經(jīng)典名方開(kāi)心散不同溫度高壓蒸汽滅菌條件下9種指標(biāo)成分含量變化研究

陳 穎，禹鵬鑫，丁 輝，荊瑤瑤，張麗娟，余河水, 2, 3*，楊建會(huì)，宋新波, 2, 3，李 正, 2, 3

經(jīng)典名方開(kāi)心散不同溫度高壓蒸汽滅菌條件下9種指標(biāo)成分含量變化研究

陳 穎1，禹鵬鑫1，丁 輝1，荊瑤瑤1，張麗娟1，余河水1, 2, 3*，楊建會(huì)4，宋新波1, 2, 3，李 正1, 2, 3

1. 天津中醫(yī)藥大學(xué) 中藥制藥工程學(xué)院，天津 301617 2. 省部共建組分中藥國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 301617 3. 中藥制藥工程市級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，天津 301617 4. 天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，天津 300410

開(kāi)心散方出自于唐代孫思邈所著的《備急千金藥方》，由遠(yuǎn)志、人參各四分、茯苓二兩、菖蒲一兩組成。其中，君藥為遠(yuǎn)志，安神益智、交通心腎、祛痰消腫；臣藥為人參，大補(bǔ)元?dú)?，生津養(yǎng)血，安神益智，輔以茯苓，利水滲濕、寧心、安神；佐以石菖蒲，開(kāi)竅化痰、醒神益智。四藥合用，具有安神、補(bǔ)氣和利濕化濁功效，主治好忘[1-2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，開(kāi)心散具有抗抑郁[3-4]、抗癡呆[5-6]、抗衰老及抗氧化[7-8]、抗疲勞[9-10]等作用。臨床上廣泛用于治療老年癡呆癥、抑郁癥、焦慮癥和神經(jīng)衰弱等癥狀。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1290超高效液相色譜儀，Agilent公司；Acquity UPLC?BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），Waters公司；KQ2200DBV型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；AL204型電子天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司；超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司。

1.2 材料

遠(yuǎn)志、人參、茯苓及石菖蒲4種藥材均由天津天士力有限公司提供以及安徽援康藥業(yè)有限公司購(gòu)買，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李天祥教授鑒定，遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬植物遠(yuǎn)志W(wǎng)illd.的干燥根，人參為五加科人參屬植物人參C. A. Mey.的干燥根和根莖，茯苓為多孔菌科茯苓屬真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核，石菖蒲為天南星科菖蒲屬植物石菖蒲Schott的干燥根莖，且按照《中國(guó)藥典》2015年版要求檢測(cè)，均為符合藥典規(guī)定的品種。

2 方法與結(jié)果

2.1 開(kāi)心散散劑的制備

按《備急千金藥方》開(kāi)心散原方，稱取各單味藥，粉碎過(guò)六號(hào)篩，按等量倍增法、打底套色法制備開(kāi)心散散劑。

2.2 微生物限度

參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1107“非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”，對(duì)滅菌前后開(kāi)心散進(jìn)行微生物限度檢測(cè)。結(jié)果未滅菌的開(kāi)心散的微生物限度不符合《中國(guó)藥典》2015年版項(xiàng)下規(guī)定，經(jīng)過(guò)滅菌處理后的開(kāi)心散其微生物限度均符合《中國(guó)藥典》2015年版項(xiàng)下規(guī)定（表1）。

表1 不同滅菌方法的微生物限度檢查結(jié)果(n = 3)

2.3 不同滅菌方法的指標(biāo)性成分含量測(cè)定

2.3.2 供試品溶液的制備 稱取開(kāi)心散散劑2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入75%甲醇50 mL超聲提取（360 W，40 Hz）30 min，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至干，殘?jiān)?5%甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加75%甲醇定容至刻度，搖勻，測(cè)定前用0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)。

2.3.3 色譜條件 色譜柱為Acquity UPLC?BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相為0.05%磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～9 min，7%～14%乙腈；9～13 min，14%～16%乙腈；13～19 min，16%～19%乙腈；19～23 min，19%～23%乙腈；23～32 min，23%～36%乙腈；32～37 min，36%～38%乙腈；37～41 min，38%～42%乙腈；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣體積2 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm?；旌蠈?duì)照品溶液、供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖1。

1-西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5 2-西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6 3-遠(yuǎn)志酮III 4-3,6′-二芥子?；崽?5-細(xì)葉遠(yuǎn)志苷A 6-人參皂苷Rg1 7-人參皂苷Re 8-β-細(xì)辛醚 9-α-細(xì)辛醚

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 在“2.3.3”項(xiàng)色譜條件下，精密吸取系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖。記錄各對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處的峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)（），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果顯示其線性關(guān)系良好。其回歸方程，相關(guān)系數(shù)（）及線性范圍見(jiàn)表2。

表2 開(kāi)心散中9種有效成分的線性關(guān)系考察結(jié)果

2.5 不同滅菌溫度對(duì)開(kāi)心散9種指標(biāo)性成分影響

表3 不同滅菌溫度的9種成分的含量測(cè)定結(jié)果(n = 3)

表4 9種指標(biāo)成分在不同高壓蒸汽滅菌溫度條件下的變化率

Table 4 Variation range of nine index components under different high-pressure steam sterilization temperature conditions

條件對(duì)比變化率/%西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6遠(yuǎn)志酮Ⅲ3,6′-二芥子?；崽羌?xì)葉遠(yuǎn)志苷A人參皂苷Rg1人參皂苷Reβ-細(xì)辛醚α-細(xì)辛醚111 ℃與未滅菌對(duì)比3.447.2127.6011.515.95?3.26?2.435.22?3.58121 ℃與111 ℃對(duì)比2.25?0.1612.90?0.59?1.731.250.26?0.1214.13131 ℃與111 ℃對(duì)比11.8111.79?2.909.7711.2911.2310.008.2220.32

3 討論

在樣品處理過(guò)程中對(duì)不同體積分?jǐn)?shù)的甲醇提取溶劑進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)用75%甲醇超聲提取30 min得到的供試液分離效果好且色譜峰數(shù)量較多。同時(shí)進(jìn)行200～400 nm波長(zhǎng)下全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)在203 nm處各成分均有較強(qiáng)吸收，色譜峰相對(duì)較多，故選擇203 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行分析。研究中還考察流動(dòng)相（乙腈-水、乙腈-0.05%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液）、柱溫（30、35 ℃）、流動(dòng)相體積流量（0.2、0.3、0.4 mL/min）、進(jìn)樣量（2、4、8 μL)，最終確定流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脫，柱溫30 ℃，體積流量為0.3 mL/min，進(jìn)樣量為2 μL時(shí)所得色譜圖可以獲得較為平穩(wěn)的基線，且各待測(cè)成分的峰形較好。

文獻(xiàn)研究報(bào)道α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚具有廣泛的藥理活性，但β-細(xì)辛醚結(jié)構(gòu)在體內(nèi)不穩(wěn)定，使得其藥理作用及作用機(jī)制尚不明確，且超劑量的α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚具有致突變性、遺傳毒性和致畸性，臨床使用考慮一定的風(fēng)險(xiǎn)[20]。開(kāi)心散滅菌過(guò)程中藥效物質(zhì)變化規(guī)律以及變化成分對(duì)其藥效的影響，以及細(xì)辛醚的藥效劑量和毒性劑量均有待進(jìn)一步深入研究。

志謝：中川工程顧問(wèn)（上海）有限公司提供高壓蒸汽滅菌設(shè)備進(jìn)行開(kāi)心散不同溫度的滅菌實(shí)驗(yàn)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Changes of nine index components in classic formula Kaixin Powder under different temperatures of high pressures steam sterilization

CHEN Ying1, YU Peng-xin1, DING Hui1, JING Yao-yao1, ZHANG Li-juan1, YU He-shui1, 2, 3, YANG Jian-hui4, SONG Xin-bo1, 2, 3, LI Zheng1, 2, 3

1. College of Pharmaceutical Engineering of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China 2. State Key Laboratory of Provincial and Ministerial Co-construction of Component Traditional Chinese Medicines, Tianjin 301617, China 3. Municipal Experimental Teaching Demonstration Center of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Engineering, Tianjin 301617, China 4. Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd., Tianjin 300410, China

To establish a UHPLC-DAD method for the simultaneous determination of sibiricose A5, sibiricose A6, polygalaxanthone III, 3,6′-disinapoyl sucrose, tenuifoliside A, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, β-asarone and α-asarone in the extract of Kaixin Powder (開(kāi)心散), and compare the effect of different steam autoclaving temperatures on the content of nine index components in Kaixin Powder extract, to provide reference for the selection of sterilization process for Kaixin Powder.High pressure steam sterilization method (sterilization temperature 111, 121, 131 ℃; holding time 60 s) was performed for the sterilization process of Kaixin Powder. The chromatographic separation was achieved on a Acquity UPLC?BEH C18column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) with acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution as mobile phase at the flow rate of 0.3 mL/min for gradient elution. The column temperature was maintained at 30 ℃. The wavelength was set at 203 nm.The results showed that the separation of the nine index components was good, and each component had a wide linear range and a good linear relationship (2> 0.999), with good precision, stability, repeatability and sample recovery. Through the detection and comparison of the content of the nine index components in Kaixin Powder after different sterilization conditions, the autoclave sterilization sterilization was optimized at 111 ℃ for 60 s. The bacterial test met the requirements of Pharmacopoeia, and the content change of each component had the smallest difference with the sample before sterilization.The established UHPLC method can be used to simultaneously determine the contents of nine index ingredients in Kaixin Powder. The method is simple to operate, highly sensitive, accurate, practical, and reliable, which provides theoretical basis for the quality control of Kaixin Powder.

Kaixin Powder; classic formula; UHPLC-DAD; high pressures steam sterilization method; sterilization; content difference; sibiricose A5; sibiricose A6; polygalaxanthone III; 3,6′-disinapoylsucrose; tenuifoliside A; ginsenoside Rg1; ginsenoside Re; β-asarone; α-asarone; quality control

R283.6

A

0253 - 2670(2021)04 - 0976 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.009

2020-10-30

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2018ZX09721005）；“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2018ZX09201011）；天津市高等學(xué)?？萍及l(fā)展基金計(jì)劃項(xiàng)目（2018KJ001）

陳 穎（1996—），女，碩士研究生，研究方向中藥質(zhì)量控制。E-mail: 16622911576@163.com

余河水（1981—），男，講師，研究方向?yàn)橹兴幱行С煞旨百|(zhì)量控制研究。E-mail: hs_yu08@163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]