延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)及血清生化指標(biāo)的影響

李 冰， 朋 璐， 王 康， 熊永潔， 賀紹君

(安徽科技學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

肉雞生長速度較快，機(jī)體代謝率高，產(chǎn)熱多，但由于全身覆蓋羽毛、沒有汗腺等原因，導(dǎo)致散熱能力差，極易受到高溫環(huán)境的負(fù)面影響。目前肉雞養(yǎng)殖業(yè)大多為規(guī)?；⒓s化養(yǎng)殖，飼養(yǎng)密度較大，特別在炎熱季節(jié)，飼養(yǎng)環(huán)境內(nèi)溫度升高，當(dāng)舍溫達(dá)到35 ℃以上時(shí)，肉雞就會(huì)發(fā)生熱應(yīng)激(heat stress，HS)，出現(xiàn)典型癥狀，采食量降低、生長速度緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率降低等，并且降低免疫力，誘發(fā)多種疾病。熱應(yīng)激(heat stress,HS)是指機(jī)體對(duì)高溫的非特異性生理反應(yīng)的總和。肉雞汗腺不發(fā)達(dá)、機(jī)體代謝率高,極易受到高溫環(huán)境的負(fù)面影響,造成典型的熱應(yīng)激生理反應(yīng),導(dǎo)致生產(chǎn)、繁殖性能下降,影響產(chǎn)品質(zhì)量和數(shù)量,造成巨大損失。在實(shí)際生產(chǎn)中，許多養(yǎng)殖場(chǎng)在雞舍周圍種植樹木或遮陽棚遮擋陽光，減少太陽光產(chǎn)生的輻射熱，使用隔熱材料對(duì)雞舍頂部和墻壁做好隔熱措施，阻擋外界高溫的入侵，通過風(fēng)機(jī)和濕簾加強(qiáng)雞舍的通風(fēng)降溫，提供充足的飲水并降低飲水溫度，通過調(diào)整飼料營養(yǎng)和飼喂時(shí)間、降低飼養(yǎng)密度等措施來減緩熱應(yīng)激給雞群帶來的危害。研究表明,針對(duì)熱應(yīng)激造成的基礎(chǔ)生理代謝紊亂,可調(diào)整日糧營養(yǎng),增加營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和氨基酸水平,滿足機(jī)體對(duì)能量、氨基酸和礦物質(zhì)的需求,如提高1%～2%的蛋白質(zhì)含量等,或者添加復(fù)方中草藥散劑和抗應(yīng)激藥物,如有機(jī)酸、VC等,能有效減輕熱應(yīng)激帶來的不良反應(yīng)。

延胡索酸是動(dòng)物營養(yǎng)中重要的有機(jī)酸,其酸化效應(yīng)能調(diào)節(jié)機(jī)體酸堿平衡,可參與能量代謝,緊急生成ATP,提高抵抗力,緩解熱應(yīng)激造成的不良危害,并且延胡索酸幾乎無毒副作用。目前國內(nèi)外研究延胡索酸作為日糧添加劑用于反芻動(dòng)物的報(bào)道較多,但對(duì)于肉雞日糧添加延胡索酸的報(bào)道并不多。本試驗(yàn)在飼糧中添加延胡索酸,研究其對(duì)持續(xù)熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)指標(biāo)及血清生化指標(biāo)的影響,為臨床上使用延胡索酸防控肉雞熱應(yīng)激提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗(yàn)所用肉雞為羅斯308肉雞,肉仔雞購于蚌埠市億耀農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司;延胡索酸(>99%),購于河南一躍實(shí)業(yè)有限公司;多種血清生化試劑盒,均購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 動(dòng)物分組與處理

選用1日齡羅斯308肉雞220只,采用網(wǎng)養(yǎng)(共四層,每層4籠,每籠0.9 m×0.9 m×0.38 m)育雛,1～21 d飼喂基礎(chǔ)飼料,基礎(chǔ)飼料的成分及營養(yǎng)水平見表1,在常溫環(huán)境下飼養(yǎng)。飼養(yǎng)至21日齡時(shí),挑選200只健康肉雞,隨機(jī)分成5組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)10只,公母各半,Ⅰ組常溫對(duì)照組和Ⅱ組熱應(yīng)激對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料,Ⅲ～Ⅴ試驗(yàn)組飼料中分別添加0.5%、1.0%和1.5%延胡索酸。試驗(yàn)從21日齡持續(xù)到42日齡,Ⅰ組舍溫維持在22～24 ℃,相對(duì)濕度45%～50%;Ⅱ～Ⅴ組使用工業(yè)暖風(fēng)機(jī)(吉毅IFH04-30A)控制溫度,舍溫(34±1) ℃,濕度50%～60%,期間肉雞持續(xù)處于熱應(yīng)激環(huán)境。自由采食和飲水,每日光照中斷1 h(22:00-23:00),使肉雞適應(yīng)黑暗環(huán)境。

表1 基礎(chǔ)飼料的成分及營養(yǎng)水平

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及分析方法

1.3.1 血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定 當(dāng)試驗(yàn)至第28、35和42日齡時(shí),從每個(gè)重復(fù)中選取公母各1只,每組8只,翅下靜脈采集血液2 mL裝于EDTA-2Na抗凝采血管,輕微搖晃防止凝血,使用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(邁瑞B(yǎng)C-2800Vet)測(cè)定白細(xì)胞(White blood cell count,WBC)、淋巴細(xì)胞(Lymphocyte,LYM)、中性粒細(xì)胞(Neutrophil,NEU)、紅細(xì)胞(Red blood cell count,RBC)數(shù)目及血紅蛋白(Hemoglobin,HGB)和紅細(xì)胞壓積(Hematocrit,HCT)。

1.3.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定 當(dāng)試驗(yàn)至第28、35和42日齡時(shí),從每個(gè)重復(fù)中選取公母各1只,每組8只,翅下靜脈采集血液于普通真空采血管中,靜置待有少量血清析出后,2 000 r/min離心10 min,取上清液于EP管中待測(cè),使用全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S-200)測(cè)定血清中葡萄糖(Glucose,GLU)、總蛋白(Total protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、球蛋白(Globulin,GLB)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL-C)含量。

1.3.3 分析方法 采用SPSS 18.0對(duì)同一時(shí)間點(diǎn)不同組的數(shù)據(jù)進(jìn)行 LSD法多重比較,用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示試驗(yàn)結(jié)果,以

P

>0

.

05表示差異不顯著,

P

<0

.

05表示差異顯著,

P

<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血液中WBC、LYM及NEU數(shù)目的影響

由表2可知,在28日齡時(shí)Ⅲ組WBC顯著低于Ⅰ組(

P

<0.01);在35日齡時(shí)Ⅰ組顯著高于其它各組(

P

<0.01),Ⅲ和Ⅴ組在35日齡時(shí)均顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05)。Ⅲ組LYM在28日齡時(shí)顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05)。在28日齡時(shí),Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ組NEU顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05或

P

<0.01),Ⅳ組NEU顯著高于Ⅲ組(

P

<0.05);在35日齡時(shí),Ⅰ組NEU顯著高于其它各組(

P

<0.01),Ⅴ組NEU顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05);在42日齡時(shí)Ⅳ組NEU顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05)。

表2 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血液中WBC、LYM及NEU數(shù)目的影響

2.2 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血液中RBC、HGB及HCT的影響

由表3可知,Ⅰ和Ⅲ組RBC在35日齡時(shí)顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅳ組RBC在42日齡時(shí)顯著低于Ⅲ組(

P

<0.05)。在28日齡時(shí),Ⅱ和Ⅲ組HGB顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05或

P

<0.01);在35日齡時(shí),Ⅱ組HGB顯著低于其它各組(

P

<0

.

05或

P

<0

.

01)。在28日齡時(shí), Ⅰ和Ⅴ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05);在35日齡時(shí),Ⅲ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05)。

表3 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血液中RBC、HGB及HCT的影響

2.3 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清中GLU、TP、ALB及GLB含量的影響

由表4可知,28日齡時(shí),Ⅱ組GLU顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05),Ⅲ和Ⅳ組GLU顯著高于Ⅰ和Ⅴ組(

P

<0.05或

P

<0.01);35日齡時(shí)Ⅴ組GLU顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05);42日齡時(shí)Ⅱ組GLU顯著高于Ⅰ和Ⅲ組(

P

<0.05)。42日齡時(shí)的Ⅲ組TP顯著比Ⅱ組高(

P

<0.05)。28、35、42日齡時(shí)各組的ALB和GLB變化均不顯著(

P

<0.05)。

表4 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清中GLU、TP、ALB及GLB含量的影響

2.4 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清中TG、TC、HDL-C及LDL-C含量的影響

由表5可知,28和42日齡時(shí)Ⅲ組TG與Ⅰ組相比顯著降低(

P

<0

.

05或

P

<0.01)。在42日齡時(shí)Ⅲ和Ⅳ組TC均顯著高于Ⅱ和Ⅴ組(

P

<0.05),同時(shí)Ⅳ組TC顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05)。關(guān)于HDL-C,35日齡時(shí)Ⅳ組HDL-C顯著小于Ⅱ組(

P

<0.05);42日齡時(shí),Ⅲ組HDL-C顯著高于其它各組(

P

<0.05或

P

<0.01)。28日齡時(shí)Ⅲ、Ⅳ組LDL-C顯著低于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅴ組LDL-C顯著高于Ⅲ組(

P

<0.05);42日齡時(shí),Ⅲ組LDL-C顯著高于Ⅰ和Ⅴ組(

P

<0.05),Ⅳ組LDL-C顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05)。

表5 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清中TG、TC、HDL-C及LDL-C含量的影響

3 結(jié)論與討論

3.1 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

WBC包括LYM和NEU,屬于免疫細(xì)胞。有研究表明,熱應(yīng)激會(huì)抑制肉雞的免疫能力,對(duì)淋巴細(xì)胞的活性沒有明顯影響,但會(huì)抑制總白細(xì)胞數(shù)和抗體產(chǎn)生,使熱應(yīng)激肉雞血液中WBC數(shù)目下降,同時(shí)應(yīng)激時(shí)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸機(jī)能增強(qiáng),使下丘腦分泌促進(jìn)促腎上腺皮質(zhì)激素分泌的激素,其中腎上腺皮質(zhì)釋放過量的糖皮質(zhì)激素,會(huì)分解靶細(xì)胞,尤其是能溶解LYM,使熱應(yīng)激時(shí)肉雞血液中LYM數(shù)目降低。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,Ⅱ組血液中WBC、LYM、NEU數(shù)目均比Ⅰ組低,Ⅱ組LYM數(shù)目呈下降趨勢(shì),與上述研究結(jié)果一致。延胡索酸試驗(yàn)組的WBC數(shù)目普遍高于熱應(yīng)激對(duì)照組,Ⅲ和Ⅴ組在35 日齡時(shí)都顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),說明延胡索酸能提高WBC數(shù)目,可能是因?yàn)檠雍魉嵝纬赡芰康耐緩蕉?應(yīng)激時(shí)可快速合成ATP,增強(qiáng)抗應(yīng)激能力,提高免疫力,緩解熱應(yīng)激對(duì)白細(xì)胞的抑制。延胡索酸組的LYM與熱應(yīng)激對(duì)照組相比變化不顯著。在28、35日齡時(shí)延胡索酸試驗(yàn)組的NEU數(shù)目均高于熱應(yīng)激對(duì)照組,但又均低于常溫對(duì)照組,在28日齡時(shí)Ⅳ組的NEU數(shù)目明顯比Ⅲ組高(

P

<0.05),在35日齡時(shí)Ⅴ組的NEU數(shù)目明顯比Ⅱ組高(

P

<0.05),說明延胡索酸能提高NEU數(shù)目,其中1%的延胡索酸在短期內(nèi)比0.5%的延胡索酸更快生效,但效果持續(xù)時(shí)間較短。熱休克蛋白能增強(qiáng)細(xì)胞的抗應(yīng)激能力,使細(xì)胞免受應(yīng)激造成的不可逆損失甚至死亡,應(yīng)激過程中產(chǎn)生的熱休克蛋白在LYM與NEU中均有表達(dá),延胡索酸能促進(jìn)LYM和NEU生成,使熱休克蛋白的表達(dá)增加,從而增強(qiáng)機(jī)體和細(xì)胞對(duì)多種應(yīng)激原的耐受能力,對(duì)雞的免疫功能起一定的調(diào)節(jié)作用。RBC是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞,具有免疫功能,內(nèi)含運(yùn)輸氧的HGB,而HCT代表一定體積全血中RBC體積的相對(duì)比例,因RBC增加或血漿量減少而增加。有研究表明,熱應(yīng)激反應(yīng)會(huì)干擾肉雞腸道的微生態(tài)平衡,導(dǎo)致細(xì)菌大量繁殖與死亡。一方面,細(xì)菌和內(nèi)毒素破壞腸黏膜的屏障作用,然后進(jìn)入血液,另一方面,腸黏膜缺血缺氧使酸性產(chǎn)物過多,阻礙細(xì)胞代謝,損害組織,細(xì)胞外Ca內(nèi)流使組織水腫,增加上皮通透性,加快細(xì)菌和內(nèi)毒素進(jìn)入血液,對(duì)身體造成損害,影響RBC生成,并直接對(duì)RBC造成損傷,因此血液中RBC和HGB會(huì)隨時(shí)間延長而減少,同時(shí)在熱應(yīng)激條件下,肉雞張口呼吸,并伴有一定的腹瀉,使機(jī)體缺失水分,使熱應(yīng)激肉雞血液中HCT減少。本研究結(jié)果顯示,Ⅱ組RBC、HGB、HCT均低于Ⅰ組,且隨時(shí)間延長而降低。延胡索酸組的RBC、HGB、HCT普遍高于熱應(yīng)激對(duì)照組,28日齡時(shí)Ⅴ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),35日齡時(shí)Ⅲ組的RBC和HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組HGB顯著高于Ⅱ組(

P

<0

.

05或

P

<0.01),表明延胡索酸能提高熱應(yīng)激肉雞血液中的RBC、HGB、HCT,因?yàn)檠雍魉崮芨纳颇c道內(nèi)微生物環(huán)境,抑制或殺滅有害菌,在飼料中添加延胡索酸能減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生和進(jìn)入血液,從而減少對(duì)機(jī)體的影響,減少內(nèi)毒素對(duì)紅細(xì)胞的損害,使熱應(yīng)激肉雞血液中RBC和HGB增加。延胡索酸的酸化效應(yīng)能降低胃內(nèi) pH,增強(qiáng)消化酶活性,降低胃排空速度,降低腹瀉發(fā)生率,從而使熱應(yīng)激肉雞血液中HCT增加。

本研究結(jié)果顯示,在28日齡時(shí)Ⅳ和Ⅴ組的血常規(guī)指標(biāo)普遍高于Ⅲ組,在35和42日齡時(shí)Ⅲ組的血常規(guī)指標(biāo)普遍高于Ⅳ和Ⅴ組,說明0.5%的延胡索酸能長期改善熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)指標(biāo),但生效較慢;1%和1.5%的延胡索酸能在早期快速改善熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)指標(biāo),但效果持續(xù)時(shí)間較短,其中1%的延胡索酸產(chǎn)生的效果更好。

3.2 延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清生化指標(biāo)的影響

血清中的GLU能夠隨著血液輸送到各個(gè)組織器官中氧化分解、產(chǎn)生ATP,供應(yīng)生命活動(dòng)所需的能量。其中一部分是來自于食物中的碳水化合物,經(jīng)酶分解為單糖;一部分是肝臟通過糖異生合成。在正常情況下,機(jī)體的血清GLU分解與合成代謝處于一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。有研究表明,熱應(yīng)激促使家禽血漿中皮質(zhì)酮水平升高,糖異生反應(yīng)增多,因此肉仔雞血漿GLU水平與常溫對(duì)照組相比升高。同時(shí)在高溫環(huán)境下,家禽的采食量下降導(dǎo)致機(jī)體的糖攝入量不足,為了維持平衡,機(jī)體開始消耗自身的脂肪,使血液中的游離脂肪酸水平增高,對(duì)GLU的利用減少,因此血清中GLU含量會(huì)相對(duì)增高。本研究結(jié)果顯示,28、35、42日齡時(shí)Ⅱ組的GLU含量與Ⅰ組比相對(duì)增高,且28和42日齡時(shí)Ⅱ組明顯比Ⅰ組高(

P

<0.05),與上述結(jié)果一致。28日齡時(shí),Ⅴ組顯著低于Ⅲ和Ⅳ組(

P

<0

.

05或

P

<0

.

01);42日齡時(shí)Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組GLU含量較Ⅱ組均有不同程度降低,且Ⅲ組GLU含量顯著降低(

P

<0.05),表明延胡索酸能調(diào)節(jié)熱應(yīng)激肉雞血清中的GLU含量。血清TP是機(jī)體蛋白質(zhì)的來源之一,由ALB和GLB組成。持續(xù)熱應(yīng)激影響肉雞采食量,為了維持細(xì)胞新陳代謝只能通過分解體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)來提供所需能量。有研究表明,經(jīng)過高溫處理后,肉雞食欲下降,機(jī)體攝入蛋白質(zhì)也相對(duì)減少,同時(shí)高溫可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)代謝異常使得機(jī)體血清TP含量與常溫對(duì)照組相比發(fā)生下降。本試驗(yàn)結(jié)果與其一致,28、35、42日齡時(shí)Ⅱ組血清中TP、ALB、GLB含量與Ⅰ組相比不顯著降低。延胡索酸組的TP、ALB、GLB含量普遍高于熱應(yīng)激對(duì)照組,在42日齡時(shí)Ⅲ組血清中TP含量與Ⅱ組相比顯著增高(

P

<0.05),說明延胡索酸對(duì)熱應(yīng)激引起的TP、ALB、GLB下降起到一定的緩解作用,但對(duì)ALB和GLB的影響不明顯,同時(shí)0.5%延胡索酸的效果持續(xù)時(shí)間更長,但生效較慢。血脂中的主要成分是TG和TC,還有LDL-C和HDL-C。當(dāng)發(fā)生熱應(yīng)激時(shí),高溫環(huán)境會(huì)造成細(xì)胞損傷,細(xì)胞膜的通透性增大,也會(huì)增高脂蛋白酶的活性,使得一些組織內(nèi)酶進(jìn)入血液中,加速分解血液中的TG和TC,進(jìn)而導(dǎo)致其含量降低,同時(shí)LDL-C和HDL-C將相對(duì)增高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,在28、35、42日齡時(shí),與Ⅰ組相比,Ⅱ組血清中的TG和TC含量降低不顯著、LDL-C和HDL-C含量增高不顯著。試驗(yàn)結(jié)果顯示,與Ⅱ組相比,28、35、42日齡時(shí)延胡索酸組TG變化不顯著,表明延胡索酸對(duì)血清中TG含量影響不明顯。延胡索酸組TC含量均高于熱應(yīng)激對(duì)照組,同時(shí)42日齡時(shí)Ⅲ和Ⅳ組TC明顯高于Ⅱ和Ⅴ組(

P

<0.05),表明延胡索酸能提高血清中TC的含量。42日齡時(shí),Ⅲ組HDL-C顯著高于其它各組(

P

<0

.

05或

P

<0

.

01),表明延胡索酸能提高血清HDL-C含量。28日齡時(shí)Ⅲ和Ⅳ組LDL-C顯著低于Ⅱ組(

P

<0.05),表明延胡索酸能調(diào)節(jié)血清LDL-C含量。

延胡索酸是一種有機(jī)酸,添加到日糧中能夠降低胃內(nèi)pH,經(jīng)家禽采食后能夠增強(qiáng)胃內(nèi)消化酶的活性,促進(jìn)食物的消化吸收,保證糖攝取充足,減少糖異生作用,提高對(duì)飼料蛋白質(zhì)的利用率,提高粗脂肪的消化率,增強(qiáng)機(jī)體對(duì)脂肪吸收利用,能夠滿足機(jī)體正常生命活動(dòng)的需求,降低熱應(yīng)激對(duì)機(jī)體造成的損害作用。因此延胡索酸能調(diào)節(jié)熱應(yīng)激肉雞血清中的GLU、LDL-C含量,提高TP、TC和HDL-C含量,其中0.5%和1%的延胡索酸需要更長時(shí)間生效,并且0.5%延胡索酸效果更好,而1.5%延胡索酸能快速生效,但效果持續(xù)時(shí)間較短。

綜上所述,延胡索酸能改善熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)和血清生化指標(biāo),提高血液中的WBC、NEU、RBC、HGB和HCT含量,調(diào)節(jié)血清中的GLU、LDL-C含量,提高TP、TC和HDL-C含量,但對(duì)LYM、ALB、GLB、和TG的影響不明顯。飼料中添加0.5%的延胡索酸能長期改善熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)和血清生化指標(biāo),但生效較慢;飼料中添加1.5%延胡索酸能在早期快速改善熱應(yīng)激肉雞血常規(guī)和血清生化指標(biāo),但效果持續(xù)時(shí)間較短。