卷煙廠在CNAS認證中對煙堿檢測方法的驗證

＊江天成

（貴州中煙工業(yè)有限責任公司貴定卷煙廠 貴州 551300）

1.方法概述

按照GB/T 19609-2004《卷煙用常規(guī)分析用吸煙機測定總粒相物和焦油》的要求使用吸煙機抽吸卷煙樣品并收集主流煙氣，將主流煙氣的總粒相物溶解于含有內標物的萃取劑中，用氣相色譜法測定萃取液的煙堿含量，計算總粒相物中的煙堿含量。

2.方法驗證的定義及解釋

方法驗證指的是實驗室直接引用標準的情況。要注意版本的查新，在引用該方法之前，實驗室應對自身的能力進行驗證，不僅要從人員、設備、環(huán)境方面，還需通過實驗提供的可靠結果如精密度、線性范圍、檢出限、定量限等方法特性指標來證明結果的準確性和可靠性。

3.方法驗證實施步驟及過程記錄

(1)人員能力評價

從事本檢測項目的人員情況及能力評價如表1所示。

表1 人員情況及能力評價表

(2)設備符合性評價

設備名稱/型號/檢測參數/測量范圍/精密度/標準要求/計量溯源狀況/符合性評價結論如表2所示。

表2 設備評價表

試劑、耗材、標準物質確認如表3所示。

表3 試劑、耗材、標準物質評價表

續(xù)表

(3)檢測方法所依據標準的現行有效性確認

通過全國標準信息公共服務平臺查詢，本檢測方法依據的標準GB/T 23355-2009《卷煙 總粒相物中煙堿的測定氣相色譜法》于2009年3月26日發(fā)布，2009年6月1日開始實施，目前狀態(tài)為“現行”。

環(huán)境設施及條件評價如表4所示：

表4 環(huán)境設施及條件評價表

(4)方法特性驗證

①方法的選擇性和基質效應分析。分析7個方法空白樣品（一定數量的代表性空白樣品），檢查在目標分析物（煙堿）出現的區(qū)域是否有干擾峰。表5為驗證情況記錄。

表5 干擾峰情況記錄表

本實驗室檢測煙氣煙堿含量時，出峰位置在6.5min附近，內標物出峰位置在21.3min附近，經7次方法空白實驗，未發(fā)現與待測物（煙堿）、內標物出峰位置重疊或接近的干擾峰。

以上實驗證明，本檢測方法在應用中具備良好的基質效應。

②方法檢出限及定量限驗證。采用空白加標樣品標準偏差法評價方法的檢出限，具體操作方法為：

A.配制6 個煙堿濃度含量分別為0.0959 mg/ml、0.1918mg/ml、0.2877mg/ml、0.3836mg/ml、0.4795mg/ml、0.5754mg/ml的標準溶液制作標準曲線；B.以日常檢測樣品中檢測到的最低濃度值制備1個空白加標樣品，對該樣品進行10次重復檢測；C.計算空白加標樣品重復檢測結果的標準偏差；D.按空白測試結果平均值加三倍標準偏差值的方式計算方法的檢出限，以10倍標準偏差作為方法的定量限，驗證結果見表6。

表6 方法檢出限、定量限情況記錄表

③靈敏度驗證。A.以標準物質配制兩個濃度分別為0.0959mg/mL、0.5754mg/mL的空白加標樣品作為驗證測試樣品；B.分別對兩個測試樣品進樣測試后處理譜圖；C.靈敏度計算：

式中，S：靈敏度；C1：高濃度樣品的檢測結果濃度值；C2：低濃度樣品的檢測結果濃度值；A1：低濃度樣品峰面積；A2：濃度樣品峰面積。

驗證結果數據A1、A2、C1、C2分別為199.88、1283.86、0.092、0.582，計算得靈敏度S為2212.2。

④線性范圍。按GB/T 23355-2009的要求制作標準曲線，直接引用標準曲線譜圖和數據，從儀器給出的數值可知，該曲線的相關系數為0.99999，證實此標準曲線在最低和最高濃度點區(qū)間的線性是穩(wěn)定的，且該標準曲線最低和最高濃度點區(qū)間可以完全覆蓋本質監(jiān)站所需檢測樣品的濃度范圍，位于標準曲線最低和最高濃度點區(qū)間之外的線性可以忽略。

由此可以得出結論，方法的線性范圍符合檢測需求。

⑤測量范圍、方法回收率、重復性、正確性驗證

A.進行不同濃度空白加標樣品的回收率實驗，證實是否符合GB/T 27417-2017附錄A表A.1中規(guī)定的方法回收率偏差范圍，選取日常檢測樣品中最低含量值作為驗證實驗的最低濃度點并編號1、選取日常檢測樣品中最高含量值作為最高濃度點并編號3、再選取二者的平均值左右作為中間濃度點并編號2，每個濃度分別配制1個空白加標樣品，分別重復進樣6次。

B.連續(xù)對以上三個樣品進行重復檢測，每個樣品重復檢測6次，得出的數據見表7。因在本報告中驗證了空白響應值為0，因此回收率直接使用實測濃度平均值計算：

表7 回收率、重復性、正確性驗證情況記錄表

式中，R：某個濃度水平的回收率；

C0：某個濃度水平理論濃度值（加標濃度值）。

a.計算每個濃度點的變異系數，參照GB/T 27417-2017附錄B中表B.1來判斷變異系數是否處于可接受水平：

式中，CV：變異系數（相對標準偏差）；

S：某個濃度水平的樣本標準偏差；

b.根據以上數據，參照GB/T 27417-2017附錄A中表A.1及附錄B表B.1，可以判斷本檢測方法在常用檢測濃度水平范圍的回收率、變異系數均處于可接受水平，同時也證實了本檢測方法在此測量范圍內的結果具有良好的正確度。

以下為GB/T 27417-2017附錄A中表A.1及附錄B表B.1摘錄內容：

表A.1 方法回收率偏差范圍

表B.1 實驗室內變異系數

⑥再現性驗證

準備日常檢測中同一牌號同一批次樣品18個。每個檢測人員每天檢測3個樣品，每個樣品測定1次，連續(xù)或間隔（確保時間不同即可）進行3天。2個檢測人員3天時間，共得到18個測試結果。檢測結果數據如下：A:0.80，0.83，0.83，0.87，0.85，0.88，0.87，0.82，0.87；C:0.83，0.84，0.82，0.88，0.86，0.88，0.86，0.86，0.88。

算得平均值x-=0.85，再現性值R=0.024。

再現性標準偏差計算方式：

式中，SR：再現性標準偏差；n：每系列測試中的樣品數量，本次實驗n=3；m：系列數量，本次實驗m=2人×3天=6；xi：單次測量結果；：18次測量結果的平均值。

根據GB/T 27417-2017附錄B表B.1中的實驗室內變異系數來評價再現性水平：

根據變異系數結合GB/T 27417-2017附錄B表B.1判斷，此方法的再現性處于可接受水平。

⑦不確定度分析另外報告討論，驗證合格，此處不做分析。

(5)驗證結論

根據以上材料，證明本部門具備開展本檢測方法的全部條件，且已可正確應用本檢測方法，可以正常開展檢測。