金花茶組葉片生化成分評(píng)價(jià)及其最佳采收期研究

劉保財(cái) 陳菁瑛 張武君 黃穎楨 趙云青

摘? 要：本研究以26份來(lái)源于6種金花茶組植物、不同表型防城金花茶和不同月份采收的防城金花茶的成熟葉片為材料，建立同時(shí)測(cè)定蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚4種黃酮成分的HPLC法，以及優(yōu)化了測(cè)定茶多酚、總黃酮、總多糖和總皂苷成分含量的紫外分光光度法，基于以上8種成分含量，結(jié)合主成分綜合評(píng)分和聚類(lèi)分析的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，對(duì)不同來(lái)源金花茶葉片生化成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：8種成分含量在不同來(lái)源金花茶葉片中存在差異，其中無(wú)名金花茶8種成分含量均較高，四季金花茶、防城金花茶次之;8年生1—12月份采收的防城金花茶葉片中，總皂苷、總黃酮和總多糖含量均表現(xiàn)為升-降-升-降的變化規(guī)律，并在10月含量達(dá)到最高;5年生不同種（S1～S14）主成分綜合評(píng)分順序?yàn)椋簾o(wú)名金花茶>四季金花茶>防城金花茶（花蕾大、花多、不抗寒、花黃且大、尖果）>顯脈金花茶>凹脈金花茶>小果金花茶;8年生不同月份（S15～S26）主成分綜合評(píng)分順序?yàn)椋?0月采>2月采>3月采>4月采>5月采>7月采>6月采>1月采>8月采>12月采>11月采>9月采，其中無(wú)名金花茶、四季金花茶及防城金花茶中花蕾大、花多、花黃且大等表型的金花茶葉片與2—4月份和10月份采集的8年生金花茶葉片的多指標(biāo)綜合評(píng)分排序位列前10;聚類(lèi)分析結(jié)果將供試26份樣品分為5類(lèi)。綜上所述，金花茶葉片的生化成分與金花茶植物種類(lèi)和采收期有關(guān)，無(wú)名金花茶、四季金花茶和防城金花茶中花蕾大、花多、不抗寒、花黃且大的表現(xiàn)型的綜合生化成分較高，初步確定防城金花茶葉片的適宜采收期為2—4月份和10月份，所建立的多指標(biāo)定量結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析方法為金花茶組植物葉片的生化成分評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：金花茶組;多成分測(cè)定;化學(xué)計(jì)量學(xué);品質(zhì)評(píng)價(jià);采收期

中圖分類(lèi)號(hào)：S432.2? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： 26 accessions including six species of golden camellia， different phenotypes of Camellia chrysantha and C. chrysantha collected in different months were selected as the research materials. The simultaneous determination of rutin， quercetin， luteolin and kaempferiae by HPLC and the determination of tea polyphenols， flavonoids， total polysaccharides and total saponins by ultraviolet spectrophotometric were established and optimized. The quality of leaves of golden camellia from different sources was comprehensively evaluated based on the combination of the principal component comprehensive scores and clustering analysis of the eight biochemical components. There were differences in the content of the eight components in different sources. The content of the eight components in C. nitidissima was higher， followed by that of C. perpetua and C. chrysantha. The content of total saponins， total flavonoids and total polysaccharides in 8-year-old C. chrysantha collected from January to December all showed the rule of ascending-descending-ascending-descending， and reached the highest value in October. The order of the principal component comprehensive score of the 5-year-old different species （S1-S14） was as follows： C. nitidissima > C. perpetua > C. chrysantha （large flowers， many flowers， not cold-resistant， yellow flowers and large， sharp fruits） > C. euphlebi > C. impressinervis > C.nitidissima var. microcarpa. The order of the comprehensive scores of the main ingredients of the 8-year-old havested in different months （S15-S26） was October > February > March > April > May > July > June > January > August > December > November > September. Besides， the ranking of the comprehensive scores of large buds， large flowers， multi-golden flower and February to April and October harvested C. chrysantha was higher and at the first 10 ranks. Cluster analysis classified the 26 accessions could be classified into five categories. In summary， the quality of golden camellia was affected by variety， tree age and harvest time. The comprehensive biochemical compositions of C. nitidissima， C. perpetua and C. chrysantha with phenotype of large flower buds， many flowers， not cold resisdence， yellow and big flowers was better. It approved that the best harvest period of C. chrysantha was from February to April and October. The established multi-index quantitative analysis combined with chemometric analysis would provide a reference for biochemical evaluation of golden camellia.

Keywords： Camellia Sect. Chrysantha; simultaneous determination; chemometrics methods; quantitative evaluation; harvest period

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.01.022

金花茶組（Camellia Sect. Chrysantha Chang）屬山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia L.）植物[1]，早在李時(shí)珍《本草綱目》有載“山茶產(chǎn)南方……或亦云有黃色者”[2]，是茶花家族中唯一花瓣金黃色的珍稀物種，享有“茶族皇后”“植物界大熊貓”的美譽(yù)，含有黃酮類(lèi)、多糖、茶多酚、皂苷等多種生理活性成分和氨基酸、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分[3]，具有清熱解毒、利尿消腫、止痢等功效[4-6]，其葉和花是廣西壯族傳統(tǒng)民間用藥，具有食用、觀賞和藥用的多重價(jià)值[7-9]。

目前已發(fā)現(xiàn)全世界分布的金花茶組植物有42種5個(gè)變種，而我國(guó)有29種5個(gè)變種[10]，主要分布在北回歸線(xiàn)以南，北緯21°30～22°55、東經(jīng)107°36～108°33的廣西南部和西南部防城、南寧、東興等地區(qū)[11-14]。自1978年開(kāi)始，福建福州、福建龍巖、湖南長(zhǎng)沙、浙江溫州等地均開(kāi)展金花茶的引種和推廣[15]，已有學(xué)者對(duì)金花茶組植物馴化栽培、優(yōu)良品種選育和品質(zhì)評(píng)價(jià)等展開(kāi)研究[4-8， 16-18]，對(duì)其研究主要集中在生物學(xué)特征評(píng)價(jià)、總黃酮、茶多酚等多成分含量測(cè)定，有研究表明蘆丁、槲皮素、木犀草素和山奈酚是其主要黃酮類(lèi)成分，也是主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌等作用[8]。迄今有關(guān)金花茶葉片綜合評(píng)價(jià)及適宜采收期的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，因此本研究基于前人對(duì)金花茶葉化學(xué)成分的報(bào)道，以不同種源、同種不同表型和同一表型不同采收期的金花茶成熟葉片為研究對(duì)象，把總黃酮、總多糖、總皂苷、茶多酚及蘆丁、槲皮素、木犀草素和山奈酚等主要黃酮成分作為綜合指標(biāo)，建立多成分指標(biāo)結(jié)合主成分分析、聚類(lèi)分析的化學(xué)計(jì)量學(xué)的綜合評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)金花茶葉片，為全面、客觀地評(píng)價(jià)金花茶葉片品質(zhì)和適宜采收期提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 材料與試劑? 5年生不同種源金花茶成熟葉片（編號(hào)S1～S6）于2017年5月18日采于福建省漳平市展宏金花茶專(zhuān)業(yè)合作社;5年生不同表型防城金花茶（Camellia chrysantha）成熟葉片（編號(hào)S7～S14）于2017年5月18日采于福建省漳平市展宏金花茶專(zhuān)業(yè)合作社;8年生防城金花茶不同月齡的成熟葉片（編號(hào)S15～S26）于2017年1—12月每月10日采于福建省世紀(jì)金花科技有限公司金花茶基地。所有樣品經(jīng)福建省龍巖林業(yè)種苗站洪永輝教授級(jí)高工鑒定，留樣保存于福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究中心，樣品信息見(jiàn)表1。

對(duì)照品蘆?。ㄅ?hào)：100080-201409，91.9%）、木犀草素（批號(hào)：111520-201605，99.6%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;槲皮素（批號(hào)：100081-200406，98%）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;山奈酚（批號(hào)：10051321，98%）購(gòu)自上海同田生物科技有限公司。甲醇（德國(guó)Merck公司）、磷酸為色譜純（阿拉丁），水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.1.2? 儀器與設(shè)備? Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent technologies公司）;KQ-400DE超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;UV1600紫外可見(jiàn)分光系統(tǒng)（天津市拓普儀器有限公司）;R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、B-491水浴鍋（瑞士Buchi公司）;予華SHZ-D循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器廠(chǎng)）;BP210十萬(wàn)分之一天平（德國(guó)Sartorius公司）;JSP-200高速多功能粉碎機(jī)（浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠(chǎng)）;Milli-Q超純水儀（美國(guó)Millipore公司）;Fd-1a-50真空冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.2? 方法

1.2.1? 樣品前處理? 金花茶成熟葉片經(jīng)冷凍干燥，粉碎后，過(guò)40目篩得樣品粉末，備用。

1.2.2? HPLC法測(cè)定金花茶葉中蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量? （1）色譜條件。采用Ultimate XB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，3 μm），流動(dòng)相為甲醇（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脫（0～20 min，35%～35% A;20～30 min，35%～55% A;30～50 min，55%～55% A），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。（2）對(duì)照品溶液制備。分別精密稱(chēng)取對(duì)照品蘆丁6.6 mg、槲皮素1.7 mg、木犀草素1.6 mg、山奈酚1.9 mg，分別加入甲醇并定容于10 mL量瓶中，作為對(duì)照品貯備液。分別吸取2、1、1、2 mL于25 mL量瓶中，并加入甲醇定容至25 mL，即得蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚質(zhì)量濃度分別為52.8、6.8、6.4、15.2 μg/mL的混合對(duì)照品貯備液，備用。

1.2.3? UV法測(cè)定金花茶葉茶多酚、總黃酮、總多糖、總皂苷含量? 茶多酚測(cè)定參照《茶葉中茶多酚和兒茶素類(lèi)含量的檢測(cè)方法》（GB/T 8313— 2008）[19]，得到茶多酚待測(cè)液（Ⅰ），按福林酚氧化法測(cè)定。

總黃酮的測(cè)定參考黃興賢等[20]、韋秀芝等[21]的方法，并稍作修改后得提取流程：稱(chēng)取0.5 g樣品粉末于50 mL錐形瓶中，加75%乙醇40 mL，20 ℃下超聲提取0.5 h，過(guò)濾，用75%乙醇洗滌殘?jiān)喜V液定容于50 mL容量瓶中，得總黃酮待測(cè)液（Ⅱ），按亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色法[21]測(cè)定。

總多糖測(cè)定參考韋璐等[22]的方法，稍作修改，在提取總黃酮后，將殘?jiān)?5 mL水于75 ℃超聲提取1 h，過(guò)濾，用水洗滌濾渣，合并濾液定容于50 mL容量瓶中，得多糖待測(cè)液（Ⅲ），按苯酚-硫酸法[23]測(cè)定。

總皂苷測(cè)定參考高麗萍等[24]的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，稱(chēng)取樣品粉末0.5 g于錐形瓶中，加入50 mL 75%乙醇，20 ℃下超聲0.5 h，過(guò)濾，濾液旋蒸至無(wú)醇味，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加入適量水飽和，正丁醇萃取2次，合并正丁醇層，旋蒸至干，加入甲醇復(fù)溶并定容至10 mL容量瓶中，搖勻，作為皂苷待測(cè)液（Ⅳ），按唐昭領(lǐng)等[25]優(yōu)化的香草醛-冰醋酸-高氯酸法進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3次。

1.3? 數(shù)據(jù)處理

以測(cè)定的蘆丁等8種化學(xué)成分含量為變量，對(duì)26份不同的金花茶葉數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類(lèi)分析，所有數(shù)據(jù)運(yùn)用Excel 2007軟件和SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，進(jìn)行主成分分析，得主成分特征向量、特征值、方差貢獻(xiàn)率。特征值表示對(duì)應(yīng)主成分能夠反映原有信息的多少[26]，以特征值大于1的確定主成分，再以累積貢獻(xiàn)率≥80%為選擇主成分依據(jù)[27]。運(yùn)用SPSS 20.0軟件，采用組間平方和，歐氏距離法對(duì)26份金花茶樣品進(jìn)行聚類(lèi)分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 供試品溶液制備

預(yù)實(shí)驗(yàn)考察不同提取方法（超聲和回流）、不同濃度（95%、70%、50%）乙醇作為提取溶劑及pH對(duì)4種黃酮的提取效果，結(jié)果見(jiàn)圖1。最終確定樣品制備方法為取金花茶葉樣品粉末1 g，精密稱(chēng)定，置具塞三角瓶中，精密加入50%乙醇0.1 mol/L鹽酸（10∶1）16.5 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取60 min（功率100 W，頻率50 kHz），放冷，稱(chēng)定重量，用50%乙醇-0.1 mol/L鹽酸（10∶1）補(bǔ)足減少的重量，搖勻，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)照品與樣品的色譜圖結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.2? HPLC法同時(shí)測(cè)定金花茶葉中蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量

2.2.1? 線(xiàn)性關(guān)系考察? 精密吸取1.2.2（2）方法制備的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.05、0.1、0.25、0.5、1、2、4、6、10 mL于10 mL量瓶中，分別加入9.95、9.9、9.75、9.5、9、8、6、4、0 mL甲醇稀釋至刻度，即得系列濃度對(duì)照品溶液。精密吸取10 μL，在1.2.2（1）項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。按3倍信噪比計(jì)算4個(gè)成分的檢測(cè)限（LOD），按10倍信噪比計(jì)算4個(gè)成分的定量限（LOQ）。結(jié)果表明（表2），蘆丁、槲皮素、木犀草素和山奈酚相關(guān)系數(shù)均大于0.9998，線(xiàn)性良好。

2.2.2? 精密度試驗(yàn)? 精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的峰面積，結(jié)果顯示4個(gè)被測(cè)物峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation， RSD）分別為1.20%、1.82%、2.74%、1.12%，表明儀器的精密度良好。

2.2.3? 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取供試品溶液分別于0、2、6、10、12、24、48 h進(jìn)樣10 μL，計(jì)算得4個(gè)被測(cè)物峰面積RSD分別為0.54%、2.60%、3.25%、6.44%，結(jié)果表明供試液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4? 重復(fù)性試驗(yàn)? 精密稱(chēng)取同一批金花茶葉樣品6份，按2.1方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算各質(zhì)量濃度的RSD。計(jì)算得4個(gè)被測(cè)物峰面積RSD分別為0.84%、2.65%、2.52%、1.79%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5? 回收率試驗(yàn)? 取已知含量的金花茶葉粉末，每份0.5 g，共9份，精密稱(chēng)定。每3份加入相同量（分別為已知含量的80%、100%、120%）的蘆丁、槲皮素、木犀草素和山奈酚對(duì)照品，按2.1方法制備供試品溶液，在1.2.2（1）色譜條件下測(cè)定含量，結(jié)果蘆丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚平均加樣回收率分別為93.39%、95.26%、103%、95.67%，RSD分別為2.48%、2.90%、3.04%和2.79%，結(jié)果表明該回收率符合方法學(xué)考察要求，表明該方法準(zhǔn)確度高，符合成分分析要求。

2.2.6? 樣品含量測(cè)定? 分別取不同種源和不同月齡金花茶葉樣品粉末1 g，精密稱(chēng)定，按2.1方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL后測(cè)定峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算其含量，4種黃酮含量結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，不同種、不同月份之間的金花茶在蘆丁、槲皮素、木犀草素和山奈酚含量之間存在差異，然而這4種成分含量均較低，甚至在個(gè)別樣品中無(wú)法測(cè)試出來(lái)，可以作為不同樣品之間的化學(xué)成分標(biāo)志。

2.3? UV法測(cè)定金花茶葉茶多酚、總黃酮、總多糖、總皂苷含量

由表3可見(jiàn)，5年生不同種的金花茶組植物品質(zhì)具有一定差異，無(wú)名金花茶的茶多酚、總黃酮、總多糖、總皂苷含量均高于其他金花茶，四季金花茶次之，其次為顯脈金花茶、防城金花茶和凹脈金花茶。8年生防城金花茶1—12月采收金花茶葉，4種生理活性成分含量高低順序?yàn)榭傇碥?總黃酮>茶多酚>總多糖，均在10月達(dá)到最高值，除茶多酚外，總皂苷、總黃酮和總多糖含量均表現(xiàn)為升-降-升-降的趨勢(shì);蘆丁、山奈酚含量無(wú)明顯變化規(guī)律，木犀草素在1—2月含量較高，槲皮素和木犀草素在3—8月無(wú)顯著變化，槲皮素在9—12月呈逐漸上升趨勢(shì)。

2.4? 不同金花茶葉質(zhì)量的化學(xué)計(jì)量學(xué)分析

2.4.1? 主成分分析? 由表4可知，特征值大于1的主成分有3個(gè)，其中第1主成分特征值為2.681，方差貢獻(xiàn)率為33.511%;第2和第3主成分特征值分別為2.117和1.144，方差貢獻(xiàn)率分別為26.461%和14.299%;按照累積貢獻(xiàn)率≥80%提取4個(gè)主成分，第4個(gè)主成分特征值為0.832，貢獻(xiàn)率為10.399%，4個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)84.671%。以特征向量為權(quán)重得4個(gè)主成分的表達(dá)式為：

Z1=0.241X1+0.032X2-0.099X3+0.362X4+0.565X5+0.588X6+0.166X7+0.328X8

Z2=0.106X1?0.539X2+0.564X3+0.097X4?0.101X5+0.073X6+0.561X7?0.202X8

Z3=0.737X1?0.004X2+0.036X3?0.580X4?0.141X5+0.020X6+0.007X7+0.314X8

Z4=?0.015X1+0.402X2+0.514X3+0.372X4?0.261X5?0.220X6?0.008X7+0.565X8

式中X1為蘆丁的含量，X2為槲皮素的含量，X3為木犀草素的含量，X4為山奈酚的含量，X5為茶多酚的含量，X6為總黃酮的含量，X7為總多糖的含量，X8為總皂苷的含量。

由主成分特征向量所占權(quán)重可知各指標(biāo)對(duì)主成分的貢獻(xiàn)大小，第1主成分主要反映了總黃酮、茶多酚、總皂苷和山奈酚4個(gè)線(xiàn)性分量，其中總黃酮和茶多酚的特征向量達(dá)0.5以上;影響第2主成分的主要成分是木犀草素、總多糖，而與槲皮素呈顯著負(fù)相關(guān);主成分3中，蘆丁具有關(guān)鍵正影響作用，而山奈酚則呈負(fù)相關(guān)性;主成分4則主要反映了槲皮素、木犀草素、總皂苷的含量變化影響。而總黃酮、茶多酚、總皂苷、山奈酚、木犀草素和總多糖是反映金花茶品質(zhì)的綜合指標(biāo)，可作為金花茶質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考指標(biāo)。

以前4個(gè)主成分的貢獻(xiàn)率為權(quán)重，得主成分綜合評(píng)價(jià)函數(shù)F=0.33511Z1+0.26461Z2+0.14299Z3 +0.10399Z4，式中Z1、Z2、Z3、Z4為上述4個(gè)主成分，主成分綜合得分和綜合排序見(jiàn)表5。5年生不同種及表型（S1～S14）主成分綜合評(píng)分大小順序?yàn)椋簾o(wú)名金花茶>四季金花茶>防城金花茶（花蕾大、花多、不抗寒、花黃且大、尖果）>顯脈金花茶>凹脈金花茶>小果金花茶，不同種之間存在較大的差異，其中以無(wú)名金花茶和四季金花茶得分最高。而8年生不同月份（S15～S26）主成分綜合評(píng)分大小順序?yàn)椋?0月采>2月采>3月采>4月采>5月采>7月采>6月采>1月采>8月采>12月采>11月采>9月采，表明即使同一品種在不同月份采集，得分截然不同，表明采收月份對(duì)金花茶生化成分具有較大影響，其中以10月和2月采的得分較高。

2.4.2? 聚類(lèi)分析? 由圖3可知，當(dāng)閾值為13時(shí)，不同來(lái)源金花茶可分為5大類(lèi)。S1、S2和S24各為一類(lèi)，S1（無(wú)名金花茶）的特征為第1主成分得分最高，即其茶多酚、總黃酮、總多糖、蘆丁含量最高;S2（四季金花茶）的特征為第2主成分得分最高，表現(xiàn)為總多糖、蘆丁等含量較高;S24（金花茶10月采）的特征是總皂苷含量最高。S21、S22、S20、S3、S7、S16、S17、S18、S19聚為一類(lèi)，該類(lèi)樣品大部分為8年生金花茶，第1主成分得分較高，特征為茶多酚、總黃酮、蘆丁等含量較平均;S8、S9、S25、S26、S15、S4、S6、S11、S12、S5、S14、S10、S13、S23聚為一類(lèi)，該類(lèi)樣品主要為5年生金花茶，樣品特征為第2、第3或第4主成分得分較高，總皂苷和木犀草素含量較高。

3? 討論

3.1? 液相提取方法和色譜條件的優(yōu)化

本研究基于前人研究的方法[28-29]，進(jìn)一步比較了不同濃度（95%、70%、50%）乙醇提取溶劑和pH對(duì)4種黃酮的提取效果，結(jié)果以50%乙醇?0.1 mol/L鹽酸（10∶1）提取率高。考察了回流和超聲2種提取方法對(duì)成分提取率的影響，結(jié)果顯示，回流提取率略高于超聲提取，但雜質(zhì)明顯多于超聲提取，故選擇提取高效、操作更簡(jiǎn)便的超聲提取法。

參考牛廣俊[30]測(cè)定金花茶葉黃酮的液相方法，對(duì)被測(cè)成分進(jìn)行190～800 nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果4種黃酮成分在260 nm和360 nm附近均有最大吸收峰，但260 nm下雜質(zhì)峰吸收干擾大，因此選擇對(duì)待測(cè)組分干擾更少的360 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。同時(shí)考察了梯度洗脫以及不同流動(dòng)相（甲醇∶水，甲醇∶磷酸水，甲醇∶乙酸水）對(duì)色譜分離的影響，結(jié)果表明甲醇：磷酸水洗脫峰形優(yōu)于甲醇：水，且對(duì)待測(cè)峰分離效果優(yōu)于甲醇∶乙酸水，雜質(zhì)峰少，基線(xiàn)更穩(wěn)定，因此采用甲醇∶磷酸水為流動(dòng)相。與牛廣俊[30]的梯度洗脫方法相比，改進(jìn)流動(dòng)相，減少進(jìn)樣量，可以達(dá)到待測(cè)成分保留時(shí)間適中、分離較好的效果。

3.2? 不同來(lái)源金花茶葉生化成分含量分析

羅昭潤(rùn)等[31]研究認(rèn)為金花茶需經(jīng)5年栽培才能采摘加工，故本研究選擇5年及以上樹(shù)齡為研究對(duì)象。研究結(jié)果表明，5年生不同種的金花茶組（S1～S14）生化成分具有一定差異，無(wú)名金花茶引自越南，其蘆丁、茶多酚、總黃酮、總多糖、總皂苷含量均高于其他金花茶，四季金花茶次之，其次為顯脈金花茶、防城金花茶和凹脈金花茶。小果金花茶為金花茶的變種，僅分布于廣西南寧地區(qū)[32]，8種成分含量相對(duì)較低，與王坤等[33]發(fā)現(xiàn)從越南引種金花茶比廣西本地金花茶總黃酮等4種活性成分高的結(jié)果一致，說(shuō)明不同種的金花茶直接影響葉片的品質(zhì)。5年生不同表型防城金花茶（S7～S14）中S7（花多）、S9（花蕾大）和S8（花黃大）總皂苷含量達(dá)6.12%～7.30%，顯著高于其他表型金花茶，而葉肥厚和葉短圓表型的金花茶活性含量較低，與牛廣俊[30]研究的19類(lèi)金花茶葉寬、葉長(zhǎng)與品質(zhì)呈正相關(guān)性結(jié)果一致，均說(shuō)明葉表型影響金花茶活性成分，而表型受遺傳與環(huán)境因素雙重影響，有待進(jìn)一步探討與研究。

本研究對(duì)8年生防城金花茶（S15～S26）葉片成分含量做了動(dòng)態(tài)分析，4種生化活性成分含量順序?yàn)榭傇碥?總黃酮>茶多酚>總多糖，均在10月含量達(dá)到最高值，而蘆丁、山奈酚、木犀草素、槲皮素含量均較低，變化規(guī)律不明顯，對(duì)生產(chǎn)上的采收期具有參考價(jià)值。

3.3? 不同來(lái)源金花茶葉主成分分析與聚類(lèi)分析

基于化學(xué)計(jì)量學(xué)的主成分分析的綜合評(píng)分，常用于評(píng)價(jià)樣品綜合質(zhì)量[34-35]，本文率先建立了以8種成分為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分評(píng)價(jià)金花茶樣品的方法。5年生不同的種及表型間，無(wú)名金花茶和四季金花茶葉片品質(zhì)的綜合評(píng)分均比防城金花茶、凹脈金花茶、顯脈金花茶和小果金花茶高，即無(wú)名金花茶和四季金花茶相對(duì)于其他金花茶葉片品質(zhì)較優(yōu)。不同表型防城金花茶中，花表型較大、顏色較黃、花數(shù)量較多的類(lèi)型其葉片品質(zhì)更好。8年生防城金花茶不同月份采收中，2—4月和10月采收的葉片的總黃酮、茶多酚等含量較高，其綜合評(píng)分也較高，表明春季2—4月和秋季10月適合采收防城金花茶成熟葉，其品質(zhì)更優(yōu)，這與生產(chǎn)實(shí)際基本一致，從理論上解釋了春茶和秋茶口感好、品質(zhì)優(yōu)的原因。

聚類(lèi)分析是一種按數(shù)據(jù)內(nèi)在規(guī)律客觀合理地分類(lèi)的方法[26]，在閾值為13時(shí)，不同來(lái)源金花茶可分為5類(lèi)，S1、S2和S24各為一類(lèi)，綜合評(píng)分位于前三位，而5年生和8年生金花茶葉各聚為一類(lèi)，綜合評(píng)分靠后，與主成分分析結(jié)果基本類(lèi)似，說(shuō)明不同種、不同樹(shù)齡及采收時(shí)間對(duì)金花茶品質(zhì)均有影響，與前人研究結(jié)果基本一致[19， 33]。無(wú)名金花茶、四季金花茶和防城金花茶中花蕾大、花多、不抗寒、花黃且大的表現(xiàn)型的生化成分較優(yōu)，即通常稱(chēng)之為品質(zhì)較優(yōu)，可作為良種選育的材料。在采收時(shí)，應(yīng)注意按種源、樹(shù)齡分批處理，并加強(qiáng)采收時(shí)間管理，以保證加工原料的一致性。

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