維吾爾藥大戟脂中2個(gè)新的三萜

趙寧東，宋 玉，楊寶嘉，郝小江*，李順林*

1.文山學(xué)院化學(xué)與工程學(xué)院，云南 文山 663000

2.中國科學(xué)院昆明植物研究所 植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201

大戟脂（euphorbium）為多脂大戟Euphorbia resiniferaBerg.的樹脂狀分泌物，干燥后成暗黃色或黃棕色，其粉末具有強(qiáng)烈的刺激性?！蹲⑨t(yī)典》記載異名為排日非云?！吨腥A草本》新疆維吾爾藥卷中記載大戟脂用于癱瘓、面癱、昏迷、抽搐、顫動(dòng)、坐骨神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)疼痛、腹水、腸梗阻、白內(nèi)障等疾病的治療[1]。大戟脂主要的化學(xué)成分為大環(huán)二萜和三萜，大環(huán)二萜包括瑞香烷型、續(xù)隨子烷型、巨大戟烷型和12-去氧的巴豆烷型；三萜主要的類型為大戟烷型、甘遂烷型及相應(yīng)的降三萜；另外還發(fā)現(xiàn)了二降倍半萜等類型[2-11]。其中大環(huán)二萜生源途徑由焦磷酸香葉基香葉酯通過首尾環(huán)合而成，相比于三萜，大環(huán)二萜在大戟科中含量較低[12]。為了進(jìn)一步研究大戟脂的化學(xué)成分，利用現(xiàn)代分離技術(shù)和光譜分析方法對(duì)其進(jìn)行化學(xué)成分研究。從大戟脂中分離得到了2 個(gè)化合物（圖1），分別鑒定為大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮（eupha-8-ene-3,25-diol-24-chloro-7-one，1）和22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮（22,23,24,25,26,27-sexnoreupha-8-ene-20-ol-3,7-dione，2）。其中化合物1 為新的三萜，命名為euphoritriol A，化合物2 為新的降三萜，命名為euphoritriol B。

圖1 化合物1 和2 的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compounds 1 and 2

1 儀器與材料

Jasco P-1020 旋光儀、Aglient 1290 UPLC/6540 Q-TOF 液相色譜/四極桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國安捷倫科技公司）；Shimadzu UV-2401A 紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；Tenor 27 紅外光譜儀（德國Brucker 公司）；Bruker DRX-500 MHz 超導(dǎo)核磁共振共振儀（德國Brucker 公司）；Agilent 1100 和1200 HPLC（美國安捷倫科技公司）。

制備柱Waters X-Select CSH Prep RP C18（150 mm×19 mm，5 μm，美國Waters 公司）。硅膠、GF254薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）；凝膠Sephadex LH-20（40～70 μm，瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB 公司）；反相填充材料Lichroprep RP-18 gel（40～63 μm，德國默克公司）。

藥材大戟脂2016年7月購于新疆藥材市場(chǎng)。由新疆維吾爾醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校買買提努爾艾合提教授鑒定為多脂大戟E.resiniferaBerg.的樹脂狀分泌物，標(biāo)本（KUN No.1010725）保存于中國科學(xué)院昆明植物研究所標(biāo)本館。

2 提取與分離

大戟脂10 kg，粉碎后用甲醇回流提取3 次，減壓回收溶劑濃縮得浸膏，將浸膏用水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取。醋酸乙酯層（2.3 kg）經(jīng)過硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脫，分為7 個(gè)部分A～G。

E 部分（210 g）通過反相C18柱色譜，甲醇-水（3∶7～9∶1）梯度洗脫，得到23 個(gè)部分E-1～E-23。E-5 部分（8 g）經(jīng)過凝膠（甲醇洗脫）純化，分為2 部分E-5a～E-5b，將E-5b 用凝膠（丙酮洗脫）純化，然后用制備HPLC 純化[乙腈-水（66∶34），體積流量10 mL/min]，得到6 個(gè)部分E-5b1～E-5b6，其中E-5b6 經(jīng)過硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（200∶1～50∶1）梯度洗脫，得到化合物2（1 mg）。E-9 部分（5 g）經(jīng)過凝膠柱色譜（甲醇洗脫），再經(jīng)制備HPLC 純化[乙腈-水（66∶34），體積流量10 mL/min]，得到化合物1（70 mg，tR＝42 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

1H-NMR 數(shù)據(jù)（表1）顯示了三萜特征的8 個(gè)甲基和1 個(gè)連氧次甲基氫信號(hào)，分別為7 個(gè)季碳甲基信號(hào) [δH0.73,0.86,0.95,0.97,1.03,1.27,1.29 (各3H,s)]，1 個(gè)仲碳甲基信號(hào) [δH0.84 (3H,d,J= 6.1 Hz)]，和1 個(gè)連氧次甲基信號(hào) [δH3.26 (1H,dd,J=11.6,4.5 Hz)]。13C-NMR 結(jié)合DEPT 譜（表1）顯示了三萜的30 個(gè)碳信號(hào)，包括8 個(gè)甲基碳信號(hào)、9 個(gè)亞甲碳信號(hào)、5 個(gè)次甲基信號(hào)（包括1 個(gè)連氧的次甲基碳信號(hào)）、7 個(gè)季碳信號(hào)（包括2 個(gè)sp2雜化碳信號(hào)，1 個(gè)連氧的季碳信號(hào)）和1 個(gè)羰基碳信號(hào)。結(jié)合從大戟脂中已報(bào)道的三萜，化合物1 的四環(huán)三萜碳骨架與sooneuphanone D[13]相同，C-17 位側(cè)鏈與ganoderitriol M[14]的C-17 位側(cè)鏈僅在C-24 位的取代基不同，13C-NMR 中C-24（δC74.5）的化學(xué)位移值明顯向高場(chǎng)移動(dòng)δ5.1，結(jié)合質(zhì)譜顯示相對(duì)分子質(zhì)量m/z492，與ganoderitriol M 結(jié)構(gòu)中C-24 位為羥基取代相對(duì)分子質(zhì)量相差18，所以推斷C-24 位上的羥基被氯原子取代，并且HMBC 譜（圖2）中CH3-26 [δH1.27 (3H,s)]、CH3-27 [δH1.29 (3H,s)] 與C-24 (δC74.5) 相關(guān)證明了以上推斷。

化合物1的相對(duì)構(gòu)型與sooneuphanone D一致[13]。H-3 [δH3.26 (1H,dd,J= 11.6,4.5 Hz)] 說明3-OH 為β 構(gòu)型[15]。ROESY 譜（圖3）顯示的相關(guān)信號(hào)有H-3/H-5、H-3/CH3-28、CH3-29/CH3-19、CH3-19/H-11β、CH3-18/H-11α、CH3-30/H-17、CH3-30/H-16β，同時(shí)缺少CH3-18 和CH3-21 相關(guān)，說明化合物1 為大戟烷型三萜[16]。旋光也說明了化合物1 為大戟烷型三萜[13,16]。綜上所述，將化合物1鑒定為大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮，經(jīng)檢索為新化合物，命名為euphoritriol A。

表1 化合物1 和2 的1H-和13C-NMR 數(shù)據(jù) (500/125 MHz,CDCl3)Table 1 1H and 13C NMR spectroscopic data of compounds 1 and 2 (500/125 MHz,CDCl3)

圖2 化合物1 和2 主要的1H-1H COSY 和HMBC 相關(guān)圖Fig.2 1H-1H COSY and key HMBC correlations of compounds 1 and 2

圖3 化合物1 和2 主要的ROESY 相關(guān)圖Fig.3 Key ROESY correlations of compounds 1 and 2

比較化合物2 和1 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù)，13C-NMR（表1）顯示了24 個(gè)碳，說明化合物2 為降三萜，結(jié)構(gòu)中有2 處不同，化合物2 的C-17位側(cè)鏈降解了6 個(gè)碳，轉(zhuǎn)化為2-羥基乙基取代基。HMBC 譜（圖2）中CH3-21 [δH1.18 (3H,d,J= 5.1 Hz)] 與C-20 (δC70.9),C-17 (δC51.1) 相關(guān)，H-17[δH1.69 (1H,m)]與C-20 (δC70.9),C-21 (δC24.1) 相關(guān)證明了2-羥基乙基取代基連在C-17 位。另一不同之處為3-OH 被氧化為羰基，HMBC 譜中諧二甲基CH3-28 [δH1.09 (3H,s)] 和C-29 [δH1.13 (3H,s)]與C-3 (δC214.5) 相關(guān)證明了C-3 為羰基。

ROESY 譜（圖 3）顯示的相關(guān)信號(hào)有H-5/CH3-28 、 CH3-29/CH3-19 、 CH3-19/H-6β 、CH3-19/H-11β 、 CH3-30/H-15β 、 CH3-30/H-17 、CH3-18/H-16α 證明H-5、CH3-28、CH3-18 為α構(gòu)型，CH3-29、CH3-30 為β構(gòu)型。由于CH3-21 與H2-16 和H2-12 的相關(guān)信號(hào)重疊，并缺少20-OH 信號(hào)，所以C-20 的構(gòu)型不能確定[17]。綜上所述，將化合物2 鑒定為22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮，為新化合物，命名為euphoritriol B。

4 討論

從維吾爾藥大戟脂中分離得到2 個(gè)新的三萜，其中化合物1 為新的三萜，化合物2 為新的降三萜，并且C-17 側(cè)鏈降解了6 個(gè)碳，通過核磁數(shù)據(jù)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)確定了這2 個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)及相對(duì)構(gòu)型，可通過計(jì)算ECD 進(jìn)一步確定化合物1 中C-24 位的絕對(duì)構(gòu)構(gòu)型，以及單晶X-射線衍射確定化合物2 的絕對(duì)構(gòu)型。大戟屬植物白色的乳汁中富有大量的三萜，文獻(xiàn)報(bào)道從大戟脂中鑒定的大戟烷型和甘遂烷型三萜具有抗腫瘤活性[8]。本研究從維吾爾藥大戟脂中鑒定的2 個(gè)新的三萜在抗腫瘤方面有潛在的研究價(jià)值，為后續(xù)活性的篩選提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，為藥材大戟脂的化學(xué)成分提供了理論依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突