藿砂口服液對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠腸動(dòng)力的影響

羅秋紅，施光亞，高 勇，劉雅萍，張 潔

（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建 福州350004）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是常見(jiàn)的胃腸功能性紊亂疾病，臨床上以腹瀉型多見(jiàn)，因其病程漫長(zhǎng)，且容易反復(fù)發(fā)作，治療效果較差，使患者的生活質(zhì)量及精神狀態(tài)均受到不同程度的影響，曾被歸屬于心理疾病范疇［1-2］。腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea irritable bowel syndrome，IBS-D）的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家普遍認(rèn)為與胃腸道動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感性、腦－腸軸調(diào)節(jié)功能紊亂、免疫異常、腸道菌群失調(diào)、小腸通透性增加等有關(guān)［3-4］，而腸動(dòng)力異常是IBS-D的主要病理基礎(chǔ)。目前對(duì)IBS-D的治療，西醫(yī)治療上尚缺乏行之有效的治療手段［5］，相對(duì)而言，中醫(yī)治療優(yōu)勢(shì)獨(dú)特，能降低本病復(fù)發(fā)率，且毒副作用較?。?］。藿砂口服液是福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院的院內(nèi)制劑，早期的臨床及基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)：藿砂口服液對(duì)各種急、慢性腹瀉均具有很好的止瀉效果［7-9］，但具體作用機(jī)制不明確。本研究通過(guò)觀察藿砂口服液對(duì)IBS-D大鼠神經(jīng)遞質(zhì)以及腸動(dòng)力的影響，進(jìn)一步探討藿砂口服液調(diào)節(jié)腸功能紊亂的作用機(jī)制。

1 材 料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar大鼠100只，體質(zhì)量（200±10）g，雌雄各半，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0005，飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)動(dòng)物房，Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 儀器 高速冷凍離心機(jī)（安徽中科中佳儀器有限公司，型號(hào)：HC-3018R）；雪花制冰機(jī)（常熟雪科電器有限公司，型號(hào)：IMS-30）；微型個(gè)人離心機(jī)、旋渦混合器（其林貝爾儀器制造有限公司，型號(hào)：LX-600、VORTEX-6）；MD酶標(biāo)分析儀（美國(guó)Molecular Devices公司，型號(hào)：CMAX plus）；全自動(dòng)洗板機(jī)（深圳湃爾生物科技有限公司，型號(hào)：PR510）；生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：LRH-150）

1.3 藥品與試劑 藿砂口服液（院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號(hào)：閩藥制字Z06106047，批號(hào)：20080612）；大黃水煎劑（本院中藥房提供，濃度：0.1 g／mL）；10%水合氯醛（本院藥房提供，批準(zhǔn)文號(hào)：H06106016，批號(hào)：190515）；生理鹽水（福州海王福藥制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：H35020291，規(guī)格：250 mL／袋）；10%活性炭末懸液（炭末1 g溶于10 mL生理鹽水）；一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：A012-1）；5－羥色胺（5-HT）試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)：E-EL-0033c）。

2 方 法

2.1 分組、造模及藥物干預(yù) 將100只Wister大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分空白組、模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組20只。造模方法參照文獻(xiàn)［10］稍作修改，模型組每日同一時(shí)間用0.1 g／mL常溫大黃水煎劑2 mL灌胃1次，5 min后使用規(guī)格統(tǒng)一的橡皮筋將大鼠四肢末端、胸腹部固定于10 cm×20 cm的木板上，大鼠仰面向上，限制大鼠活動(dòng)，木板靠墻壁直立90°放置，持續(xù)2 h，2 h后解除束縛，每天1次，連續(xù)6 d，建立IBS-D模型大鼠。低、中、高劑量組在造模同時(shí)，每日分別予低、中、高劑量藿砂口服液灌胃1次，連續(xù)6 d。藿砂口服液成人常規(guī)給藥量為10 mL／60 kg，參照文獻(xiàn)［11］換算大鼠的給藥量，相當(dāng)于人體劑量的6.3倍，低、中、高劑量分別為0.091、0.182、0.364 g／kg。空白組不予造模及藥物干預(yù)。

2.2 大鼠一般情況 干預(yù)期間每天觀察各組大鼠的排便、飲食、活動(dòng)情況。

2.3 血清一氧化氮（NO）及5－羥色胺（5-HT）的測(cè)定 干預(yù)后第1天每組取10只大鼠，通過(guò)股動(dòng)脈取血1 mL于干燥試管中，室溫靜置15 min后，3 000 r／min離心15 min，取上清液0.2 mL，-20℃保存待檢測(cè)。NO檢測(cè)采用氧化還原法，操作步驟嚴(yán)格按照NO試劑盒說(shuō)明書(shū)；5-TH檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法，操作步驟嚴(yán)格按照5-TH試劑盒說(shuō)明書(shū)。

2.4 炭末推進(jìn)試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)［12］，干預(yù)后第2天每組取10只大鼠進(jìn)行炭末推進(jìn)試驗(yàn)，計(jì)算小腸推進(jìn)率。實(shí)驗(yàn)前每組大鼠禁食12 h，不限制飲水，用10%活性炭末懸液給5組大鼠灌胃，每只3 mL；20 min后用頸椎脫臼法處死動(dòng)物，立即解剖，取出自幽門(mén)至末端的全部腸管，平鋪在白色濾紙上，在無(wú)張力狀態(tài)下測(cè)量炭末前沿至幽門(mén)的距離和小腸的全長(zhǎng)，最后計(jì)算小腸推進(jìn)率。

小腸推進(jìn)率／%＝炭末前沿至幽門(mén)的距離／小腸的全長(zhǎng)×100%

2.5 結(jié)腸轉(zhuǎn)運(yùn)功能測(cè)定 參照文獻(xiàn)［13］，干預(yù)后第3天每組取剩余10只大鼠進(jìn)行結(jié)腸轉(zhuǎn)運(yùn)功能測(cè)定。實(shí)驗(yàn)前每組大鼠禁食12 h，不限制飲水，用水合氯醛腹腔注射麻醉，取直徑3 mm玻璃小球放入大鼠距肛門(mén)3 cm直腸內(nèi)，待大鼠蘇醒后開(kāi)始計(jì)時(shí)，記錄直腸內(nèi)玻璃小球排出的時(shí)間。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較符合正態(tài)分布采用單因素方差分析檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果

3.1 各組大鼠一般情況 空白組大鼠的大便性狀基本為粒狀、質(zhì)軟，食欲正常，動(dòng)作靈活，精神飽滿(mǎn)，被毛光澤；模型組，低、中、高劑量組大鼠在干預(yù)第4天開(kāi)始均出現(xiàn)不同程度的腹瀉，表現(xiàn)為糊狀、不成形、水樣大便或肛周污穢；干預(yù)結(jié)束后模型組大鼠表現(xiàn)為腹瀉，納呆，消瘦明顯，精神倦怠，活動(dòng)量明顯減少，被毛稀疏或無(wú)光澤；而低、中、高劑量組大鼠腹瀉改善，食欲量接近正常，消瘦不明顯，精神稍差，被毛欠潤(rùn)澤，但和模型組比較有明顯改善。

3.2 各組大鼠血清NO及5-HT含量比較 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清NO及5-HT含量比較（±s）μmol／L

表1 各組大鼠血清NO及5-HT含量比較（±s）μmol／L

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05。

NO 40.85±10.19 25.73±4.871）33.36±8.242）36.56±6.352）37.78±5.972）組別空白組模型組低劑量組中劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 5-TH 190.84±67.61 277.94±35.811）253.53±69.972）227.80±51.952）204.95±22.672）

3.3 各組小腸推進(jìn)率及玻璃小球排出時(shí)間比較見(jiàn)表2。

表2 各組小腸推進(jìn)率及玻璃小球排出時(shí)間比較（±s）

表2 各組小腸推進(jìn)率及玻璃小球排出時(shí)間比較（±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05。

組別空白組模型組低劑量組中劑量組高劑量組玻璃小球排出時(shí)間／min 12.20±2.10 5.90±1.201）8.40±0.972）9.60±1.352）11.6±1.782）n 10 10 10 10 10小腸推進(jìn)率／%62.76±1.59 72.50±3.511）67.72±5.612）65.58±4.002）63.70±3.092）

4 討 論

IBS-D是一種慢性或反復(fù)發(fā)作的功能性腸病，其發(fā)病基礎(chǔ)與腸動(dòng)力異常有關(guān)。IBS-D患者可以發(fā)生不同形式的腸動(dòng)力功能紊亂，部位涉及小腸、結(jié)腸及直腸。腸動(dòng)力功能紊亂可表現(xiàn)為小腸分階段運(yùn)動(dòng)和移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)的頻率和持續(xù)時(shí)間增加，十二指腸、空腸的逆行收縮減少，結(jié)腸高幅度推進(jìn)運(yùn)動(dòng)增多。針對(duì)IBS-D的治療，西醫(yī)大都以對(duì)癥治療為主，中醫(yī)藥在改善IBS-D癥狀及防治方面具有很好的優(yōu)勢(shì)，但目前對(duì)IBS-D療效機(jī)制方面的研究相對(duì)較少。

根據(jù)臨床表現(xiàn)，IBS-D屬于中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇?！端貑?wèn)》記載“濕盛則濡泄”“脾病者……虛則腹?jié)M腸鳴，飧泄食不化”，《醫(yī)宗必讀》認(rèn)為“無(wú)濕不成瀉”，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為泄瀉的基本病機(jī)為脾虛與濕盛。藿砂口服液由藿香9 g，砂仁6 g，蒼術(shù)9 g，陳皮6 g，澤瀉12 g，厚樸9 g，神曲12 g，茯苓12 g，甘草6 g組成，全方具有健脾和胃、除濕止瀉的功效。本研究中與空白組比較，模型組大鼠腹瀉、消瘦明顯，活動(dòng)量減少，小腸推進(jìn)率明顯加快，玻璃小球排出時(shí)間明顯縮短，說(shuō)明模型組造模成功；與模型組比較，低、中、高劑量組大鼠腹瀉癥狀改善，消瘦較不明顯，活動(dòng)靈活，小腸推進(jìn)率均減慢，玻璃小球排出時(shí)間均延長(zhǎng)，說(shuō)明藿砂口服液可減緩小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，降低結(jié)腸轉(zhuǎn)運(yùn)速度。

NO、5-TH是參與調(diào)節(jié)胃腸道動(dòng)力功能的重要神經(jīng)遞質(zhì)。NO參與胃腸平滑肌的松弛作用，在胃腸道蠕動(dòng)反射中產(chǎn)生下行性抑制作用，是胃腸道非腎上腺素能神經(jīng)的抑制性遞質(zhì)。5-TH既是神經(jīng)遞質(zhì)也是胃腸激素，在調(diào)整腸道運(yùn)動(dòng)方面也具有重要作用。5-HT可引起小腸蠕動(dòng)增強(qiáng)，推進(jìn)速度加快，移行性綜合運(yùn)動(dòng)增多，張力提高。5-TH含量的增加會(huì)導(dǎo)致大便次數(shù)增多，糞便性狀改變，從而出現(xiàn)腹瀉。本研究中與空白組比較，模型組血清NO含量下降，5-TH含量增加；與模型組比較，低、中、高劑量組血清NO含量均升高，5-TH均下降，說(shuō)明藿砂口服液可提高大鼠血清NO的含量，降低5-TH的含量。表明藿砂口服液可調(diào)節(jié)血清NO及5-TH含量，起到止瀉作用。

綜上所述，藿砂口服液可減緩小腸的過(guò)快推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，降低結(jié)腸轉(zhuǎn)運(yùn)速度，調(diào)節(jié)大鼠血清NO、5-TH的含量，但更深的調(diào)節(jié)機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。