• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    富硒酵母干預(yù)對高脂小鼠GRP78基因表達的影響

    2021-03-03 01:29:46吳谷豐龔順民劉麗君王凱旋李青連郝澍
    安徽農(nóng)學(xué)通報 2021年3期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激高脂

    吳谷豐 龔順民 劉麗君 王凱旋 李青連 郝澍

    摘 要:目的:探討富硒酵母干預(yù)對高脂大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因GRP78表達的影響。方法:選取40只6周齡小鼠作為研究對象,建立高脂小鼠模型,并隨機分為4組(a:對照組,b:高脂日糧組,c:高脂日糧+低劑量富硒酵母組,d:高脂日糧+高劑量富硒酵母組),觀察肝臟脂肪變性程度,檢測肝臟脂質(zhì)氧化MDA水平和GRP78基因的mRNA表達水平。結(jié)果:高脂日糧可以誘發(fā)小鼠肝臟指數(shù)增大和脂肪變性,飼喂富硒酵母后,小鼠的肥胖和肝臟脂肪變性得到了明顯改善;高脂日糧組與其他組相比肝臟中MDA和GRP78基因的表達水平顯著升高,高劑量硒酵母對高脂誘發(fā)的MDA升高和GRP78基因的表達水平均有拮抗作用。結(jié)論:硒能逆轉(zhuǎn)高脂小鼠的肝臟損傷,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路在其中發(fā)揮了作用,該應(yīng)激可能是通過提高氧化水平而誘導(dǎo)的。

    關(guān)鍵詞:高脂;富硒酵母;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;GRP78基因

    中圖分類號 R332文獻標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731(2021)03-0012-04

    Effect of Selenium Enriched Yeast Intervention on GRP78 Gene Expression in High-fat Mice

    WU Gufeng1 et al.

    (1School of Pharmacy and Life Science,Jiujiang University,Jiujiang 332000,China)

    Abstract: Objective:To investigate the effect of selenium enriched yeast intervention on the endoplasmic reticulum stress gene GRP78 expression in high-fat rats. Methods:A total of 40 mice were selected as the research object to establish high-fat mouse model, and randomly divided into 4 groups (a: control group, b: high-fat diet group, c: high-fat diet + low dose of selenium enriched yeast group, d: high-fat diet + high dose group of selenium enriched yeast). Then, the degrees of liver steatosis were observed, and the liver MDA level and lipid oxidation of GRP78 gene mRNA expression level were detected. Results:High-fat diet could induce the increase of liver index and alleviate steatosis in mice. Compared with other groups, the expression levels of MDA and GRP78 genes in liver were significantly increased, and the high-dose selenium enriched yeast had an inhibitive effect on increase of MDA and the expression levels of GRP78 genes. Conclusion:Selenium can reverse liver injury in high-fat mice, and endoplasmic reticulum stress signaling pathway plays a role in it, which may be induced by increased oxidation levels.

    Key words: High-fat; Selenium enriched yeast; Endoplasmic reticulum stress; GRP78 gene

    近些年來,隨著人們生活水平的提高,心血管疾病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,并已成為嚴(yán)重威脅著我國居民健康的重大疾病[1]。目前,誘發(fā)心血管疾病的病因較多且較復(fù)雜,其中高脂飲食引發(fā)的血脂異常是導(dǎo)致心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的主要危險因素之一[2,3]。據(jù)國家心血管病中心統(tǒng)計顯示,截至2018年,我國血脂異常人數(shù)已超過4億人。研究表明,高脂飲食可誘導(dǎo)組織與細胞內(nèi)產(chǎn)生并累積大量的自由基,從而引起氧化應(yīng)激,對組織和細胞造成損傷,除此之外還能引起炎性反應(yīng)和胰島素抵抗[4,5]。脂肪組織分泌的促炎性細胞因子能夠激活下丘腦垂體腎上腺軸,使得系統(tǒng)和代謝之間形成惡性循環(huán)。

    GRP78(Glucose regulated protein,GRP78)是一種分子質(zhì)量為78ka的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白,是細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的核心調(diào)節(jié)因子,傳統(tǒng)認(rèn)為其主要功能為結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+、維持細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)定性。近年來,更多的研究發(fā)現(xiàn)GRP78在腫瘤的發(fā)生中具有重要的作用,與腫瘤細胞的存活、增殖、腫瘤治療的敏感性密切相關(guān)[6]。

    硒是一種人與動物所必需的微量礦物質(zhì)元素,并通過硒代半胱氨酸合成含硒蛋白而發(fā)揮其生理功能。目前,國內(nèi)外研究重點主要放在營養(yǎng)水平或一定范圍內(nèi)高于營養(yǎng)水平的硒尤其是有機硒具有調(diào)節(jié)機體膽固醇等生化指標(biāo)的改善,而硒能否調(diào)控高脂血癥帶來內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的研究則較少。江西省作為富硒地區(qū),富硒產(chǎn)品的研發(fā)具有十分廣闊的前景。富硒酵母是一種高效、安全的硒補充劑。為此,本研究探討了富硒酵母對高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肥胖的逆轉(zhuǎn)作用,并初步通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子的表達揭示其在抗高脂血癥中發(fā)揮的作用,以期為江西省富硒產(chǎn)品的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)和參考。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑 高脂日糧配方:基礎(chǔ)日糧中添加20%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇和0.2%膽酸鈉。富硒酵母(硒含量2000ppm)購于安琪酵母有限公司(生產(chǎn)批號:20141021-02),相應(yīng)檢測試劑盒購于碧云天生物公司??鼓齽╄蹤此徕c購于自索萊寶公司。RNA提取試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、RT-PCR定量分析相關(guān)試劑SYBR Green購于Takara公司。

    1.2 試驗設(shè)計 清潔級小鼠(18.5±0.54g,6周齡,雌雄各半),購于南昌大學(xué)實驗動物中心。小鼠適應(yīng)7d后隨機分成4組,每組10只。整個試驗期間小鼠自由飲水和攝取日糧,每7d稱重1次,具體分組如下:a:對照組(飼喂常規(guī)日糧);b:高脂日糧組(飼喂高脂日糧);c:高脂日糧+低劑量富硒酵母組(按照小鼠體重2μg/kg劑量經(jīng)口灌胃富硒酵母);d:高脂日糧+高劑量富硒酵母組(按照小鼠體重8μg/kg劑量經(jīng)口灌胃富硒酵母)。

    1.3 樣品處理及測定項目 第7周結(jié)束,眼球采血,3000r離心后獲得血清。頸椎脫臼處死小鼠,解剖收集肝臟后稱重。一部分浸泡于福爾馬林溶液中用于做病理切片,另一部分用PBS沖洗干凈后保存于?70℃冰箱中。

    1.3.1 病理切片(HE染色) 取部分肝組織,經(jīng)水洗、脫水透明、浸蠟、包埋,得到肝組織石蠟切片,采用顯微鏡觀察不同處理條件下組織細胞形態(tài)學(xué)的變化。

    1.3.2 抗氧化水平測定 MDA檢測按照測定試劑盒說明書操作,使用酶標(biāo)儀測定肝臟中MDA的含量。

    1.3.3 相對熒光定量PCR 肝組織中的GRP78的mRNA水平用相對熒光定量PCR進行測定。用RNAiso Plus(TaKaRa)試劑盒,根據(jù)說明書從冰凍的組織中提取總RNA。根據(jù)Oligo dT primers和RNase M-MLV(TaKaRa,China)說明書取1μg總RNA反轉(zhuǎn)成cDNA。小鼠GRP78的引物序列如表1所示。用Prism Step-One Plus系統(tǒng)(Applied Biosystems,美國)進行PCR反應(yīng),反應(yīng)體系見表1。以GAPDH為內(nèi)參用2?ΔΔCt法計算mRNA相對水平。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同處理對小鼠肝臟脂肪的影響 由圖1A可知,從第4周起,高脂日糧組的小鼠體重開始顯著高于對照組(P<0.05)。圖1B是各組小鼠的肝臟指數(shù)。經(jīng)過42d的高脂飼料誘導(dǎo),與對照組相比,高脂組的肝臟指數(shù)極顯著升高(P<0.01),灌胃低劑量硒酵母干預(yù)后,肝臟指數(shù)顯著下降(P<0.05),灌胃高劑量富硒酵母后,肝臟指數(shù)極顯著下降(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。由圖1C可知,40倍鏡下觀察,HE染色后的高脂飼料組對比對照組,存在明顯的脂肪變性;而加入富硒酵母干預(yù)后,脂肪變性得到明顯改善。由圖1D可知,肉眼所見下,高脂飼料組的小鼠肝臟明顯變大變黃,呈現(xiàn)出脂肪肝的特性。

    2.2 富硒酵母對高脂飲食小鼠肝臟組織中氧化水平的影響 如圖2可知,高脂日糧組與其他組相比肝臟中MDA極顯著升高(P<0.01),高劑量硒酵母對高脂誘發(fā)的MDA升高有拮抗作用(P<0.05)。

    2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達變化 由圖3可知,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因GRP78的表達,對照組與高脂日糧組、高脂日糧+低劑量富硒酵母組、存在顯著差異(P<0.05);且加富硒酵母干預(yù)后,低劑量和高劑量均可以降低GRP78的表達(P<0.05)。

    3 討論

    硒是一種人類與動物所必需的微量元素,含硒蛋白在脂蛋白和膽固醇代謝中具有重要的作用[7,8]。Larvie等研究表明,缺硒與肥胖癥呈顯著正相關(guān),超重/肥胖個體中硒蛋白SEPP1濃度和GPX活性顯著低于正常體重個體[9]。流行病學(xué)研究表明,高劑量的血清硒濃度可以提升血脂水平的效果。對1042名英國成人進行橫斷面分析發(fā)現(xiàn),血漿硒水平的升高常伴有TC和LDL的下降[10]。因此,適量地補硒可以相對有效地降低機體的血脂水平。

    硒是一種非可再生資源,主要來源于富硒土壤中種植的植物。然而,中國絕大多數(shù)地區(qū)屬于缺硒或者貧硒土壤,且食物中50%~75%的硒含量會在日常的烹飪中損耗,因此,應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對食品中的硒進行生物強化就顯得尤為重要[11]。先前硒通常是通過亞硒酸鈉添加到食物中,進一步研究證實,有機硒的吸收利用率高于無機硒且毒副作用更低,更適合作為膳食補充劑。酵母菌可快速增長,便于培養(yǎng),且有積累硒的高容量,因此,酵母菌成為添加有機硒的最普遍使用的且研究最早的載體[12,13],其主要產(chǎn)物是硒蛋氨酸。

    遺傳或環(huán)境損傷引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,激活未折疊蛋白反應(yīng)[14]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與眾多人類疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有一個標(biāo)志性因子:GRP78,該因子可以啟動未折疊蛋白反應(yīng)、調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+的穩(wěn)定、對抗細胞凋亡并促進腫瘤的內(nèi)藥性等[15]。研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是導(dǎo)致脂肪組織功能紊亂的重要原因之一[16.17],因此,探討調(diào)節(jié)脂肪組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)的有效措施對于改善脂肪組織功能紊亂具有重要的意義。

    飼喂高脂日糧是建立小鼠高脂血癥模型的經(jīng)典方法,主要由于攝入過多脂肪從而導(dǎo)致能量攝取過量,最終引起體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂。本研究結(jié)果顯示,同時飼喂富硒酵母后,小鼠的肥胖和肝臟脂肪變性得到了明顯改善,且與硒濃度的提高成正相關(guān),提示有機硒是一種安全的逆轉(zhuǎn)高脂的添加劑。灌胃硒酵母干預(yù)后,肝臟組織中MDA含量下降,證明硒酵母對機體具有良好的抗氧化調(diào)節(jié)作用。利用熒光定量PCR法來測定組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因GRP78的mRNA相對水平,證明高脂可以誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,該應(yīng)激可能是通過提高氧化水平而誘導(dǎo)的。

    綜上所述,硒能逆轉(zhuǎn)高脂小鼠的肝臟損傷,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路在其中發(fā)揮了作用。

    參考文獻

    [1]雷洪強,徐琳,邱健,等.心血管疾病患者心臟康復(fù)前后腰圍與器官損害的相關(guān)性[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2016,36(1):83-89.

    [2]Y Li,Y Mu,Q Ji,et al. Hypoglycaemia,Abnormal Lipids,and Cardiovascular Disease among Chinese with Type 2 Diabetes[J]. Biomed Res Int.,2015,2015:862896.

    [3]Aviram,M.,Hyperlipidaemia and cardiovascular disease:inflammation and oxidative stress in diabetic patients[J].Curr Opin Lipidol,2009, 20(3):258-259.

    [4]Fentoglu,O.,et al.,Pro-inflammatory cytokine levels in association between periodontal disease and hyperlipidaemia[J].J Clin Periodontol,2011,38(1):8-16.

    [5]Zhang,P.,et al.,Effects of hyperlipidaemia on plasma apolipoprotein M levels in patients with type 2 diabetes mellitus:an independent case-control study[J]. Lipids Health Dis.,2016,15(1):158.

    [6]管海濤,代志軍,王中衛(wèi),等.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP78在乳腺癌中的表達及其預(yù)后意義[J].國際外科學(xué)雜志,2016,43(3):157-162.

    [7]Schomburg L. Dietary Selenium and Human Health[J].Nutrients,2016,9(1).

    [8]Adadi P,Barakova N V,Muravyov K Y,et al. Designing selenium functional foods and beverages:A review[J].Food Res Int,2019,120:708-725.

    [9]Larvie D Y,Doherty J L,Donati G L,et al. Relationship between Selenium and Hematological Markers in Young Adults with Normal Weight or Overweight/Obesity[J].Antioxidants (Basel),2019,8(10):463.

    [10]Lawson K L,Jonk Y,O'connor H,et al. The impact of Telephonic Health Coaching on Health Outcomes in a High-risk Population[J].Glob Adv Health Med.,2013,2(3):40-47.

    [11]Higgs D J,Morris V C,Levander O A. Effect of cooking on selenium content of foods[J].J Agric Food Chem,1972,20(3):678-680.

    [12]Wrobel J K,Seelbach M J,Chen L,et al. Supplementation with selenium-enriched yeast attenuates brain metastatic growth[J].Nutr Cancer,2013,65(4):563-570.

    [13]Zhang Z H,Wen L,Wu Q Y,et al. Long-Term Dietary Supplementation with Selenium-Enriched Yeast Improves Cognitive Impairment,Reverses Synaptic Deficits,and Mitigates Tau Pathology in a Triple Transgenic Mouse Model of Alzheimer's Disease[J].J Agric Food Chem.,2017,65(24):4970-4979.

    [14]Bahar E,Kim H,Yoon H. ER Stress-Mediated Signaling:Action Potential and Ca2+ as Key Players[J].Int J Mol Sci.,2016,17(9):1558.

    [15]Suyama K,Watanabe M,Sakabe K,et al. Overexpression of GRP78 protects glial cells from endoplasmic reticulum stress[J].Neurosci Lett.,2011,504(3):271-276.

    [16]Willy,J.A.,et al.,CHOP links endoplasmic reticulum stress to NF-kappaB activation in the pathogenesis of nonalcoholic steatohepatitis[J]. Mol Biol Cell,2015,26(12):2190-2204.

    [17]Hammad,S.,The CHOP conundrum:controversial discussion about the role of endoplasmic reticulum stress in hepatotoxicity[J].Arch Toxicol.,2014,88(8):1477-1478.

    (責(zé)編:張宏民)

    基金項目:江西省科技廳,青年科學(xué)基金資助項目,20202BABL216042;江西省教育廳,科技項目,GJJ161081;九江學(xué)院,教學(xué)改革研究課題,XJJGYB-19-13;江西省衛(wèi)生廳,江西省衛(wèi)生計生委中醫(yī)藥科研課題,2017B072。

    作者簡介:吳谷豐(1999—),男,本科生。 *通訊作者? 收稿日期:2020-12-18

    猜你喜歡
    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激高脂
    高脂血標(biāo)本對臨床檢驗項目的干擾及消除對策
    懷孕期間母親高脂飲食可能影響嬰兒腸道的微生物組
    白蘆藜醇對糖尿病小鼠腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響
    蚯蚓活性組分對四氯化碳誘導(dǎo)小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所致急性肝損傷的保護作用
    原花青素通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)對H9C2心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用
    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在腎臟缺血再灌注和環(huán)孢素A損傷中的作用及研究進展
    運動降低MG53表達及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    高脂飲食誘導(dǎo)大鼠生精功能障礙
    丹蛭降糖膠囊對肥胖大鼠骨骼肌IRE1α—JNK信號通路的干預(yù)效應(yīng)
    硫化氫抑制葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78減輕6—OHDA誘導(dǎo)的PC12細胞損傷
    波多野结衣巨乳人妻| 国内精品久久久久久久电影| 女性生殖器流出的白浆| 男人舔女人的私密视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 成人国语在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 少妇 在线观看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产男靠女视频免费网站| 成人永久免费在线观看视频| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 99国产精品免费福利视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 女性被躁到高潮视频| 日韩欧美国产在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 久久 成人 亚洲| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久久久久久久中文| 国产成人精品久久二区二区91| 激情在线观看视频在线高清| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩大码丰满熟妇| 国产人伦9x9x在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品二区激情视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| av电影中文网址| 真人做人爱边吃奶动态| 色播在线永久视频| www.熟女人妻精品国产| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美精品啪啪一区二区三区| 黄片大片在线免费观看| 亚洲av成人av| 国产亚洲精品一区二区www| 一区二区三区精品91| av在线播放免费不卡| 午夜影院日韩av| 欧美日本亚洲视频在线播放| 韩国精品一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩国内少妇激情av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产激情久久老熟女| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲av电影在线进入| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产男靠女视频免费网站| 黄色 视频免费看| 国产亚洲av高清不卡| 香蕉久久夜色| 精品欧美一区二区三区在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美一级毛片孕妇| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 两个人免费观看高清视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久这里只有精品19| 女警被强在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产高清有码在线观看视频 | 韩国av一区二区三区四区| 在线观看午夜福利视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 午夜精品久久久久久毛片777| 波多野结衣高清无吗| 国产人伦9x9x在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品综合久久久久久久免费 | 精品国产一区二区久久| 99国产精品免费福利视频| 亚洲精品在线观看二区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一本大道久久a久久精品| 国产熟女xx| 久久国产精品人妻蜜桃| 女人被狂操c到高潮| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜免费激情av| a在线观看视频网站| 一区二区三区精品91| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 搡老妇女老女人老熟妇| a级毛片在线看网站| 十八禁人妻一区二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 欧美乱码精品一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产av一区在线观看免费| 正在播放国产对白刺激| 精品国产乱子伦一区二区三区| av福利片在线| 男女之事视频高清在线观看| 国产av在哪里看| 在线观看舔阴道视频| 色尼玛亚洲综合影院| a在线观看视频网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲国产欧美网| av电影中文网址| 久热爱精品视频在线9| 又紧又爽又黄一区二区| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧美激情在线| 午夜两性在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲欧美激情在线| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲专区字幕在线| 午夜日韩欧美国产| 91精品国产国语对白视频| 国产激情欧美一区二区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 男人操女人黄网站| 最近最新免费中文字幕在线| av在线天堂中文字幕| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 黄片小视频在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| 国产真人三级小视频在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 妹子高潮喷水视频| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲五月色婷婷综合| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 韩国精品一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 大型黄色视频在线免费观看| 丁香欧美五月| 欧美在线黄色| 久久国产乱子伦精品免费另类| 丝袜在线中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美性长视频在线观看| 精品国产国语对白av| 国产亚洲精品av在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久精品91蜜桃| 免费看a级黄色片| 午夜影院日韩av| 国产又色又爽无遮挡免费看| 宅男免费午夜| 视频区欧美日本亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 一级片免费观看大全| 大香蕉久久成人网| 精品熟女少妇八av免费久了| 首页视频小说图片口味搜索| 高清在线国产一区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 黄色成人免费大全| 欧美一区二区精品小视频在线| 在线观看舔阴道视频| 午夜久久久久精精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 日韩有码中文字幕| av在线天堂中文字幕| 99在线人妻在线中文字幕| 女性生殖器流出的白浆| 丝袜美腿诱惑在线| 人成视频在线观看免费观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 很黄的视频免费| 中文字幕最新亚洲高清| 一级毛片高清免费大全| 又紧又爽又黄一区二区| 男人舔女人的私密视频| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲无线在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 丝袜美足系列| 999久久久精品免费观看国产| 少妇粗大呻吟视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 变态另类丝袜制服| 国产一区二区三区综合在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美中文日本在线观看视频| 免费观看精品视频网站| 国产成人精品久久二区二区免费| 一级黄色大片毛片| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲激情在线av| 国产精品精品国产色婷婷| 一区在线观看完整版| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 日日夜夜操网爽| 午夜激情av网站| 涩涩av久久男人的天堂| 久久香蕉国产精品| 一本久久中文字幕| www.精华液| 香蕉久久夜色| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 天堂影院成人在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品乱码久久久久久99久播| 人成视频在线观看免费观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 两个人看的免费小视频| 手机成人av网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲av第一区精品v没综合| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久热在线av| 午夜激情av网站| 午夜福利欧美成人| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 两个人免费观看高清视频| 国产精品精品国产色婷婷| 99久久国产精品久久久| 欧美大码av| 成年版毛片免费区| 无遮挡黄片免费观看| 国产三级黄色录像| 桃红色精品国产亚洲av| www.熟女人妻精品国产| 757午夜福利合集在线观看| 精品久久久久久,| 免费观看人在逋| 夜夜夜夜夜久久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 一区二区三区高清视频在线| 精品人妻1区二区| 久久久久久国产a免费观看| 91国产中文字幕| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美成人午夜精品| 午夜福利欧美成人| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| www.999成人在线观看| 日韩av在线大香蕉| 91国产中文字幕| 亚洲成av人片免费观看| 在线av久久热| 日本一区二区免费在线视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产成人精品久久二区二区免费| 色哟哟哟哟哟哟| av欧美777| av超薄肉色丝袜交足视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 午夜成年电影在线免费观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜福利18| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产欧美日韩一区二区精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国语自产精品视频在线第100页| 啦啦啦免费观看视频1| 男女之事视频高清在线观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲av成人一区二区三| 自线自在国产av| 亚洲人成77777在线视频| 少妇的丰满在线观看| 色老头精品视频在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 淫秽高清视频在线观看| 三级毛片av免费| 色综合婷婷激情| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 一进一出好大好爽视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 成人18禁在线播放| 妹子高潮喷水视频| 变态另类丝袜制服| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品九九99| 久久狼人影院| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久伊人香网站| 国产乱人伦免费视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲人成电影观看| 久久伊人香网站| 黄色成人免费大全| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久青草综合色| 免费在线观看影片大全网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品久久国产高清桃花| 九色国产91popny在线| 国产一级毛片七仙女欲春2 | av欧美777| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 色哟哟哟哟哟哟| 国产三级黄色录像| 亚洲成国产人片在线观看| 99国产精品一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 伦理电影免费视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲av成人av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 一区二区三区精品91| 国产高清videossex| 激情视频va一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费在线观看黄色视频的| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲美女黄片视频| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美大码av| 999精品在线视频| 90打野战视频偷拍视频| 久久草成人影院| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品一区二区三区四区久久 | 露出奶头的视频| 十分钟在线观看高清视频www| 女性被躁到高潮视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美乱妇无乱码| 真人做人爱边吃奶动态| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 18禁国产床啪视频网站| a级毛片在线看网站| 免费在线观看日本一区| 无遮挡黄片免费观看| 在线观看午夜福利视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 99精品久久久久人妻精品| 久久久久久久久中文| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 无遮挡黄片免费观看| 午夜福利在线观看吧| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费看十八禁软件| 真人做人爱边吃奶动态| 搡老岳熟女国产| 亚洲成av人片免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲国产看品久久| a在线观看视频网站| 亚洲国产欧美网| 婷婷六月久久综合丁香| 禁无遮挡网站| 热re99久久国产66热| 成人三级黄色视频| 久久精品成人免费网站| 中文字幕高清在线视频| 丝袜在线中文字幕| 天天添夜夜摸| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 90打野战视频偷拍视频| 多毛熟女@视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 波多野结衣巨乳人妻| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久青草综合色| 搡老岳熟女国产| 久9热在线精品视频| 97人妻天天添夜夜摸| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品国产区一区二| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产亚洲欧美精品永久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 满18在线观看网站| 日日夜夜操网爽| 国产一区在线观看成人免费| 又大又爽又粗| 男男h啪啪无遮挡| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美性长视频在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av熟女| 91精品国产国语对白视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 在线视频色国产色| 青草久久国产| www日本在线高清视频| 长腿黑丝高跟| 婷婷丁香在线五月| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| av视频在线观看入口| 黄色a级毛片大全视频| 美女午夜性视频免费| 日韩有码中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久中文看片网| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产视频一区二区在线看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人精品中文字幕电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品九九99| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 长腿黑丝高跟| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 麻豆国产av国片精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91成人精品电影| 一级作爱视频免费观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| av在线天堂中文字幕| 大码成人一级视频| 国产精品1区2区在线观看.| 黑丝袜美女国产一区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 精品福利观看| 黄色视频,在线免费观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 99re在线观看精品视频| aaaaa片日本免费| 老汉色∧v一级毛片| av超薄肉色丝袜交足视频| 香蕉久久夜色| 国产一区二区激情短视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品一区二区在线不卡| 99re在线观看精品视频| av片东京热男人的天堂| 999精品在线视频| 中国美女看黄片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影 | 久久久国产成人精品二区| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 黄色女人牲交| 精品欧美一区二区三区在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 两性夫妻黄色片| 欧美不卡视频在线免费观看 | 岛国在线观看网站| 黑丝袜美女国产一区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜福利,免费看| 两人在一起打扑克的视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 在线观看66精品国产| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av片天天在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 9色porny在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 黄色视频不卡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产又爽黄色视频| 免费在线观看亚洲国产| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲五月天丁香| 亚洲色图av天堂| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产xxxxx性猛交| 国产国语露脸激情在线看| 9热在线视频观看99| 亚洲一码二码三码区别大吗| 色播在线永久视频| av有码第一页| 中文字幕久久专区| 两个人免费观看高清视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一级毛片精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黄片播放在线免费| 午夜福利,免费看| 91大片在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 美女大奶头视频| 精品久久蜜臀av无| 国产在线观看jvid| 国产成人欧美在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 少妇粗大呻吟视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 制服诱惑二区| 久久精品91蜜桃| 禁无遮挡网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 十八禁人妻一区二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 成人三级做爰电影| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲成a人片在线一区二区| 日韩免费av在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久中文字幕一级| 中文字幕av电影在线播放| 久久精品影院6| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产三级黄色录像| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 一级毛片精品| 国产精品爽爽va在线观看网站 | av片东京热男人的天堂| 午夜福利18| www国产在线视频色| 亚洲美女黄片视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产又爽黄色视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美在线黄色| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩三级视频一区二区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲少妇的诱惑av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久影院123| 国产三级黄色录像| 91在线观看av| 精品免费久久久久久久清纯| 国产乱人伦免费视频| 两性夫妻黄色片| 大型黄色视频在线免费观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品影院久久| 国产单亲对白刺激| 国产91精品成人一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 电影成人av| 亚洲成人久久性| 少妇的丰满在线观看| 国产精品,欧美在线| 热re99久久国产66热| 免费观看人在逋| 亚洲国产精品合色在线| cao死你这个sao货| 亚洲中文字幕日韩| 免费在线观看亚洲国产| 一区福利在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 久久久国产精品麻豆| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黄色视频,在线免费观看| 天天一区二区日本电影三级 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男人操女人黄网站|