環(huán)狀RNA與消化系統(tǒng)腫瘤的研究現(xiàn)狀

毛曦政，燕海姣，吳昌平

(常州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 常州 213000)

1976年Sanger等[1]首次在研究中提出了“環(huán)狀RNA”的概念，該研究發(fā)現(xiàn)類病毒是一種單鏈共價閉合環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)分子，在某些高等植物中具有致病性。近年來，隨著第二代高通量測序、生物信息學等生物技術的迅速發(fā)展，科學家們開始對circRNA進行新一輪的深入研究。circRNA與線性RNA最大的不同在于circRNA分子的3′端與5′端連接在一起形成了閉環(huán)結(jié)構(gòu)[2]。關于circRNA轉(zhuǎn)運和降解的方式僅有少量文獻提及。特殊的閉環(huán)結(jié)構(gòu)賦予了circRNA高豐度、保守性、穩(wěn)定性、特異性等特點。同時，進一步研究也將circRNA的生物學功能逐一揭示。目前已知的circRNA功能主要包括充當微RNA(microRNA，miRNA)的海綿，與RNA結(jié)合蛋白(RNA binding proteins，RBPs)相互作用，與前體信使RNA(precursor messenger RNA，pre-mRNA)競爭，作為蛋白質(zhì)的翻譯模板以及基因調(diào)控等。這些功能在包括腫瘤在內(nèi)的多種人類疾病中起著至關重要的作用。在消化系統(tǒng)腫瘤中，circRNA既有促進腫瘤進展的作用，也有抑制腫瘤進展的作用?，F(xiàn)就circRNA在各種消化系統(tǒng)腫瘤中的研究現(xiàn)狀予以綜述。

1 circRNA的生物形成、轉(zhuǎn)運及降解

目前的研究證實，circRNA的形成模板主要有外顯子circRNA、內(nèi)含子circRNA以及外顯子-內(nèi)含子circRNA三種[2-4]。circRNA由許多蛋白質(zhì)編碼基因產(chǎn)生，大部分積聚在細胞質(zhì)中，但circRNA的定位或核輸出的調(diào)控機制目前尚不清楚。Huang等[5]研究發(fā)現(xiàn)，果蠅DExH/D-box解旋酶Hel25E的缺失導致長環(huán)RNA(>800核苷酸)在細胞核中積累，而并非短環(huán)RNA；進一步通過編碼兩個同源的Hel25E-UAP 56(DDX39B)和URH 49(DDX39A)實驗發(fā)現(xiàn)，UAP 56(DDX39B)和URH 49(DDX39A)的缺失分別導致長、短周期RNA在細胞核中的富集，因此Hel25E的同源基因也同樣調(diào)控著circRNA的定位，進一步表明成熟circRNA的長度是決定其核輸出方式的一個重要因素。

circRNA主要存在于細胞質(zhì)，circRNA是否降解在很大程度上仍未可知，但也有少數(shù)研究證據(jù)表明circRNA的降解是真實存在的。如Lasda和Parker[6]研究發(fā)現(xiàn)，在細胞培養(yǎng)液中回收的細胞外囊泡中含有circRNA，因此通過細胞外囊泡的釋放，細胞從細胞外空間被排出，這可能是細胞清除circRNA的一種機制。

2 circRNA的主要特征

在最初發(fā)現(xiàn)circRNA時，人們普遍認為circRNA只是基因轉(zhuǎn)錄拼接過程中一個微小的“錯誤”，但隨著對circRNA研究的深入發(fā)現(xiàn)，circRNA中的3′端和5′端形成的共價閉合連續(xù)環(huán)使其無法被RNA外切核酸酶降解，這一特性賦予了circRNA極強的穩(wěn)定性，并使circRNA能大量存在于機體中，且circRNA還具有種類繁多的特性[7]。Okholm等[8]在457個膀胱癌樣本中發(fā)現(xiàn)了38 365個獨特的circRNA。大多數(shù)的circRNA在生物進化過程中仍高度保守[9]。Werfel等[10]通過分析人類、大鼠和小鼠心肌的circRNA發(fā)現(xiàn)，約10%的circRNA在這三個物種中具有保守性。

circRNA不僅具有跨物種的保守性，也具有特異性，其中一部分circRNA只存在于特定的細胞或組織中。Piwecka等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Cdr1as(一種與多種癌癥和神經(jīng)性疾病相關的circRNA分子)在神經(jīng)元和神經(jīng)突觸中高表達(神經(jīng)元內(nèi)數(shù)百個拷貝)，但在神經(jīng)膠質(zhì)細胞中卻不存在。因此，通過circRNA的特異性，可以找出特定circRNA與對應細胞、組織生長發(fā)育過程的相關性，為相關疾病的診斷、治療、預后提供更加可靠的依據(jù)。

3 circRNA的生物學功能

3.1作為miRNA的海綿 miRNA是基因表達的重要轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子，含有相同miRNA的多個結(jié)合位點的circRNA可通過競爭性結(jié)合共有的miRNA來相互調(diào)節(jié)，并共同調(diào)控miRNA靶基因的表達。如ciRS-7(circular RNA sponge for miR-7)含有70多個選擇性保守的miRNA靶位點，并以miR-7依賴的方式與Argonaute蛋白結(jié)合，ciRS-7的過表達導致miR-7活性顯著降低，進而導致miR-7靶基因表達水平升高[12]。circRNA_100084可作為miR-23a-5p的海綿，促進肝癌細胞胰島素樣生長因子-2(insulin like growth factor-2，IGF-2)的表達，肝癌中上調(diào)的circRNA_100084通過circRNA_100084-miR-23a-5p-IGF-2軸發(fā)揮作用；進一步實驗發(fā)現(xiàn)，敲除circRNA_100084可抑制肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲，同時過表達IGF-2可逆轉(zhuǎn)circRNA_100084基因敲除的作用[13]。此外，circ_0002770、circSMC3、circ_0000326、circMTO1以及circ_0004390等均可通過circRNA的海綿作用分別影響胃癌、腎癌、肺癌、卵巢癌等癌癥的增殖和轉(zhuǎn)移[14-18]。由此可見，對miRNA的海綿作用是目前circRNA最主要的功能，通過這一功能不僅能更好地診斷癌癥，還能判斷癌癥的轉(zhuǎn)移，預測預后，指導臨床用藥。因此，可以將circRNA-miRNA-mRNA軸作為新的治療靶點。

3.2circRNA與RBPs的相互作用 RBPs是在RNA代謝過程中與之相結(jié)合的蛋白，RBPs參與RNA調(diào)控的多個過程，介導RNA的成熟、轉(zhuǎn)運、定位和翻譯。RBPs不僅可以直接與RNA結(jié)合調(diào)控其成熟、轉(zhuǎn)運等過程，還能與circRNA相互作用間接調(diào)控RNA的表達。一方面，RBPs可通過與側(cè)翼內(nèi)含子結(jié)合，縮短供體位點與受體位點之間的距離，促進外顯子circRNA的生物發(fā)生[19]。另一方面，RBPs可與circRNA結(jié)合，影響細胞的增殖，如circ-叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O3(forkhead box O3，F(xiàn)oxO3)通過結(jié)合細胞周期蛋白依賴性激酶2和p21，形成一種circ-FoxO3-p21-細胞周期蛋白依賴性激酶2三元復合物，當復合物異位表達時，細胞的增殖被抑制，同時細胞周期進程也被阻斷[20]。另外，circRNA還可與RBPs競爭性結(jié)合mRNA，從而調(diào)控靶基因的表達。Abdelmohsen等[21]發(fā)現(xiàn)，高濃度的circ核多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1(poly A binding protein nuclear 1，PABPN1)抑制了人抗原R與PABPN1 mRNA的結(jié)合，circPABPN1與人抗原R的廣泛結(jié)合阻止了人抗原R與PABPN1 mRNA的結(jié)合，從而減少了PABPN1的翻譯，表明circRNA與其同源RBP mRNA之間存在競爭現(xiàn)象。

3.3與pre-mRNA的競爭關系 circRNA通常是由pre-mRNA轉(zhuǎn)錄本的非順序反向剪接或線性RNA的反向融合而產(chǎn)生，形成了circRNA獨特的共價連續(xù)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，使其不受核糖核酸酶R和外核降解的影響[22]。另外，circRNA還可通過與pre-mRNA剪接位點競爭來調(diào)節(jié)線性剪接，從而直接調(diào)控基因的表達。Pre-mRNA可以生成circRNA，而生成的circRNA反過來又能繼續(xù)影響pre-mRNA的可變剪接，產(chǎn)生circRNA及相應的線性RNA[23]。Ashwal-Fluss等[24]實驗證明，circ甘露糖結(jié)合凝集素(mannose binding lectin，MBL)及其側(cè)翼內(nèi)含子含有保守的肌盲結(jié)合位點，這些結(jié)合位點與MBL有較強的特異性結(jié)合能力，因此MBL水平的調(diào)節(jié)對circMBL的生物合成有一定影響，MBL能促進circMBL的產(chǎn)生而減少線性剪切的發(fā)生，從而減少親本基因的生成。

3.4circRNA作為翻譯模板指導蛋白質(zhì)的合成 circRNA不僅可以通過影響miRNA調(diào)控蛋白質(zhì)的合成，還可以直接成為蛋白質(zhì)的翻譯模板，無論是在真核細胞還是原核細胞中均有這種作用。研究表明，在真核細胞中，circRNA含有內(nèi)部核糖體進入位點序列，且circRNA可以直接與核糖體結(jié)合[25]。在原核細胞中，circRNA含有保守的無限開放閱讀框系統(tǒng)，能夠翻譯環(huán)化的RNA[26]。circZNF609含有跨越始密碼子的無限開放閱讀框，并終止于框內(nèi)終止密碼子，circZNF609以剪接依賴性和與帽無關的方式翻譯成蛋白質(zhì)[27]。在真核細胞中，一些可啟動翻譯的circRNA具有核糖體40S亞基的結(jié)合位點，這在已知的體內(nèi)外研究中均已被證實[28]。此外，circRNA還可通過腺苷N6的甲基化驅(qū)動蛋白質(zhì)翻譯[29]。

綜上可知，circRNA通過多種多樣的生物學功能間接調(diào)控親本基因的表達。然而，circRNA還能通過與其他物質(zhì)結(jié)合直接調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。如外顯子-內(nèi)含子circRNA circ真核翻譯起始因子3亞基J和circ重組人腺苷酸結(jié)合蛋白-相互作用蛋白2，可以與抗U1小核糖核蛋白抗體結(jié)合，進一步與RNA聚合酶Ⅱ相互作用并增強其親本基因在HeLa和HEK293細胞中的表達，驗證了外顯子-內(nèi)含子circRNA在正反饋調(diào)控中起重要作用[30]。另有研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)含子circRNA錨蛋白重復域52和內(nèi)含子circRNA沉默調(diào)節(jié)蛋白7也可以與RNA聚合酶Ⅱ相互作用，從而成為親本基因轉(zhuǎn)錄的正調(diào)節(jié)因子，表明內(nèi)含子circRNA也參與對基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控[31]。

此外，circRNA還可調(diào)節(jié)腫瘤的細胞代謝，對于腫瘤細胞的脂代謝、糖代謝甚至氨基酸代謝均有至關重要的作用。Zhao等[32]研究發(fā)現(xiàn)，miR-124可抑制肺癌細胞的糖酵解，其機制可能是靶向蛋白激酶B-葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1-己糖激酶Ⅱ在非小細胞肺癌細胞中的作用。而同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶3(homeodomain interacting protein kinase 3，HIPK3)的circRNA被證實可通過海綿作用吸附miR-124，因此circHIPK3可間接調(diào)節(jié)肺癌細胞的糖代謝[33]。除糖酵解外，脂肪合成加劇是腫瘤代謝的另一個生物特征。腫瘤細胞可通過脂解獲得內(nèi)源性脂肪酸，從而進行脂肪酸β氧化，為腫瘤的增殖提供能量。過氧化物酶體增殖物激活受體α可激活肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶2和?；o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域3來降解脂質(zhì)，而circRNA_0046367可通過海綿作用吸附miR-34a來保護過氧化物酶體增殖物激活受體α免受轉(zhuǎn)錄抑制，因此circRNA_0046367的上調(diào)會增加腫瘤細胞的脂代謝，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[34]。近年研究證實，circHECTD1(homologousto E6-APC terminus domain 1)基因敲除可抑制胃癌細胞的谷氨酰胺水解，從而減少谷氨酰胺為癌細胞提供的氮和碳，抑制三羧酸循環(huán)以及腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲[35]。

4 circRNA與消化系統(tǒng)腫瘤

4.1circRNA與胃癌 胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，手術治療長期以來是胃癌的主要治療方式，而分子靶向治療、生物免疫治療也取得了一定的進展，但也僅用于輔助治療及胃癌晚期患者的治療。circRNA在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，主要體現(xiàn)在circRNA可通過海綿樣吸附miRNA來調(diào)節(jié)miRNA靶基因表達的作用方面。研究表明，circRNA_100269、circRNA_0027599分別是miR-630、miR-101-3p的海綿，在胃癌組織及細胞系中均下調(diào)，研究人員使circRNA_100269、circRNA_0027599在胃癌細胞中過表達后，胃癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移均受到抑制[36-37]，表明這兩個circRNA的下調(diào)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起著癌基因的作用。同樣，circRNA_0023642的下調(diào)也起到了癌基因的作用，circRNA_0023642在胃癌中的異常上調(diào)影響了上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化信號通路，若circRNA_0023642下調(diào)則可抑制胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲，同時還能誘導胃癌細胞凋亡，抑制癌癥進展[38]。除上述circRNA外，hsa_circ_002059、hsa_circ_0074362、hsa_circ_0003159和hsa_circ_0000745等也被證實可以作為胃癌新的診斷標志物[39-42]。

癌癥的分期是決定治療方案的關鍵因素，且與預后密切相關，circRNA也有望成為胃癌患者預后的獨立影響因素。研究表明，具有更高TNM分期和更短的生存期胃癌患者的circPSMC3(proteasome 26S subunit,ATPase,3)通常低表達，circPSMC3通過充當miR-296-5p的海綿來調(diào)節(jié)人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因的表達，并進一步抑制胃癌的發(fā)生、發(fā)展[43]。circHECTD1在胃癌中的表達顯著上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期有關，circHECTD1與miR-1256以及靶基因泛素特異性肽酶5共同組成了circ HECTD1/miR-1256/泛素特異性肽酶5軸，通過激活下游β聯(lián)蛋白/c-Myc信號通路，促進胃癌進展；將circHECTD1敲除后，胃癌細胞的谷氨酰胺水解被抑制，減少了谷氨酰胺為癌細胞提供的氮和碳，抑制了三羧酸循環(huán)，從而抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲[35]。通過研究胃癌中特異性表達的circRNA可以為胃癌的早期診斷提供更高效的手段，增加患者接受手術根治的機會，在延長患者生存期的同時提高患者的生活質(zhì)量。

4.2circRNA與胰腺癌 在胰腺癌細胞及組織中也存在較癌旁組織特異性表達的circRNA，其中有的促進癌癥的發(fā)展，有的則抑制癌癥的發(fā)生及轉(zhuǎn)移。位于chr11：36248634-36248980上的circ低密度脂蛋白受體類A域3(low density lipoprotein receptor class A domain containing 3，LDLRAD3)在胰腺癌中表達上調(diào)，通過擴大樣本量發(fā)現(xiàn)，與對照樣品相比，來自胰腺癌患者組織和血漿中的circLDLRAD3的表達水平更高，此外，circLDLRAD3的高表達還與胰腺癌的靜脈侵襲、淋巴侵襲及轉(zhuǎn)移顯著相關，因此circLDLRAD3可以作為早期胰腺癌診斷的生物標志物[44]。有研究證實，hsa_circ_0006215在胰腺癌中也顯著上調(diào)，胰腺癌組織中miR-378a-3p呈低表達，絲氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子、進化枝 A(α1抗蛋白酶,抗胰蛋白酶)、成員4[serpin peptidase inhibitor,clade A (alpha-1 antiproteinase,antitrypsin),member 4，SERPINA4]基因呈高表達；進一步分析顯示，hsa_circ_0006215可能通過海綿吸附調(diào)節(jié)miR-378a-3p，而SERPINA4基因則是miR-378a-3p的能性靶基因，此項研究驗證了hsa_circ_0006215/miR-378a-3p/SERPINA4信號通路在胰腺癌細胞中促進腫瘤發(fā)生的作用[45]。

除通過相關信號通路作用于胰腺癌外，circRNA還可通過參與化療藥物耐藥性的產(chǎn)生影響胰腺癌的治療。Shao等[46]建立了吉西他濱耐藥的人胰腺癌細胞株PANC-1(PANC-1-GR)細胞系，發(fā)現(xiàn)circRNA(chr14：101402109-101464448+，chr4：52729603-52780244+)在PANC-1-GR細胞系中顯著上調(diào)，而將circRNA(chr14：101402109-101464448+，chr4：52729603-52780244+)敲除后，PANC-1-GR細胞對吉西他濱治療的敏感性又再次增加，表明circRNA(chr14：101402109-101464448+，chr4：52729603-52780244+)可能成為降低晚期胰腺癌對吉西他濱耐藥的藥物靶標。

4.3circRNA與肝癌 近年來，circRNA與肝癌的關系也逐漸被揭示。Bai等[47]通過微陣列分析和實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應驗證了命名為circFBLIM1(filamin binding LIM protein 1)的circRNA，并證實其在肝癌組織和細胞系中上調(diào)；進一步實驗發(fā)現(xiàn)，敲除circFBLIM1可抑制肝癌的增殖、侵襲，促進細胞凋亡。還有研究發(fā)現(xiàn)，circATP結(jié)合家族,亞家族C(CFTR/MRP),成員2[ATP binding cassette,sub-family C (CFTR/MRP),member 2，ABCC2]在肝癌中表達上調(diào)，抑制circABCC2可抑制細胞增殖和侵襲，但可誘導細胞凋亡，提示circABCC2可調(diào)控肝癌的進展，因此circABCC2可能成為肝癌治療的靶點，同時也可作為早期診斷肝癌的潛在生物標志物[48]。而通過調(diào)節(jié)miR-362-3p/Rab23軸來促進肝癌的發(fā)生和發(fā)展的circ-肌球蛋白輕鏈激酶也為肝癌的早期診斷提供了新的生物標志物[49]。不同于上述在肝癌中高表達的circRNA，hsa_circ_0001445在肝癌中低表達，hsa_circ_0001445在肝癌細胞過表達，則可促進肝癌細胞凋亡，甚至抑制肝癌的體外增殖、遷移和侵襲[50]。另外，Yao等[51]發(fā)現(xiàn)，鋅指含KRAB和SCAN域1(zinc finger with KRAB and SCAN domains 1，ZKSCAN1)基因及其相關的circRNA(circZKSCAN1)均通過不同的信號轉(zhuǎn)導通路抑制肝癌細胞的生長、遷移和侵襲，且circZKSCAN1的表達水平不僅與腫瘤數(shù)目相關，還在肝癌所致的肝硬化以及血管侵犯和分級中起重要作用。

目前，肝癌靶向治療的耐藥性是一大難點，作為經(jīng)典藥物的順鉑，耐藥性是影響其后期治療的重要因素。Luo等[52]研究發(fā)現(xiàn)，在順鉑耐藥的肝癌組織和細胞系中，一種新的circRNA_101505的表達減少，且與肝癌較差的預后相關；進一步研究發(fā)現(xiàn)，過表達circRNA_101505可抑制肝癌細胞的生長，增強順鉑對肝癌細胞的毒性作用，其機制為circRNA_101505通過海綿miR-103使肝癌細胞對順鉑敏感，從而促進含氧化硝基結(jié)構(gòu)域蛋白1的表達。隨著對肝細胞癌中特異性circRNA研究的深入，其參與肝癌發(fā)生、發(fā)展的相關信號通路及作用機制將被逐一揭示，從而為研發(fā)特異性分子靶向藥物提供更多的理論依據(jù)。

4.4circRNA與結(jié)直腸癌 結(jié)直腸癌是目前消化系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率最高的一種，其早期癥狀不明顯，當瘤體增大到一定程度時則出現(xiàn)排便習慣改變、血便、腹瀉、便秘、腹瀉便秘交替、腹痛等癥狀，但這些癥狀在一定程度上缺乏特異性，易被人們忽視。在結(jié)直腸癌中，circRNA能夠通過多種信號通路調(diào)控細胞的增殖、分化、凋亡，從而影響結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。與周圍組織相比，hsa_circ_0000523在結(jié)直腸癌中顯著下調(diào)，而且可導致Wnt/β聯(lián)蛋白信號轉(zhuǎn)導通路激活，從而誘導結(jié)直腸癌的進展[53]。在結(jié)直腸癌腫瘤組織中上調(diào)的hsa_circ_0007534與結(jié)直腸癌的分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，通過沉默hsa_circ_0007534可顯著降低結(jié)直腸癌細胞增殖并誘導結(jié)直腸癌細胞凋亡[54]。Zheng等[55]實驗證明，circ PPP1R12A[protein phosphatase 1,regulatory (inhibitor) subunit 12A]-73aa通過激活Hippo-Yes相關蛋白信號通路促進結(jié)直腸癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，而Yes相關蛋白特異性抑制劑肽17可顯著削弱circPPP1R12A-73aa對結(jié)直腸癌細胞的促進作用。此外，circHIPK3在結(jié)直腸癌中顯著上調(diào)，通過海綿樣吸附miR-7逆轉(zhuǎn)了miR-7誘導的抑制結(jié)直腸癌細胞進展的過程，進而促進結(jié)直腸癌的發(fā)展；沉默circHIPK3的同時使miR-7過表達，對異種移植動物模型中的結(jié)直腸癌生長和轉(zhuǎn)移具有累加的抑制作用，因此circHIPK3的表達可作為預測結(jié)直腸癌患者總體存活率的一個獨立影響因素[56]。

另外，Li等[57]通過RNA測序揭示了circRNA的表達譜，并證明circDDX17在結(jié)直腸癌中充當了腫瘤抑制劑。研究發(fā)現(xiàn)，可作為胃癌潛在診斷指標的hsa_circ_102958，在結(jié)直腸癌中通過海綿作用吸附miR-585，從而促進其靶基因細胞分裂周期因子25B的表達[58]。有研究通過特異性小干擾RNA減少hsa_circ_102958的表達，然后行細胞計數(shù)試劑盒8檢測、Transwell實驗發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_102958基因敲除對SW480和HCT116細胞的增殖、侵襲均有顯著的抑制作用；進一步的體外實驗結(jié)果顯示，hsa_circ_102958沉默對瘤體的生長有顯著的抑制作用，說明hsa_circ_102958的存在促進了結(jié)直腸癌的生長、遷移和侵襲。

circRNA在結(jié)直腸癌中主要通過海綿作用吸附miRNA起到促進或抑制癌癥進展的作用，Zhang等[59]的研究充分利用了這一規(guī)律，提出了新的結(jié)腸癌治療方案，他們發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0020397通過與結(jié)直腸癌細胞的miR-138結(jié)合，上調(diào)程序性細胞死亡配體1(miR-138的靶基因)的表達，從而促進腫瘤細胞的免疫逃逸，為目前流行的“檢查點分子”治療提供了強有力的理論基礎。新近研究明確指出，hsa_circ_0004585在結(jié)直腸癌患者組織和外周血中的表達均顯著上調(diào)，且與結(jié)直腸癌腫瘤的大小呈正相關，說明hsa_circ_0004585在結(jié)直腸癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進作用，可作為早期結(jié)直腸癌診斷的生物標志物[60]。

4.5circRNA與其他消化系統(tǒng)腫瘤 除上述常見消化系統(tǒng)腫瘤外，circRNA還與食管癌、肝內(nèi)膽管細胞癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關系。Fan等[61]在食管癌患者的血漿中檢測到hsa_circ_0001946和hsa_circ_0043603，兩者均可作為診斷性生物標志物，并可在細胞條件培養(yǎng)的條件培養(yǎng)基外顯子中檢測到。Hsa_circ_0001946的受試者工作特征曲線下面積、靈敏度和特異度分別為0.894、92%和80%，hsa_circ_0043603的受試者工作特征曲線下面積、靈敏度和特異度分別為0.836、64%和92%，同時標記hsa_circ_0001946和hsa_circ_0043603的受試者工作特征曲線下面積、靈敏度和特異度分別為0.928、84%和98%，其中hsa_circ_0001946的過表達能夠降低食管癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。Zou等[62]的實驗結(jié)果表明，circRNA_001275在順鉑耐藥食管癌組織和細胞中均顯著上調(diào)，circRNA_001275過表達可促進順鉑耐藥細胞的增殖和侵襲，減少順鉑耐藥細胞的凋亡，而circRNA_001275沉默則可抑制細胞的增殖和侵襲，促進細胞凋亡；進一步的雙熒光素酶報告分析表明，circRNA_001275與miR-370-3p可直接結(jié)合，而Wnt7a是miR-370-3p的靶標，利用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應和蛋白質(zhì)印跡實驗進一步證實了circRNA_001275可作為miR-370-3p海綿，上調(diào)Wnt7a的表達。在肝內(nèi)膽管細胞癌中，circSWI/SNF相關,基質(zhì)關聯(lián),肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子,亞家族a,成員5(SWI/SNF related,matrix associated,actin dependent regulator of chromatin,subfamily a,member 5，SMARCA5)表達水平低于癌旁組織，circSMARCA5的高表達與腫瘤的TNM期以及糖類抗原-199異常呈負相關，且circSMARCA5高表達組的總生存期顯著高于低表達組，進一步多因素Cox回歸分析驗證了circSMARCA5的高表達可作為總生存期延長的獨立預測因子；另外，circSMARCA5還可使順鉑和吉西他濱的抑制濃度降低50%，從而提高肝內(nèi)膽管細胞癌對化療的敏感性[63]。

5 小 結(jié)

盡管有些消化系統(tǒng)腫瘤特異性相關的circRNA可作為腫瘤的早期診斷標志物，甚至參與腫瘤的轉(zhuǎn)移、TNM分期及預后，但目前還處于基礎研究階段，缺乏大量的臨床研究以及大樣本量的研究。如何進一步將基礎研究成果應用于臨床消化系統(tǒng)腫瘤患者的治療仍需要轉(zhuǎn)化醫(yī)學的進一步探索。對于胰腺癌、膽管癌等一經(jīng)發(fā)現(xiàn)即已是晚期的消化系統(tǒng)腫瘤，更具特異性、敏感性的circRNA有望通過早期診斷為患者提供更多的手術治療機會，從而延長患者的生存時間并提高生活質(zhì)量。通過基礎與臨床的進一步結(jié)合，相信這些circRNA可以成為指導腫瘤患者用藥的重要參考指標，并為尋找新的治療靶點提供理論支持。另外，circRNA穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)以及特異性表達的特性，使其可能作為免疫應答的腫瘤抗原，這也將為免疫治療提供新方向，推動精準治療的發(fā)展。