長鏈非編碼RNA MIAT 表達(dá)水平與心房顫動(dòng)導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

朱文書，張理想，游楊楊，徐 健

（1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院心內(nèi)科，安徽 合肥 230001；2.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科，安徽 合肥 230001）

心房顫動(dòng)（atrial fibrillation），簡稱房顫，是最常見的心律失常之一，近年來患病率和發(fā)病率在逐漸增加。房顫時(shí)心房有效收縮和舒張功能喪失會(huì)導(dǎo)致泵功能受損或喪失，可引起心力衰竭和動(dòng)脈栓塞等并發(fā)癥。導(dǎo)管消融術(shù)是房顫的主要治療方法，治療效果值得肯定，但主要缺點(diǎn)在于復(fù)發(fā)率高[1]。因此，積極探索房顫患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，有助于更好地篩查房顫患者，提高房顫消融手術(shù)的成功率。LncRNA 是大于200 nt 的調(diào)節(jié)性非編碼RNA，參與基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯等過程的調(diào)控[2]。多項(xiàng)研究從致病機(jī)理及分子調(diào)控機(jī)制方面對LncRNA 在房顫發(fā)生和發(fā)展中的作用進(jìn)行過探討，但是仍有許多未知。MIAT 作為一種新發(fā)現(xiàn)的LncRNA，已被證實(shí)在腫瘤患者中呈現(xiàn)高表達(dá)[3]，但與房顫患者的關(guān)系報(bào)道較少。本研究通過分析房顫患者外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 的表達(dá)水平，評估對于導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年7 月～2020 年6 月于安徽省立醫(yī)院心內(nèi)科行導(dǎo)管射頻消融術(shù)的住院患者150 例。所有患者均有明確的心電圖或動(dòng)態(tài)心電圖診斷依據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)年齡＜50 歲、瓣膜性或結(jié)構(gòu)性心臟疾病、射血分?jǐn)?shù)小于40%的心力衰竭、急性冠脈綜合征、甲亢、腫瘤、急慢性炎癥及肝腎功能不全。本研究經(jīng)安徽省立醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2 方法 入院后次日清晨抽取外周血2 ml 置于EDTA 抗凝管，并立即在4 ℃下保存。采用紅細(xì)胞裂解液提取白細(xì)胞，加入1 ml Trizol 試劑（康為世紀(jì)，貨號(hào)CW0580）后吹打混合，-80 ℃保存。其中紅細(xì)胞裂解液配制方法：取氯化銨（國藥試劑，批號(hào)20190814）82 g 加入1000 ml 純水配制成原液，然后取100 ml 原液加入900 ml 純水配制成紅細(xì)胞裂解液。使用高純度RNA 提取試劑盒（DNase I）（康為世紀(jì)，貨號(hào)CW0597）從白細(xì)胞中提取總RNA，使用分光光度計(jì)評估RNA 濃度和純度，通過瓊脂糖凝膠電泳判斷其完整性。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（康為世紀(jì)，商品貨號(hào)CW2569M）將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后進(jìn)行RT-PCR 反應(yīng)，并采用2-△△ct方法分析結(jié)果，用以表示LncRNA MIAT 在房顫患者外周血白細(xì)胞中的相對表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo) 術(shù)后每月隨訪1 次，共3 個(gè)月，隨訪終點(diǎn)為患者復(fù)發(fā)或者完成3 次隨訪，根據(jù)隨訪是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。比較兩組年齡、性別、高血壓與糖尿病病史、體重指數(shù)（BMI）、左心房與左心室內(nèi)徑、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（）表示，采用方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。計(jì)數(shù)資料以（%）表示，使用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。采用箱式圖表示不同組別之間差異，二元Logistic 回歸分析評估房顫患者臨床特征與導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，P＜0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 隨訪復(fù)發(fā)率為27.33%。兩組年齡、性別、高血壓、糖尿病、BMI、左心室內(nèi)徑、LVEF 及白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；復(fù)發(fā)組左心房內(nèi)徑大于未復(fù)發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較[，n（%）]

表1 兩組一般資料比較[，n（%）]

2.2 兩組外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 表達(dá)水平比較 復(fù)發(fā)組LncRNA MIAT 表達(dá)水平為（2.13±0.67），高于未復(fù)發(fā)組的（1.70±0.69），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見圖1。

圖1 復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 表達(dá)水平比較

2.3 導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的Logistic 回歸分析 將P＜0.1 指標(biāo)納入回歸分析，對BMI、左心房內(nèi)徑及LncRNA MIAT 表達(dá)水平進(jìn)行Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，左心房內(nèi)徑及LncRNA MIAT 表達(dá)水平是房顫導(dǎo)管射頻消融手術(shù)復(fù)律成功后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表2。

表2 導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的Logistic 回歸分析

3 討論

心房具有發(fā)生房顫的基質(zhì)是房顫發(fā)作和維持的必要條件，以心房有效不應(yīng)期的縮短和心房擴(kuò)張為特征的電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)是房顫持續(xù)的基質(zhì)，重構(gòu)變化可能有利于形成多發(fā)折返子波。雖然心房重構(gòu)的過程始終沒有闡明，但心房纖維化是結(jié)構(gòu)重構(gòu)的重要原因之一[4]，且房顫導(dǎo)管消融術(shù)的成功率與左心房心肌纖維化的程度顯著相關(guān)。LncRNA 參與基因表達(dá)和翻譯多個(gè)階段，如果發(fā)生突變或失調(diào)會(huì)引起相應(yīng)的疾病。房顫患者和正常人的外周血淋巴細(xì)胞中長鏈非編碼RNA 的表達(dá)特征存在明顯差異，這種差異主要表現(xiàn)在細(xì)胞粘附、炎癥、免疫反應(yīng)、細(xì)胞外基質(zhì)生成等病理生理過程[5]。MIAT 作為一種新型的疾病相關(guān)性LncRNA，與房顫之間的關(guān)系主要體現(xiàn)在心肌纖維化，通過不同的信號(hào)通路影響著下游基因的表達(dá)[6]。在心肌梗死小鼠模型中，研究人員發(fā)現(xiàn)MIAT 上調(diào)比較明顯，同時(shí)miR-24 下調(diào)以及TGF-β1 上調(diào)，并伴有心臟間質(zhì)纖維化,可以通過siRNA 抑制內(nèi)源性MIAT 以改善心臟功能、減少心臟纖維化[7]。LncRNA MIAT 通過負(fù)調(diào)控miR-29a 的表達(dá)，參與肥厚型心肌病（HCM）心肌纖維化的發(fā)展[8]。房顫患者外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 高度表達(dá)，miR-133a-3p 顯著降低，在大鼠心房組織中有相似的表達(dá)特點(diǎn)。MIAT 的下調(diào)通過靶向miR-133a-3p 可增加心房有效不應(yīng)期（AERP），減少房顫持續(xù)時(shí)間和心肌細(xì)胞凋亡，同時(shí)減輕心肌纖維化程度[9]。在本研究中，在對房顫患者行導(dǎo)管消融手術(shù)復(fù)律成功后進(jìn)行隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)組房顫患者外周血白細(xì)胞LncRNA MIAT 表達(dá)水平顯著高于未復(fù)發(fā)組患者，初步說明LncRNA MIAT 表達(dá)水平與復(fù)發(fā)之間存在聯(lián)系。這也提示因?yàn)樾姆坷w維化程度不同，患者M(jìn)IAT表達(dá)水平存在差異，可以用來評估患者的預(yù)后。

炎癥與房顫的發(fā)生和維持密切相關(guān)，可能來自與房顫發(fā)生相關(guān)的疾病，諸如高血壓、肥胖、心力衰竭等[10]。白細(xì)胞作為炎癥及免疫反應(yīng)的重要組成部分，在房顫中具有重要作用。多種促炎細(xì)胞因子和激素可以增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的活化，導(dǎo)致心肌組織中浸潤的中性粒細(xì)胞增多，從而促進(jìn)房顫的結(jié)構(gòu)重塑[11]。心房纖維化與年齡有關(guān)，并且房顫患者的心房組織中有大量白細(xì)胞浸潤，促炎細(xì)胞因子如VEGF 和CCL-2/MCP-1 表達(dá)更高[12]。超重與肥胖明顯增加普通人群新發(fā)房顫的風(fēng)險(xiǎn)，隨著BMI 水平的增加，新發(fā)房顫風(fēng)險(xiǎn)也在逐級增加[13]。在超重及肥胖患者中，體重控制與房顫射頻消融術(shù)后房顫復(fù)發(fā)率低具有相關(guān)性[14]。研究表明房顫與左心室纖維化存在密切關(guān)系[15]。存在兩種可能性：一是心室纖維化是由房顫及心動(dòng)過速心肌病導(dǎo)致；二是由于其他類型的心臟病導(dǎo)致心肌纖維化，引起左心室舒張功能障礙，使左心房血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致房顫。本研究兩組年齡、性別、高血壓、糖尿病、BMI、左心室內(nèi)徑、LVEF 及白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），排除上述與房顫相關(guān)指標(biāo)對于研究結(jié)果的影響。但是復(fù)發(fā)組左心房內(nèi)徑大于未復(fù)發(fā)組（P＜0.05）。本研究患者排除了結(jié)構(gòu)性心臟病，雖然部分患者合并高血壓，但兩組高血壓指標(biāo)間比較無明顯差異，心房增大可考慮為房顫本身的影響。既往研究顯示，左心房內(nèi)徑是復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)測因子，但預(yù)測的準(zhǔn)確性不高。在左心房內(nèi)徑等因素的基礎(chǔ)上增加血液學(xué)指標(biāo)，可能有助于提高預(yù)測的準(zhǔn)確性。本研究多因素回歸分析顯示，左心房內(nèi)徑和LncRNA MIAT 表達(dá)水平是房顫復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT 表達(dá)水平是房顫術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素增加了對房顫復(fù)發(fā)治療預(yù)后判斷的依據(jù)，可能有助于提高復(fù)律患者選擇的準(zhǔn)確性。

總之，外周血白細(xì)胞LncRNA MIAT 表達(dá)水平與房顫導(dǎo)管消融術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)，LncRNA MIAT表達(dá)水平及左心房內(nèi)徑是房顫射頻消融術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。