瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)，同時(shí)能減少化療藥物不良反應(yīng)的發(fā)生?？赡苁荄C-CIK聯(lián)合治療，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，積極對(duì)抗化療藥物帶來的毒副反應(yīng)，以此改善患者生存質(zhì)量。

綜上所述，完整結(jié)腸系膜切除術(shù)后DC-CIK誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞聯(lián)合奧沙利鉑、卡培他濱治療結(jié)腸癌，取得良好的臨床效果，能提高免疫功能，降低化療藥物不良反應(yīng)，臨床意義大，值得推廣應(yīng)用。