麻布七中1個(gè)新的二萜類生物堿

王 菲，張 嬌，李玉澤，張東東，張化為，黃文麗，羅定強(qiáng)，宋小妹*

1.陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西 西安 710065

2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046

太白草藥中以“七”命名的草藥稱為太白七藥，其可謂太白山藥物資源的一大特色，也是珍貴的民族文化遺產(chǎn)。麻布七恰好為七藥之一。麻布七又名高烏頭，為毛茛科烏頭屬AconitumL.植物高烏頭Aconitum s inomontanumNakai.的根[1]。作為一味民間的常用草藥，其藥性味苦、辛。具有活血消腫、理氣止痛、祛風(fēng)除濕的功效。目前從麻布七中分離得到26 個(gè)二萜類生物堿[2]，主要為C18、C19和C20型[3]，多具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗癲癇、抗寄生蟲和改善心血管功能等生物活性[4-6]。為了開發(fā)利用本植物資源，對(duì)麻布七的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從三氯甲烷提取部位中分離得到3 個(gè)化合物（圖1），分別鑒定為 1α,11α,15β-trihydroxylatisine（1）、demethylenedelcorine（2）、denudatine（3）。其中化合物1 為1 個(gè)新的二萜類生物堿，命名為光翠雀堿B?；衔? 為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Burker AVANCE 400 型核磁共振儀（瑞士Burker 公司）；Waters e2695 高效液相色譜儀（PDA，美國(guó)Waters 公司）；ZF-1 三用紫外線分析儀（上海金鵬分析儀器有限公司）；OB204 電子分析天平（萬分之一，瑞士 METTLER TOLEDO 公司）；KQ-500DE 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；島津LC-6AD 半制備液相色譜儀（檢測(cè)器SPD-20A，日本Shimadzu 公司）；柱色譜硅膠（100～200 目）、薄層色譜用硅膠G（青島海浪硅膠干燥劑有限公司）；YMC-Pack R&D ODS-A 半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，日本YMC 公司）；EYELAN-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化器械）；HH-2 水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；高效液相色譜甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；娃哈哈純凈水；分析甲醇、二乙胺、丙酮、三氯甲烷、石油醚（天津科密歐公司）；碘化鉍鉀溶液顯色劑。

麻布七藥材于2016年7月采自陜西省太白山，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)王繼濤教授鑒定為毛茛科烏頭屬植物高烏頭A.sinomontanumNakai.的干燥根。標(biāo)本（20160727）存放于陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥標(biāo)本室。

2 提取與分離

稱取麻布七藥材5.0 kg，粉碎，10 倍量80%乙醇80 ℃回流提取3 次，每次1.5 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮得浸膏。將浸膏分散于鹽酸水溶液，用稀鹽酸調(diào)至pH 0.8，石油醚萃取酸水液，萃取后水相用氨水調(diào)至pH 10.26，用三氯甲烷萃取堿水相得到總生物堿。

取總生物堿，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮-二乙胺（50∶1∶0.1～1∶1∶0.1）梯度洗脫，得到2個(gè)部分（Fr.1～2）。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色譜（50∶1∶0.1～1∶1∶0.1），采用丙酮進(jìn)行重結(jié)晶得到化合物3（20 mg）。Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜（20∶1∶0.1～1∶1∶0.1）和半制備高效液相色譜（60%甲醇）得到化合物1（15 mg）和2（15 mg）。結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～3 的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1－3

化合物1：白色無定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類化合物。IR（KBr）有羥基吸收3451 cm-1和烯烴1650 cm-1；＋20.6°（c0.88，MeOH）。HR-ESI-MS顯示m/z330.206 9 [M＋H]+，結(jié)合NMR 數(shù)據(jù)可知分子式為C20H27NO3。比較化合物1 與文獻(xiàn)報(bào)道[7]的N(19)-en-denudatine 的NMR 數(shù)據(jù)，除了C-1、C-2、C-10、C-19 這4 個(gè)位置的碳信號(hào)外，其余的NMR 光譜特征都基本相似，化合物N(19)-endenudatine 的C-1 (δC27.2),C-2 (δC21.2),C-10 (δC45.8) 和C-19 (δC168.6) 的化學(xué)位移處于高場(chǎng)，而化合物1 的C-1 (δC71.0),C-2 (δC32.2),C-10 (δC51.8) 和C-19 (δC172.5) 處于低場(chǎng)（表1），推測(cè)化合物1 有N＝CH 和1-OH 基團(tuán)。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) 中δH1.00 (3H,s) 推測(cè)該化合物可能含有叔甲基，δH7.22 (1H,brs) 推測(cè)該化合物含有1個(gè)-N＝CH 基團(tuán)，δH5.18 (brs) 和δH4.93 (brs) 推測(cè)該化合物具有1 個(gè)-C＝CH 基團(tuán)。13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 譜顯示有20 個(gè)碳共振信號(hào)，其中δC154.0 和109.9 可歸屬于-C＝CH 的信號(hào)，δC172.5可歸屬為-N＝CH 基信號(hào)[8]，δC77.7,73.8 和71.0 為3 個(gè)連氧的碳信號(hào)。綜上信息，該化合物為C20二萜類生物堿[9]。為了準(zhǔn)確確定化合物1 的結(jié)構(gòu)，對(duì)其進(jìn)行1H-1H COSY、HSQC、HMBC 和NOESY 的2D-NMR 實(shí)驗(yàn)。在HMBC 譜圖中（圖2），H-2 (δH1.35,1.81),H-3 (δH1.35,1.54) 與δC71.0 相關(guān)，H-1(δH4.13) 與C-2 (δC32.2),C-3 (δC35.1) 相關(guān)，可推測(cè)δC71.0 為C-1 的碳信號(hào)，表明C-1 與-OH 相連；H-9 (δH1.39),H-13 (δH2.97) 與C-11 (δC68.8) 相關(guān)，H-11 (δH3.29) 與C-12 (δC48.1),C-13 (δC26.5)相關(guān)，推測(cè)11 位含有-OH；H-7 (δH2.04),H-9 (δH1.39),H-17 (δH5.18,4.94) 與C-15 (δC77.7) 相關(guān)以及H-15 (δH4.22) 與C-14 (δC28.4),C-8 (δC46.3),C-9 (δC56.4),C-16 (δC154.0) 和C-17 (δC109.9) 相關(guān)，推測(cè)15 位可能含有1 個(gè)-OH；進(jìn)一步確認(rèn)該化合物與N(19)-en-denudatine 結(jié)構(gòu)相近，只是C-1 位上多連接了1 個(gè)-OH。因此確定化合物1 的平面結(jié)構(gòu)為1,11,15-trihydroxylatisine。從文獻(xiàn)報(bào)道[7]的N(19)-en-denudatine 數(shù)據(jù)可知H-5、H-7、H-9 為β構(gòu)型，再結(jié)合化合物1 的NOESY 譜圖（圖2），通過H-1/H-9β、H-7/H-11/H-13/H-14β/H-20 的相關(guān)信號(hào)，推斷出1-OH 和11-OH 為α 構(gòu)型；通過H-15/H-14α的相關(guān)信號(hào)以及H-14 (δH1.14,2.00) 與N(19)-endenudatine 的H-14 (δH1.21,1.55) 基本一致，推斷出15-OH 為β 構(gòu)型。綜上所述，化合物1 的結(jié)構(gòu)鑒定為1α,11α,15β-trihydroxylatisine，經(jīng)Sci-Finder 檢索，為1 個(gè)新化合物，命名為光翠雀堿B。

表1 化合物1 的1H-NMR、13C-NMR 和HMBC 數(shù)據(jù)Table 1 1H-NMR,13C-NMR,and HMBC data of compound 1

圖2 化合物1 的HMBC 和NOSEY 相關(guān)信號(hào)Fig.2 Key HMBC and NOSEY correlations of compound 1

化合物2：白色無定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類。ESI-MS 顯示m/z468.291 4 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 1.02 (3H,t,J= 7.1 Hz,-N-CH2CH3),2.77 (1H,m,-N-CH2CH3),2.88 (1H,m,-N-CH2CH3),3.40 (3H,s,-OCH3),3.35 (3H,s,-OCH3),3.34 (3H,s,-OCH3),3.32 (3H,s,-OCH3),1.51 (1H,s,H-5),4.50(1H,d,J= 3.6 Hz,H-6),1.60 (1H,dd,J= 5.8,16.2 Hz,H-15a),2.50 (1H,d,J= 12.0 Hz,H-19a),2.65(1H,d,J= 12.0 Hz,H-19b)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 83.3 (C-1),25.2 (C-2),32.5 (C-3),37.4(C-4),53.7 (C-5),82.1 (C-6),54.6 (C-7),77.0 (C-8),46.3 (C-9),44.8 (C-10),48.4 (C-11),38.8 (C-12),77.4(C-13),79.5 (C-14),79.3 (C-15),88.1 (C-16),67.3(C-17),80.6 (C-18),55.0 (C-19),14.7 (-N-CH2CH3),51.8 (-N-CH2CH3),56.6 (1-OCH3),58.1 (14-OCH3),59.8 (16-OCH3),57.8 (16-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10]，故鑒定化合物2 為demethylenedelcorine。

化合物3：白色無定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 1.03 (3H,t,J= 7.1 Hz,-N-CH2CH3),2.52 (1H,m,-N-CH2CH3),2.68(1H,m,-N-CH2CH3),0.70 (3H,s,18-CH3),5.18 (1H,t,J= 1.9 Hz,-C=CH2),4.93 (1H,t,J= 2.1 Hz,-C=CH2)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 41.7(C-1),24.2 (C-2),29.2 (C-3),35.3 (C-4),54.0 (C-5),21.9 (C-6),43.6 (C-7),47.0 (C-8),54.6 (C-9),45.2(C-10),73.4 (C-11),48.7 (C-12),25.8 (C-13),27.7(C-14),79.1 (C-15),154.7 (C-16),110.3 (C-17),27.7(C-18),59.0 (C-19),73.5 (C-20),14.1 (-N-CH2CH3),52.1 (-N-CH2CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物3 為denudatine。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突