泰地羅新注射液治療豬呼吸道疾病臨床療效試驗(yàn)

李龍飛，孔 梅，鄭 莉，馮言言，常 雪，崔 進(jìn)，吳連勇*，劉義明

（1．齊魯動(dòng)物保健品有限公司，山東 濟(jì)南 250100；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京 100081）

近年來(lái)，豬呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率逐漸上升，成為影響我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，豬呼吸道疾病的發(fā)病率在30%～80%，死亡率在30%以上。豬呼吸道疾病常呈多病原混合感染，是養(yǎng)豬疫病防治的難題[1]。豬呼吸道疾病可對(duì)各個(gè)日齡段的哺乳仔豬、育肥豬、母豬造成嚴(yán)重的危害。豬呼吸道疾病可使仔豬成活率降低，嚴(yán)重時(shí)保育豬死亡率可達(dá)60%以上；育肥豬生長(zhǎng)緩慢，飼料利用率下降，出欄時(shí)間延長(zhǎng)；母豬流產(chǎn)死胎，配種率降低[2-3]。引起豬呼吸道疾病的常見(jiàn)細(xì)菌包括豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌等，導(dǎo)致的細(xì)菌性疾病主要有豬喘氣病、豬傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌病、豬肺疫、副豬嗜血桿菌病等，成為豬養(yǎng)殖過(guò)程中亟待解決的問(wèn)題[4]。

泰地羅新為新一代大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素。2011年，泰地羅新無(wú)菌注射液（商品名為Zuprevo）獲得歐盟獸用藥品委員會(huì)（CVMP）批準(zhǔn)上市[5]，用于豬、牛由敏感菌引起的呼吸系統(tǒng)疾病的治療。泰地羅新產(chǎn)品特點(diǎn)：藥動(dòng)學(xué)特性良好，能夠快速地從注射部位吸收，血漿濃度較高、分布廣泛，在靶組織肺中的有效作用濃度持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)；肌內(nèi)注射能夠使給藥劑量更加準(zhǔn)確，便于臨床使用。本研究以豬為研究對(duì)象，以常用治療藥物氟苯尼考注射液為對(duì)照藥物，按肌注給藥方式，進(jìn)一步客觀、科學(xué)地評(píng)價(jià)泰地羅新注射液對(duì)細(xì)菌性感染引起的豬呼吸道疾病的臨床療效和臨床安全性，為泰地羅新注射液在國(guó)內(nèi)的臨床使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥品

受試藥物泰地羅新注射液：規(guī)格為50 mL、2 g，生產(chǎn)批號(hào)1303001；對(duì)照藥物氟苯尼考注射液：規(guī)格為100 mL、30 g，生產(chǎn)批號(hào)1401001。兩種藥品生產(chǎn)企業(yè)均為齊魯動(dòng)物保健品有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

山東六和平度市崔家集合作農(nóng)戶(hù)育肥廠，存欄規(guī)模2 000余頭。2014年12月底新進(jìn)的一批育肥豬，新進(jìn)育肥豬品系為長(zhǎng)白、大白、杜洛克三元雜交，日齡40～45 d，體重14.5～18.6 kg。冬季爆發(fā)以呼吸急促和腹式呼吸、高熱、病豬精神沉郁等典型呼吸道癥狀為主要臨床癥狀的呼吸道疾病。通過(guò)發(fā)病過(guò)程、臨床癥狀、病理剖檢、致病菌的分離培養(yǎng)和鑒定選擇已表現(xiàn)典型呼吸道癥狀的病例豬130頭為試驗(yàn)豬，其余豬按照豬場(chǎng)常規(guī)管理方法進(jìn)行治療。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 致病菌的分離培養(yǎng)和鑒定

受試豬在給藥治療前，從大群中選取部分病死豬或疑似發(fā)病豬采集心臟、肝臟、脾、肺及腸等組織樣本，并進(jìn)行病原菌的分離培養(yǎng)和鑒定。

1.3.2 動(dòng)物入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：精神狀態(tài)評(píng)分≥2（不活躍，可能斜倚，但能站立，瘦弱，可能脫水），呼吸評(píng)分（呼吸頻率增加，有些出現(xiàn)腹式呼吸）≥2，并且體溫≥40 ℃。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：已患病或與豬呼吸道無(wú)關(guān)的疾病（如腸道疾病、跛行等），體重范圍超標(biāo)、外形發(fā)育不良、結(jié)構(gòu)異?；蛉魏慰股刂委熓罚曃箍寡姿?，或在研究開(kāi)始前14 d內(nèi)接受過(guò)抗生素治療的動(dòng)物。

試驗(yàn)期間動(dòng)物剔除標(biāo)準(zhǔn)：表現(xiàn)與呼吸道疾病無(wú)關(guān)的其他疾病癥狀的動(dòng)物；表現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)的動(dòng)物；試驗(yàn)期間死亡并經(jīng)適當(dāng)?shù)奈⑸飳W(xué)診斷確認(rèn)與呼吸道疾病無(wú)關(guān)的動(dòng)物。

1.3.3 動(dòng)物分組與給藥

所選擇的具有典型臨床癥狀的130頭豬隨機(jī)分成2組，每組65頭，立即進(jìn)行隔離治療、分別給予泰地羅新注射液與氟苯尼考注射液，給藥方案見(jiàn)表1。

表1 給藥方案Tab.1 Dosage regimen

1.3.4 臨床療效和觀察指標(biāo)

用藥后每天8：00、18：00觀察各組豬的臨床癥狀，停止給藥后觀察10 d，詳細(xì)記錄試驗(yàn)開(kāi)始后、給藥前、給藥后和停藥后受試藥物組和對(duì)照藥物組的一般臨床特征和特殊癥狀的臨床表現(xiàn)以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和消失情況。對(duì)癥狀進(jìn)行記分，對(duì)給藥前后的精神狀態(tài)、體溫、體重、呼吸等進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

參照《抗菌藥物II、III期臨床藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)指導(dǎo)原則》[6]]對(duì)給藥后試驗(yàn)動(dòng)物的臨床指標(biāo)（呼吸和精神狀態(tài)）進(jìn)行評(píng)定，并按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算出給藥后受試藥物和對(duì)照藥物的有效率、治愈率和死亡率。

1.3.4.1 有效率

試驗(yàn)期間，根據(jù)以下的有效標(biāo)準(zhǔn)判定療效為有效，計(jì)算有效率。

有效標(biāo)準(zhǔn)：（1）活躍；（2）T＜40 ℃；（3）呼吸分值 =1 或 0；（4）精神狀態(tài)分值=1或0。

有效率=每組動(dòng)物中的有效數(shù)/動(dòng)物數(shù)×100% （1）

1.3.4.2 治愈率

試驗(yàn)期間，根據(jù)以下的治愈標(biāo)準(zhǔn)判定療效為治愈，并計(jì)算治愈率。

治愈標(biāo)準(zhǔn)：（1）活躍；（2）T＜40 ℃；（3）呼吸分值=0；（4）精神狀態(tài)分值=0。

治愈率=每組動(dòng)物中的治愈數(shù)/動(dòng)物數(shù)×100% （2）

1.3.4.3 死亡率

在試驗(yàn)期間，給藥后依舊死亡，并進(jìn)行尸體剖檢有特征性病變；確定為死亡。根據(jù)死亡豬的數(shù)量計(jì)算死亡率。

死亡率=死亡的動(dòng)物數(shù)量/試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)×100% （3）

1.4 病理剖檢

試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)死亡的動(dòng)物進(jìn)行病例剖檢，同時(shí)采集樣品進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)，其中死亡率、有效率、治愈率均采用卡方檢驗(yàn)，體重、體溫等數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物入選情況

2.1.1 臨床癥狀

病豬表現(xiàn)為發(fā)熱、體溫40.5 ℃以上、精神沉郁、食欲下降、呼吸困難、腹式呼吸，部分豬表現(xiàn)皮膚發(fā)紅或蒼白、皮膚和黏膜出現(xiàn)逆散形青紫色、耳梢發(fā)紫、眼瞼皮下水腫、口鼻排出血色泡沫；耳根、腹側(cè)、四肢內(nèi)側(cè)皮膚有紅斑，持續(xù)咳嗽；大部分病豬行走緩慢或不愿站立，跗關(guān)節(jié)有腫大現(xiàn)象，已死亡豬臨死前側(cè)臥或四肢呈劃水樣等。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)室的分離培養(yǎng)

試驗(yàn)前期，通過(guò)對(duì)死亡豬和疑似病豬的心臟、肝臟、脾、肺及腸等進(jìn)行細(xì)菌分離，分別用加血清的TSB培養(yǎng)基和含NAD、血清的TSB培養(yǎng)基，分離細(xì)菌并純化、培養(yǎng)，觀察細(xì)菌形態(tài)，并對(duì)分離細(xì)菌、組織樣品進(jìn)行革蘭氏、亞甲基藍(lán)染色和鏡檢鑒定。 經(jīng)鑒定，所分離細(xì)菌為副豬嗜血桿菌和胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌（見(jiàn)圖1、圖2）。

從臨床分離的豬呼吸道細(xì)菌分布情況看，引起豬呼吸道疾病的主要致病菌為胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和副豬嗜血桿菌。部分豬可同時(shí)分離出兩種病原菌，入選動(dòng)物的細(xì)菌學(xué)分離培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)表2。本試驗(yàn)也分離出一些擬桿菌，如豬鏈球菌等。通過(guò)豬場(chǎng)發(fā)病史、病豬的臨床癥狀、病理解剖、實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)確定山東六和平度市崔家集合作農(nóng)戶(hù)育肥廠此次所爆發(fā)的疾病為胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和副豬嗜血桿菌等引起的豬呼吸道疾病，滿(mǎn)足試驗(yàn)要求。

表2 給藥前細(xì)菌分離結(jié)果Tab.2 Results of bacterial isolation before administration 單位：頭

2.2 試驗(yàn)性治療結(jié)果

2.2.1 給藥前及試驗(yàn)結(jié)束后豬的體重變化（見(jiàn)表3）

表3 給藥前及試驗(yàn)結(jié)束后豬的體重變化Tab.3 Pig weight change before dosing and after the test（n=65） 單位 ：kg

由表3可知，給藥前、試驗(yàn)結(jié)束后受試組和對(duì)照組10 d豬的體重變化基本一致，無(wú)顯著差異。

2.2.2 給藥前和試驗(yàn)結(jié)束后豬體溫、呼吸和精神狀態(tài)評(píng)分

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)豬的體溫進(jìn)行監(jiān)測(cè)，每天測(cè)定2次，監(jiān)測(cè)5 d，給藥前后豬的平均體溫變化見(jiàn)表4。呼吸和精神狀態(tài)觀察至給藥后10 d，結(jié)果見(jiàn)表5、表6。

表4 給藥前和試驗(yàn)結(jié)束后豬平均體溫Tab.4 Average temperature of the pig before administration and after the test

由表4可知，給藥后，豬的體溫均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，給藥2 d時(shí)降至40 ℃以下，且受試藥物組與對(duì)照藥物組的體溫變化基本相同，差異不明顯。

表5 給藥前和試驗(yàn)結(jié)束后豬的呼吸評(píng)分Tab.5 Comparison of pig's respiratory score before administration and after the test

表6 給藥前和試驗(yàn)結(jié)束后豬的精神狀態(tài)評(píng)分Tab.6 Comparison of the mental state score of pigs before administration and after the test

由表5、表6可知，給藥后受試組和對(duì)照組病豬的呼吸和精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)。受試組和對(duì)照藥物組病豬分別在第4 d和第5 d呼吸精神狀態(tài)評(píng)分達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)，給藥后第5 d和受試藥物組病豬達(dá)到治愈的標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)照組的病豬治愈速度略慢于受試組。

2.2.3 治療效果

根據(jù)療效判定標(biāo)準(zhǔn)，在試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)受試藥物組與對(duì)照藥物組的有效率、治愈率、死亡率進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（X2檢驗(yàn)），用藥后各組的治療效果見(jiàn)表7。

表7 各組治療效果Tab.7 Comparison of the treatment effect of each group（n=65） 單位 ：%

由表7可知，在試驗(yàn)期間，受試藥物組與對(duì)照藥物組給藥后均起到明顯的治療效果，受試藥物組與對(duì)照藥物組的有效率和治愈率均達(dá)到75%以上，表明受試藥物與對(duì)照藥物對(duì)豬自然感染胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和副豬嗜血桿菌均具有良好的治療效果。

以有效率為評(píng)價(jià)指標(biāo)：受試藥物組與對(duì)照藥物組的有效率分別為86.15%、78.46%，治愈率分別為83.08%、75.38%，死亡率分別為10.77%、16.92%。有效率、治愈率、死亡率結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn)，雖無(wú)顯著差異，但泰地羅新注射液對(duì)于豬呼吸系統(tǒng)疾病效果明顯強(qiáng)于氟苯尼考注射液。

2.2.4 病理剖檢結(jié)果

試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)死亡豬和疑似病豬進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)死亡豬胸膜炎、腹腔炎及關(guān)節(jié)炎明顯，以漿液性、纖維素性滲出為炎癥，腹腔有豆腐渣樣特征。肺有間質(zhì)水腫、壞死，心包積液、粗糙、增厚，腹腔積液，肝脾腫大、與腹腔有粘連，關(guān)節(jié)病變亦相似，表現(xiàn)為典型的細(xì)菌性豬呼吸系統(tǒng)疾病特征。部分剖檢結(jié)果見(jiàn)圖3～圖6。

3 討論

豬呼吸系統(tǒng)疾病主要由多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、肺炎支原體、副豬嗜血桿菌等感染引起，目前主要用于預(yù)防或治療該適應(yīng)證的藥物是延胡索酸泰妙菌素預(yù)混劑、替米考星預(yù)混劑、氟苯尼考粉等。通常采用混飼或飲水，達(dá)到預(yù)防或治療的效果，需多天重復(fù)給藥。雖然效果良好，但隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，在很多地區(qū)出現(xiàn)不同程度的耐藥現(xiàn)象，治療效果逐步降低。

泰地羅新注射液?jiǎn)蝿┝考?nèi)注射給藥，用于治療豬呼吸系統(tǒng)疾病的藥效均強(qiáng)于泰樂(lè)菌素、替米考星和氟苯尼考等市場(chǎng)上廣泛使用的抗菌藥物。一次給藥、肌內(nèi)注射給藥方便、消除半衰期、生物利用度高、不易產(chǎn)生耐藥性，具有較好的優(yōu)勢(shì)。

泰地羅新的作用機(jī)理同其他大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物，能與敏感菌的核糖體50S亞基結(jié)合，抑制肽鏈的合成和延長(zhǎng)，影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而起到抑菌和殺菌作用[7]。泰地羅新特殊的三元結(jié)構(gòu)使其有更多的位點(diǎn)與細(xì)菌核糖體蛋白結(jié)合，起到抑菌和殺菌的作用，從而延長(zhǎng)其在肺組織和支氣管液中的有效濃度時(shí)間[8]。

本試驗(yàn)將出現(xiàn)臨床呼吸道疾病癥狀的豬隨機(jī)分為2組，分別肌內(nèi)注射泰地羅新注射液和氟苯尼考注射液。結(jié)果表明，泰地羅新注射液的治愈率為83.08%，氟苯尼考注射液的治愈率為75.38%。病原微生物分離鑒定結(jié)果表明，引起豬呼吸道癥狀的病原菌主要為胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、副豬嗜血桿菌。進(jìn)一步驗(yàn)證泰地羅新注射液的臨床推薦給藥方案為：按照4 mg/kg體重劑量單次肌內(nèi)注射給藥。此外，按照說(shuō)明書(shū)給藥，整個(gè)試驗(yàn)中未見(jiàn)豬不良反應(yīng)，說(shuō)明該藥的安全性良好。

4 結(jié)論

泰地羅新注射液用于防治對(duì)泰地羅新敏感的豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、副豬嗜血桿菌引起的呼吸道疾病，按照推薦劑量使用，臨床療效顯著。在臨床使用安全性方面，嚴(yán)格按照每個(gè)注射位點(diǎn)不超過(guò)5 mL給藥，不會(huì)引起豬的不良反應(yīng)。