新癀片外用給藥對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛模型的有效成分研究

侯紅平，關(guān)斌，陳西翌，高云航，詹志學(xué)，李晗，陳曉琳，陳騰飛，南淑華，葉祖光，張廣平

新癀片是在傳統(tǒng)方片仔癀基礎(chǔ)上研制的中西藥復(fù)方制劑，西藥主要為吲哚美辛，中藥包括人工牛黃、珍珠層粉、腫節(jié)風(fēng)、豬膽汁膏、肖梵天花、水牛角濃縮粉、三七及紅曲等，具有清熱解毒、活血化瘀及消腫止痛的功效，主要用于熱毒瘀血所致的咽喉腫痛、牙痛、痹通、脅痛、黃疸和無(wú)名腫痛等[1]。目前，臨床上也外用于內(nèi)科、喉科、骨科、婦科和男科等。藥理研究顯示，新癀片皮膚外涂給藥具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛效果[2]，但鎮(zhèn)痛效果是新癀片中的吲哚美辛起作用，還是中藥組分起作用仍無(wú)定論。為此，本研究將新癀片拆分為等劑量的吲哚美辛及缺吲哚美辛的中藥組分，進(jìn)行小鼠鎮(zhèn)痛模型的研究，為新癀片鎮(zhèn)痛效果的有效成分研究提供參考和依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)動(dòng)物：ICR小鼠100只。(2)藥品：新癀片，淡棕灰色至棕色片劑，由廈門(mén)中藥廠有限公司提供，批號(hào)180327；陽(yáng)性藥吲哚美辛凝膠，黃色凝膠狀軟膏，購(gòu)于興和株式會(huì)社，批號(hào)CDU7S；吲哚美辛，白色粉末，由廈門(mén)中藥廠有限公司提供，批號(hào)180111；新癀片全方缺吲哚美辛群藥，淡棕灰色粉末，由廈門(mén)中藥廠有限公司提供，批號(hào)181011-12-B；醋酸，購(gòu)于北京化工廠，批號(hào)20160505。(3)儀器：RCY-2熱板測(cè)痛儀(上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)儀器發(fā)展有限公司生產(chǎn))，Sartorius BSA 3202S-CW天平(德國(guó))，Sartorius BSA 8201-CW天平(德國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 組別設(shè)置及劑量設(shè)計(jì)：模型組只造模不給藥；陽(yáng)性對(duì)照組給予吲哚美辛凝膠0.15 ml/只；給藥組給予新癀片(0.32 g/ml)0.2 ml/只；全方中等劑量吲哚美辛組給予新癀片中等劑量吲哚美辛(6.8 mg/ml)0.2 ml/只；全方缺吲哚美辛群藥組給予新癀片中缺吲哚美辛群藥(0.31 g/ml)0.2 ml/只。給藥面積3 cm×2 cm。各組均將相應(yīng)藥物均勻涂抹在小鼠背部，按摩40圈，促進(jìn)吸收，覆蓋紗布，醫(yī)用膠帶固定。連續(xù)給藥3 d。

1.2.2 扭體實(shí)驗(yàn)：ICR小鼠50只，雌雄各半，17～19 g，檢疫1 d，適應(yīng)2 d后，隨機(jī)分為5組：模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、給藥組、全方中等劑量吲哚美辛組、全方缺吲哚美辛群藥組，每組10只。模型組只造模不給藥，其余各組給藥后40 min造模。造模方式：腹腔注射1%冰醋酸生理鹽水溶液0.1 ml/10 g。給予醋酸后，立即觀察并記錄小鼠出現(xiàn)扭體的潛伏期和20 min內(nèi)小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)。20 min內(nèi)未出現(xiàn)扭體的動(dòng)物，潛伏期記為20 min。

1.2.3 舔足實(shí)驗(yàn)：ICR小鼠50只，雌性，18～20 g，檢疫1 d，適應(yīng)2 d后，分組給藥前，將動(dòng)物放在預(yù)熱至55 ℃的熱板測(cè)痛儀上，以小鼠舔后足反應(yīng)的潛伏期為痛閾指標(biāo)，測(cè)定基礎(chǔ)痛閾值，將反應(yīng)潛伏期<5 s、>40 s和出現(xiàn)跳躍反應(yīng)者剔除。分組給藥前測(cè)定2次基礎(chǔ)痛閾值，以2次的平均值將動(dòng)物分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、給藥組、全方中等劑量吲哚美辛組、全方缺吲哚美辛組，每組10只。模型組只造模不給藥，其余各組連續(xù)給藥3 d，最后一次給藥后30 min、60 min、120 min、180 min和240 min測(cè)定痛閾值，>60 s者以60 s計(jì)。

2 結(jié) 果

2.1 扭體實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、給藥組和全方中等劑量吲哚美辛組的潛伏期均延長(zhǎng)(P<0.05)，扭體次數(shù)降低(P<0.05)。而全方缺吲哚美辛群藥組潛伏期較模型組有所延長(zhǎng)，扭體次數(shù)有所減少，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 新癀片扭體實(shí)驗(yàn)的有效成分

2.2 舔足實(shí)驗(yàn) 各組之間的基礎(chǔ)痛閾值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。給藥后30 min到給藥后240 min，陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組的痛閾值較模型組有所延長(zhǎng)(P<0.05)。而全方中等劑量吲哚美辛組和全方缺吲哚美辛群藥組的痛閾值與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 新癀片舔足實(shí)驗(yàn)的有效成分

3 討 論

新癀片中的吲哚美辛屬非甾體抗炎藥，現(xiàn)代藥理研究表明，非甾體抗炎藥主要是通過(guò)抑制花生四烯酸代謝過(guò)程中的環(huán)氧酶，減少前列腺素合成，從而發(fā)揮抗炎作用[3]。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，單用吲哚美辛可能造成胃腸道、肝臟及腎臟方面的毒性反應(yīng)[4-8]。

新癀片中的中藥組分能明顯改善和提高吲哚美辛原粉的溶出度，使吲哚美辛的吸收延緩或降低，對(duì)吲哚美辛有非常顯著的減毒作用[4-6,9-10]。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，新癀片中的牛黃具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、解熱及保肝的作用；珍珠層粉具有抗炎、抗疲勞的作用；腫節(jié)風(fēng)具有抗炎、抗腫瘤等作用；豬膽汁膏有抗菌、抗炎、抗癌等作用;肖梵天花具有鎮(zhèn)痛、消炎等作用；水牛角濃縮粉具有強(qiáng)心、抗炎及抗感染的作用；三七具有止血、抗炎等作用；紅曲具有降血壓、降血糖及抗疲勞等作用。多味方藥相互作用，使其具有清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛的功效，臨床上除用于熱毒瘀血所致的疼痛外，也多用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎[11]。

本研究中，將新癀片研磨成粉經(jīng)皮膚外用給藥，通過(guò)小鼠鎮(zhèn)痛模型探討吲哚美辛和中藥組分的鎮(zhèn)痛效果。扭體實(shí)驗(yàn)顯示，與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、給藥組和全方中等劑量吲哚美辛組的潛伏期均延長(zhǎng)，扭體次數(shù)降低。而全方缺吲哚美辛群藥組潛伏期較模型組有所延長(zhǎng)，扭體次數(shù)有所減少，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。舔足實(shí)驗(yàn)顯示，給藥后30 min到給藥后240 min，陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組的痛閾值較模型組有所延長(zhǎng)。而全方中等劑量吲哚美辛組和全方缺吲哚美辛群藥組的痛閾值較模型組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。扭體實(shí)驗(yàn)和舔足實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有所偏差，分析認(rèn)為小鼠熱板法適合評(píng)價(jià)中樞鎮(zhèn)痛藥，而小鼠扭體實(shí)驗(yàn)適用于外周鎮(zhèn)痛藥研究，因此新癀片中中藥成分對(duì)二者的作用有所不同。通過(guò)上述兩個(gè)實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為新癀片中的吲哚美辛和中藥成分具有協(xié)同作用，共同參與新癀片鎮(zhèn)痛的調(diào)節(jié)作用，與先前的研究報(bào)道一致[12-15]。

綜上所述，新癀片中的吲哚美辛和中藥成分之間相互作用，相互協(xié)同，共同參與新癀片外用給藥對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用。