七清敗毒散的藥效學試驗

王 飛,王 軍，侯會霞，王雅倩，邊小利，王虹雅，陳胡羚，李引乾*

(1.西北農林科技大學動物醫(yī)學院,陜西楊凌 712100；2.府谷縣動物疫病預防控制中心，陜西府谷 719400；3.陜西省漢中市動物疾病預防控制中心，陜西漢中 723000；4.陜西省府谷縣麻鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，陜西府谷 719400)

細菌性疾病的治療多采用抗菌藥和解熱藥，尤其是抗菌藥，然而抗菌藥的使用不當常常會導致細菌耐藥性的產(chǎn)生，在長期的使用中，不但會降低療效，影響動物自身免疫系統(tǒng)和身體健康，此外還可引起食品動物藥物殘留等問題[1-3]。不安全的動物性食品對人類健康會造成嚴重威脅，引起各種疾病，因此需要尋求更為科學、安全、綠色、高效的動物疫病防治手段。中藥源于天然物，用其治療細菌性疾病不會產(chǎn)生耐藥性，亦無藥物殘留，對于動物疾病的防治具有極大優(yōu)勢[4]。中藥的使用常常在不破壞動物組織器官的情況下，改善動物機體的內部生理環(huán)境，有利于提高動物的自身免疫力和健康水平，合理使用本身就具備預防許多疫病的功效。同時中藥作為治療藥使用，也可以降低成本，療效溫和，更加貼近動物福利法。七清敗毒散由生石膏、金銀花、魚腥、板藍根、忍冬和貫眾等中藥組成，具有清熱解毒，清溫涼血，敗毒燥濕等功效。為了評價七清敗毒散的藥效學，研究了七清敗毒散的解熱作用、抗炎作用和體外抑菌，對其藥效學進行研究，旨在為臨床應用提供參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 七清敗毒散(1 000 g/袋)，內蒙古潤龍生物科技有限公司產(chǎn)品，批號：20180602；二甲苯，廣東省化學試劑工程技術研究工發(fā)有限公司產(chǎn)品，批號：20180831；巴米爾阿司匹林泡騰片，阿斯利康制藥有限公司產(chǎn)品，批號：H32026200；牛肉膏，北京奧博興生物技術有限責任公司產(chǎn)品，批號：20180502；蛋白胨，北京奧博興生物技術有限責任公司產(chǎn)品，批號20170902；瓊脂，珠海迪爾生物工程有限公司產(chǎn)品，批號：2018第1400037；扶正解毒散，南京楠楓動物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號：20171201；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品，批號：180817。

1.1.2 主要儀器 BS-210S型電子分析天平，德國賽多利斯(Sartorius)股份公司產(chǎn)品；真空烘箱、離心機，上海手術器械廠產(chǎn)品；QL-901型漩渦振蕩器，其林貝爾儀器制造公司產(chǎn)品；RE 52-98旋轉蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有限公司產(chǎn)品；KQ5200超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；超凈工作臺、立式壓力蒸汽滅菌器，上海博迅實業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 實驗動物 昆明小鼠，體重18 g～22 g，購自西安交通大學實驗動物中心；家兔，體重2.0 kg～2.5 kg，西北農林科技大學科技大學實驗動物中心提供。所有實驗動物試驗前均觀察7 d，臨床檢查健康者即用于試驗。

1.1.4 受試菌株 大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌，由本實驗室分離并保存。

1.2 方法

1.2.1 解熱作用 試驗開始前，測量4次體溫，間隔1 h 1次，并挑選4次測量體溫均保持為38.0 ℃～39.6 ℃范圍內的家兔，且滿足4次測量中最高體溫和最低體溫之差小于0.4 ℃，供試驗用。采用蛋白胨發(fā)熱模型法觀察七清敗毒散的解熱作用，通過李宗鐸等[5]的研究方法觀察體溫變化。

將注射蛋白胨生理鹽水溶液1 h 后，其體溫上升超過0.5 ℃的家兔隨機分成5組，每組6只。5組分別為試驗組A1、試驗組A2、試驗組A3、陽性對照組B、陰性對照組C。使用兔灌胃導管給兔灌服，A1組灌服劑量8 g/kg的七清敗毒散水煎液(2 g生藥/mL)，A2組灌服劑量4 g/kg的七清敗毒散水煎液(1 g生藥/mL)，A3組灌服劑量2 g/kg的七清敗毒散水煎液(0.5 g生藥/mL)，B組以劑量為100 mg/kg的阿司匹林(濃度為25 mg/mL)作陽性對照[6]，C組以生理鹽水作為空白對照。給藥后5 h內每個1 h測量1次體溫，共5次。再對各測定點體溫變化Δ℃作方差分析[7]。

1.2.2 抗炎作用 將昆明小鼠，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。分別以60、30、15 g/kg七清敗毒散水煎液及200 mg/kg的阿司匹林水溶液、30 mL/kg的生理鹽水濃度給藥[8]。采用岳興如等[9]的方法，觀察對二甲苯致小鼠耳廓炎癥水腫的抑制作用。

1.2.3 體外抑菌作用

1.2.3.1 牛肉膏湯液體培養(yǎng)基的制備 制備pH為7.2～7.6的牛肉膏湯液體培養(yǎng)基[10]。

1.2.3.2 藥液的制備 將8只試管編號后高壓滅菌處理，在超凈工作臺中，每管加入2 mL無菌生理鹽水，1號管加入2 mL七清敗毒散水煎液(2 g生藥/mL)，并混勻；吸取1號管中的2 mL溶液加入2號管，并混勻；再次吸取2號管中的2 mL溶液加入3號管。逐次加入至7號管，吸取7號管中的2 mL溶液，并棄去，8號管保持不變，為對照組。按此法，1號至7號試管，藥液稀釋倍數(shù)為21、22、23、24、25、26、27。1號管至7號管濃度依次為1、0.50、0.25、0.125、0.063、0.032、0.016 g/mL[11]。

1.2.3.3 菌株的接種與培養(yǎng) 采用李藹文等[12]的抑菌試驗方法，分組接種大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌，觀察不同濃度試管，使細菌不生長的最低藥物濃度即為藥物對該菌株的最小抑菌濃度(MIC)。

2 結果

2.1 解熱作用觀察

七清敗毒散對蛋白胨所致家兔發(fā)熱的影響結果見表1和圖1。

表1 七清敗毒散對家兔的解熱效果

圖1 七清敗毒散對致熱家兔體溫的影響

由表1和圖1可知，阿司匹林作為陽性對照組能顯著對抗蛋白胨的升溫作用，與生理鹽水組比較，差異極顯著(P<0.01)。七清敗毒散各試驗組也可明顯抑制蛋白胨的升溫作用，與生理鹽水組比較，2 g/kg劑量組差異顯著(P<0.05)、其余兩組差異極顯著(P<0.01)；與阿司匹林組比較，各劑量組均無顯著差異(P>0.05)；2 g/kg劑量組與4 g/kg劑量組差異顯著(P<0.05)，2 g/kg劑量組與8 g/kg劑量組差異極顯著(P<0.01)，但是4 g/kg劑量組與8 g/kg劑量組無顯著差異(P>0.05)。以上結果表明七清敗毒散具有明顯的解熱作用，且呈一定的劑量關系。

2.2 抗炎作用觀察

七清敗毒散的抗炎作用結果見表2。

表2 七清敗毒散對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

由表2可以看出，七清敗毒散和阿司匹林對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用。阿司匹林作為陽性對照組，與生理鹽水組比較，對抗二甲苯引起的小鼠耳腫脹具有極顯著(P<0.01)的抑制作用；七清敗毒散各試驗組也可明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹，與生理鹽水組比較，低劑量組差異不顯著(P>0.05)、中劑量組差異顯著(P<0.05)、高劑量組差異極顯著(P<0.01)；低劑量組與中劑量組差異不顯著(P>0.05)，低劑量組與高劑量組差異極顯著(P<0.01)，中劑量組與高劑量組為差異顯著(P<0.05)。以上結果表明七清敗毒散具有明顯的抗炎作用，且呈一定的劑量關系。

2.3 體外抑菌作用觀察

七清敗毒散對大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌3種菌的MIC結果見表3。

表3 七清敗毒散對3種病原菌的MIC

表3結果顯示，七清敗毒散對沙門氏菌的最小抑菌濃度最高，大腸埃希氏菌的最小抑菌濃度次之，金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度最小。即七清敗毒散對金黃色葡萄球菌的作用最強。

3 討論

七清敗毒散是以主要成分為生石膏、金銀花、魚腥草、板藍根、忍冬藤、貫眾、甘草等中藥制得的中藥復方散劑，其主要功效有清熱解毒，清溫涼血，敗毒燥濕。臨床上適應高熱神昏，大熱躁動，口渴、昏狂、發(fā)斑、舌降、脈數(shù)等，凡溫病所致的熱性病癥、時疫等?？捎糜谪i高熱綜合征、口蹄疫、家畜流感(正黏病毒，RNA病毒)、濕熱瀉(豬傳染性胃腸炎病毒)、豬瘟等傳染性疾病。使用方法主要采用預防添加法，也叫三五式添加或添加法，即添加用藥3 d停止2 d，添加用藥5 d停止3 d。

本試驗以阿司匹林作為陽性對照組對七清敗毒散的解熱作用進行考察。結果顯示，七清敗毒散可明顯抑制蛋白胨的升溫作用，表明七清敗毒散具有一定的解熱作用。七清敗毒散的抗炎試驗研究是利用二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型，通過測定小鼠耳廓腫脹抑制率來評價抗炎效果。試驗結果表明，七清敗毒散和阿司匹林對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用，且七清敗毒散的抗炎作用呈一定的劑量關系。七清敗毒散抑菌試驗結果表明，七清敗毒散對大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，且對金黃色葡萄球菌的抑制效果較強。

七清敗毒散是一種中藥復方制劑，其成分無毒，且配方合理，具有良好的解熱、抗炎和抑菌效果。中醫(yī)中藥是我國在世界上具有重要影響的學科，研發(fā)中藥新劑型具有重要意義[13]。中藥制劑由于其獨特的抑菌特點，已有研究證明中藥抗菌作用良好[14-16]。因此，在當今抗生素應用泛濫、耐藥性越來越嚴重的時代[17]，抗菌中藥復方制劑值得推廣應用。