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    草莓葉主要揮發(fā)性物質(zhì)的測定及其對草莓球腔菌的抑菌效果

    2021-01-28 01:38:02童志超徐艷群羅自生
    核農(nóng)學報 2021年2期
    關鍵詞:己烯醛類反式

    童志超 徐艷群 李 棟 李 莉 羅自生

    (1浙江大學生物系統(tǒng)工程與食品科學學院,浙江 杭州 310058;2浙江大學寧波研究院,浙江 寧波 315000;3 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)后處理重點實驗室,浙江 杭州 310058;4浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術研究重點實驗室,浙江 杭州 310058)

    草莓蛇眼病由草莓球腔菌[Mycosphaerella fragariae(Tul.) Lindau](真菌半知菌亞門柱隔孢屬杜拉柱隔孢Ramularia tulasneiSacc.)侵染所致,主要危害葉片,嚴重發(fā)生時,還可侵染葉柄、果柄、花萼、匍匐莖和果梗,且植株間傳播性強[1-3]。在草莓種植地區(qū),草莓蛇眼病是一種常見病害,可對草莓生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失[4-5]。目前,草莓蛇眼病的防治方式主要以化學藥劑防治為主,生態(tài)防治以及生物防治較少[6]。但化學藥劑的長期使用會導致病菌產(chǎn)生抗藥性,而且果蔬表面和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留,易引發(fā)食品安全及環(huán)境污染等問題[7-9]。因此,急需研制高效安全的生物農(nóng)藥防治植物病害。

    植物自身可以產(chǎn)生多種天然揮發(fā)性物質(zhì),在植株與環(huán)境、植株與病害以及植株與植株之間的互作中具有重要作用[10-12]。研究表明,病蟲害的侵染[13]、高溫[14]、干旱[15]、高鹽[16]等多種生物脅迫或非生物脅迫,均會引起植物體內(nèi)揮發(fā)性物質(zhì)釋放量的增加,從而增強植株抗逆性,其中萜類和C6 醛類是揮發(fā)性物質(zhì)的主要組成部分。另有研究表明,植物的揮發(fā)性物質(zhì)具有高效的抑菌活性,在植物抗病性方面具有重要作用[17-19]。草莓揮發(fā)性物質(zhì)能夠在體外抑制灰霉病病原菌 (Botrytis cinerea)[20]和炭疽病病原菌(Colletotrichum acutatum)[21]的生長,但關于草莓天然揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌抑制作用的報道尚鮮見。本研究測定了草莓葉片中的主要揮發(fā)性物質(zhì)成分,并研究了其對草莓球腔菌的抑菌作用,以期為應用環(huán)境友好型天然揮發(fā)性物質(zhì)的新型高效抗菌劑提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    供試病原菌:草莓球腔菌,分離自草莓葉片上自然生長的蛇眼病,經(jīng)分離、純化、鑒定后保存?zhèn)溆茫囼炈面咦訛椴葺~片培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)代數(shù)均在4 代以內(nèi)。供試草莓幼苗品種名為阿爾比(Fragaria ×ananassa,Albion),來自商業(yè)苗圃(喬司農(nóng)場,杭州)。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 用于提取分離揮發(fā)性物質(zhì)的草莓植株培養(yǎng) 采用常用植株培養(yǎng)基,盆栽于植物生長箱培養(yǎng)(花盆直徑15 cm),日光照連續(xù)14 h,培養(yǎng)溫度為25±2℃(白天)和15±2℃(晚上),相對濕度為50%±5%,采用氮磷鉀(200 mg·L-1的氮,71 mg·L-1的鉀和200 mg·L-1的磷)營養(yǎng)液給予草莓充足的營養(yǎng),每周澆營養(yǎng)液3 次。每組9 株草莓植株,3 次重復,培養(yǎng)7 周后收集草莓葉片。

    1.2.2 草莓葉片中主要揮發(fā)性物質(zhì)的測定 采用頂空固相微萃取法富集-氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)檢測草莓葉片中主要的揮發(fā)性物質(zhì)及含量[22]。

    取20 g 草莓嫩葉(剛完全展開)與飽和食鹽水按照1 g ∶2.5 mL 混合并勻漿。稱取3 g 勻漿樣品置于15 mL 頂空瓶中,加入1 μL 300 μL·L-12,6-二甲基-6-庚烯-2-醇作為內(nèi)標;40℃攪拌平衡15 min 后,插入DVB/CAR/PDMS 50/30 μm 固相微萃取頭(美國Supelco)萃取30 min。萃取結束后,手動進樣,進樣口250℃解析3 min,采用6890 N 氣相系統(tǒng)(美國Agilent)串聯(lián)MS 檢測器(5975 B,美國Agilent)進行檢測。色譜柱參數(shù):DB-5MS 色譜柱(美國Agilent):30 m×0.25 mm,0.25 μm;柱溫程序:40℃保持3 min,以2℃·min-1升至64℃,然后以3℃·min-1升至145℃,再以15℃·min-1升至250℃(保留10 min)。各揮發(fā)性組分通過與質(zhì)譜庫(NIST05) 以及保留指數(shù)(kovats index,KI)進行比對來鑒別,通過內(nèi)標定量。

    KI 值的測定:按照上述質(zhì)譜條件的對正構烷烴混合對照品C5~C20進行GC-MS 分析,記錄各正構烷烴保留時間,根據(jù)線性升溫公式計算各組分的KI 值[23]:

    式中,tx表示被分析組分流出峰的保留時間,min;tn、tn+1表示碳原子數(shù)為n 和n+1 的正構烷烴流出峰的保留時間,min。tn<tx<tn+1。

    1.2.3 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌致病力的影響 取新鮮的剛完全展開的草莓嫩葉于90 mm培養(yǎng)皿中,每個培養(yǎng)皿1 片葉子,5 個培養(yǎng)皿為一組,試驗重復3 次。平鋪兩層濾紙于葉片之下,向濾紙滴加1 mL 水,以保持葉片的濕度和完好的生理狀態(tài)。將濃度為1×105個·mL-1的草莓球腔菌孢子懸液噴灑于葉片正面和反面進行人工接種;接種完成后,在培養(yǎng)皿蓋子內(nèi)部放置一張直徑90 mm 的濾紙,然后分別將30 μL 的揮發(fā)性物質(zhì)滴加在濾紙上,迅速將蓋子蓋回培養(yǎng)皿,并用封口膜密閉封口。設置萜類[芳樟醇(美國Sigma,97%)、桃金娘烯醇(美國Sigma,95%)]的濃度分別為0(對照)、5、50、100、150 μL·L-1,C6 醛類[己醛(上海阿拉丁,97%)、反式-2-己烯醛(上海阿拉丁,98%)、順式-3-己烯醛(美國Bedoukian 研究公司,98%)的濃度為0(對照)、0.5、5、50、500 μL·L-1。將培養(yǎng)皿置于室溫2 h 后將培養(yǎng)皿打開,將帶有揮發(fā)性物質(zhì)的濾紙移除,培養(yǎng)皿于無菌環(huán)境下敞口30 min(充分移除揮發(fā)性物質(zhì))后再封口。室溫下再培養(yǎng)8 d后觀察并記錄草莓葉片的病斑面積。

    1.2.4 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌孢子萌發(fā)及菌絲生長的影響 將100 μL 濃度為5×104個·mL-1的草莓球腔菌孢子懸液均勻涂布在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(potato dextrose agar,PDA)上(每盤7 mL 培養(yǎng)基,約0.15 cm 厚,培養(yǎng)皿直徑為90 mm),靜置10 min;在培養(yǎng)皿蓋子內(nèi)部放置一張直徑90 mm 的濾紙,然后分別將一定體積的揮發(fā)性物質(zhì)D-檸檬烯(美國Sigma,95%)、芳樟醇、桃金娘烯醇、己醛、反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛滴加在濾紙上,迅速將蓋子蓋回培養(yǎng)皿,并用封口膜密閉封口。揮發(fā)性物質(zhì)所滴加的體積按照培養(yǎng)皿內(nèi)揮發(fā)性物質(zhì)最終濃度為0、0.05、0.5、5、50、500 μL·L-1進行處理。在滴加前用水按將揮發(fā)性物質(zhì)1 ∶10、1 ∶102、1 ∶103、1:104稀釋后,使得不同濃度的揮發(fā)性物質(zhì)滴加相同的體積,不同種類的揮發(fā)性物質(zhì)滴加體積控制在16~50 μL。

    培養(yǎng)16 h 后在光學顯微鏡下隨機選取9 個視野進行拍照(放大倍數(shù)為125),然后利用顯微鏡capture軟件對視野內(nèi)的各菌體長軸向總長度進行測定和統(tǒng)計;每個視野內(nèi)的菌體個數(shù)在6 以上,取每個視野的平均菌體長度作為一個平行。菌體伸長為孢子平均軸向長度(約41 μm)兩倍以上視為萌發(fā)(>82 μm)。孢子萌發(fā)率=視野內(nèi)萌發(fā)的孢子個數(shù)/視野內(nèi)所有的孢子個數(shù)×100%。對于16 h 未萌發(fā)的處理組,移除濾紙片,并將培養(yǎng)皿打開,在超凈臺上通風1 h 移除揮發(fā)性物質(zhì),然后再封口培養(yǎng)72 h,觀察孢子萌發(fā)情況;若孢子再次萌發(fā)則該揮發(fā)性物質(zhì)在該濃度下只具有抑制孢子萌發(fā)的作用,若孢子仍未萌發(fā)則視為該揮發(fā)性物質(zhì)在該濃度下具有殺菌作用。

    1.2.5 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌線粒體膜電位的影響 將100 μL 濃度為5×104個·mL-1的草莓球腔菌孢子懸液均勻涂布在PDA 培養(yǎng)基上,培養(yǎng)5 d 后,按照1.2.3 中的方法進行揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理16 h。芳樟醇、桃金娘烯醇處理濃度分別設為0(對照)、5、50、500 μL·L-1,己醛、反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛處理濃度分別設為0(對照)、0.5、5、50 μL·L-1。由于前期1.2.4 試驗發(fā)現(xiàn),當D-檸檬烯濃度高達500 μL·L-1時才對草莓球腔菌的生長有明顯抑制作用,而高濃度對草莓葉片有明顯損傷,因此后續(xù)試驗未進行D-檸檬烯處理。處理結束后,從各組中挑取菌絲,利用線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)(上海碧云天生物技術有限公司)對菌絲的線粒體膜電位進行檢測。熒光強度通過共聚焦顯微鏡(SP8,萊卡,德國)進行檢測,最終線粒體膜電位結果以紅色熒光強度(激發(fā)波長525 nm,發(fā)射波長590 nm)與綠色熒光強度(激發(fā)波長490 nm,發(fā)射波長530 nm) 的比值表示。10 μmol·L-1的CCCP(carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone)細胞凋亡誘導劑處理作為陽性對照(CCCP 處理會使得菌絲線粒體膜電位完全喪失),水處理作為空白對照。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    每組試驗數(shù)據(jù)重復測定 3 次。方差分析(ANOVA)采用SAS 9.4 軟件的一般線性模塊(Proc GLM)進行分析。各組之間進一步采用最小顯著性差異分析(least significant difference,LSD),P<0.05 代表差異顯著。

    2 結果與分析

    2.1 草莓葉片中的主要揮發(fā)性物質(zhì)

    草莓葉片經(jīng)GC-MS 檢測其總離子流色譜圖如圖1 所示,利用NIST05 質(zhì)譜庫進行檢索并對比揮發(fā)性物質(zhì)的保留指數(shù)(KI)進行定性,利用面積歸一化計算草莓葉片中主要揮發(fā)性物質(zhì)的相對百分含量,結果如表1 所示。在草莓葉片中共檢測出12 種主要揮發(fā)性物質(zhì),其中含量最高的是萜類和醛類,共占總量的95.58%。其中萜類物質(zhì)有3 種,分別是桃金娘烯醇、芳樟醇和少量D-檸檬烯,約占總量的6.09%;C6 醛類物質(zhì)主要包括2-己烯醛、己醛、反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛等,占總量的89.72%。萜類、醛類揮發(fā)性物質(zhì)具有抗菌活性[24],以草莓葉片中這些揮發(fā)性物質(zhì)的自然含量為參考設定后續(xù)試驗濃度,探究草莓葉片中天然存在的揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌的抗菌活性。

    圖1 草莓葉片總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatography of the volatile of strawberry leaves

    2.2 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌致病力的影響

    適當濃度的萜類、C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理能減小草莓蛇眼病病斑面積(圖2)。當萜類揮發(fā)性物質(zhì)處理濃度為5、50 μL·L-1時均能減小草莓葉片蛇眼病的病斑面積,其中處理濃度為50 μL·L-1時效果最好,幾乎完全抑制了病原菌的侵染。C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)中反式-2-己烯醛處理濃度為0.5、5 μL·L-1時均能減小草莓蛇眼病的病斑面積,其中0.5 μL·L-1效果最好;己醛和順式-3-己烯醛最優(yōu)處理濃度為5 μL·L-1,同時0.5 和50 μL·L-1濃度處理對于病害的發(fā)生也具有一定的防治效果。然而,過高濃度的揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理會對草莓葉片造成損害,當萜類揮發(fā)性物質(zhì)濃度為150 μL·L-1時,草莓葉片病斑面積反而增加;此外,當萜類揮發(fā)性物質(zhì)濃度為150 μL·L-1、C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)中反式-2-己烯醛濃度為50 μL·L-1及更高、己醛和順式-3-己烯醛濃度為500 μL·L-1時,葉片出現(xiàn)褐紅色,8 d 后葉片幾乎全部被草莓球腔菌侵染,均出現(xiàn)菌斑。

    表1 草莓葉片中主要揮發(fā)性物質(zhì)及其含量Table 1 Main volatile substances and contents in strawberry leaves

    圖2 揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌侵染草莓葉片的抑制作用Fig.2 Inhibition of volatile substances on strawberry leaves infected by Mycosphaerella fragariae

    2.3 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌孢子萌發(fā)的影響

    在正常情況下,草莓球腔菌孢子能夠萌發(fā)與生長(圖3-B)。揮發(fā)性物質(zhì)能夠抑制菌絲生長(圖3-C)的最低濃度為最低抑菌濃度;適當濃度的揮發(fā)性物質(zhì)能夠抑制孢子的萌發(fā),但移除揮發(fā)性物質(zhì)后能夠繼續(xù)萌發(fā)(圖3-D),此時揮發(fā)性物質(zhì)的濃度為抑菌濃度;揮發(fā)性物質(zhì)濃度過高,能完全殺死草莓球腔菌,即使移除揮發(fā)性物質(zhì)孢子仍不萌發(fā),此時揮發(fā)性物質(zhì)的濃度為殺菌濃度。

    由表2 可知,在適當濃度下,草莓葉片揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸對草莓球腔菌孢子萌發(fā)具有顯著抑制作用(P<0.05),且隨著濃度的升高,對孢子萌發(fā)的抑制作用也隨之增強。不同揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌孢子萌發(fā)的抑制濃度不同,D-檸檬烯抑菌濃度為500 μL·L-1,遠大于草莓葉片中檢測到的濃度且氣味過于強烈,芳樟醇、桃金娘烯醇抑菌濃度為50 μL·L-1,己醛、順式-3-己烯醛抑菌濃度為5 μL·L-1,反式-2-己烯醛抑菌濃度為0.5 μL·L-1,該濃度的揮發(fā)性物質(zhì)對孢子萌發(fā)的抑制達到了顯著水平(P<0.05)。芳樟醇、桃金娘烯醇殺菌濃度為500 μL·L-1,己醛殺菌濃度為50 μL·L-1,反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛殺菌濃度為5 μL·L-1,該濃度下具有殺死病原菌的效果,草莓球腔菌孢子萌發(fā)率幾乎為0,熏蒸處理后即使移除揮發(fā)性物質(zhì),孢子也不再萌發(fā)。

    圖3 不同生長狀態(tài)的草莓球腔菌形態(tài)圖Fig.3 Morphology of Mycosphaerella fragariae in different growth states

    表2 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌子萌發(fā)的影響Table 2 Effect of main volatile substances in strawberry leaves on spore germination of Mycosphaerella fragariae

    2.4 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌菌絲生長的影響

    如圖4 所示,在適當?shù)臐舛认?,草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸能顯著抑制草莓球腔菌菌絲的生長,且隨著濃度的升高,抑制效果越好。由表2 可知,D-檸檬烯最低抑菌濃度為500 μL·L-1,芳樟醇最低抑菌濃度為5 μL·L-1,桃金娘烯醇最低抑菌濃度為50 μL·L-1,己醛、反式-2-己烯醛最低抑菌濃度為0.05 μL·L-1,順式-3-己烯醛最低抑菌濃度為0.5 μL·L-1時,該濃度下各揮發(fā)性物質(zhì)對菌絲生長的抑制作用均達到顯著水平。當D-檸檬烯濃度達到500 μL·L-1,芳樟醇、桃金娘烯醇濃度達到50 μL·L-1,己醛、順式-3-己烯醛達到5 μL·L-1,反式-2-己烯醛濃度達到0.5 μL·L-1時,能夠完全抑制菌絲生長。

    圖4 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌菌絲生長的影響Fig.4 Effect of main volatile substances in strawberry leaves on mycelial growth of Mycosphaerella fragariae

    2.5 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌線粒體膜電位的影響

    草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸會影響草莓球腔菌的線粒體膜電位(圖5),與菌絲生長相對應,隨著萜類、C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)濃度的升高,草莓球腔菌菌絲的線粒體膜電位逐步下降,表明其可通過破壞草莓球腔菌的線粒體膜,進而影響菌體的生長。當所采用的3 種C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)和2 種萜烯類揮發(fā)性物質(zhì)濃度達到50 μL·L-1時,菌絲的膜電位均較正常生長顯著降低。當芳樟醇濃度達到500 μL·L-1,反式-2-己烯醛的濃度達到50 μL·L-1時,菌絲的線粒體膜電位幾乎完全喪失,與10 μmol·L-1CCCP 處理結果無顯著差異,表明此時已經(jīng)完全破壞草莓球腔菌線粒體。

    3 討論

    圖5 草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌線粒體膜電位的影響Fig.5 Effect of main volatile substances in strawberry leaves on mitochondrial membrane potential of Mycosphaerella fragariae

    綠色植物葉片中主要的揮發(fā)性物質(zhì),也被稱為“綠色葉片揮發(fā)性物質(zhì)”(green leaf volatile,GLV),主要包括C6 醇類、醛類、萜烯類及乙酸酯類化合物[28]。本研究發(fā)現(xiàn),草莓葉片中的揮發(fā)性物質(zhì)主要是萜類和醛類化合物,尤其是C6 醛類,如2-己烯醛、己醛、反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛,占主導地位,其次為萜類化合物,主要包括芳樟醇、桃金娘烯醇及少量D-檸檬烯。這與Ceuppens 等[29]關于草莓花器官揮發(fā)性成分的研究結果類似。不同植物的揮發(fā)性成分有所差異,但主要均是醇類、醛類和萜烯類物質(zhì),如葡萄葉片中順式-3-己烯醇和反式-2-己烯醛的含量較高[30],番茄植株中順式-3-己醇與乙酸、丙酸等形成的揮發(fā)性酯含量較高[31]。

    植物葉片中的揮發(fā)性物質(zhì)是一種重要的誘導防御機制,能抑制植物病原菌的生長和繁殖[28]。Marei等[24]研究了多種單萜類揮發(fā)性物質(zhì)對植物病原菌的抑菌活性,發(fā)現(xiàn)S-檸檬烯對病原菌具有較好的抑菌效果。本研究發(fā)現(xiàn),草莓葉片中的萜類揮發(fā)性物質(zhì)(芳樟醇、桃金娘烯醇),以及C6 醛類揮發(fā)性物質(zhì)(己醛、反式-2-己烯醛、順式-3-己烯醛),在適當濃度下具有顯著抑制草莓球腔菌孢子萌發(fā)和菌絲生長的作用。不同類型的揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌抑制效果不同,其中在同一濃度下C6 醛類的抑菌效果普遍好于萜類揮發(fā)性物質(zhì),其抑制草莓蛇眼病的最低熏蒸濃度相差最少一個數(shù)量級。反式-2-己烯醛的抑菌效果最好,當其濃度達到0.5 μL·L-1時,對孢子萌發(fā)具有顯著的抑制作用,而D-檸檬烯濃度則需要達到500 μL·L-1。Arroyo 等[21]研究了8 種草莓脂氧合酶途徑產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對草莓炭疽病病原菌的體外抑制作用,也發(fā)現(xiàn)反式-2-己烯醛是對菌絲生長抑制效果最好的一種揮發(fā)性物質(zhì),與本研究結果一致。

    Arroyo 等[21]通過掃描電鏡發(fā)現(xiàn)GLV 體外處理可以改變真菌細胞壁和細胞器的正常形態(tài)。本試驗研究草莓葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)對草莓球腔菌線粒體膜電位的影響,發(fā)現(xiàn)當反式-2-己烯醛、己醛、順式-3-己烯醛、芳樟醇和桃金娘烯醇濃度達到50 μL·L-1時,這些揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理較對應揮發(fā)性物質(zhì)溶劑處理(空白對照)會顯著降低菌絲的線粒體膜電位;繼續(xù)提高揮發(fā)性物質(zhì)濃度(反式-2-己烯醛濃度達50 μL·L-1)時,能完全破壞草莓球腔菌線粒體膜。表明揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理能夠通過破壞線粒體膜電位來影響草莓球腔菌的能量代謝和呼吸鏈傳遞,從而干擾細胞的正常生理活動。

    本研究中,草莓葉片中萜類揮發(fā)性物質(zhì)芳樟醇、桃金娘烯醇及D-檸檬烯濃度為50 μL·L-1,己醛濃度為5 μL·L-1,反式-2-己烯醛濃度為0.5 μL·L-1,順式-3-己烯醛濃度為5 μL·L-1時,利用揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸均能夠表現(xiàn)出較好的抑菌效果且對葉片無任何損傷。但濃度過高則會對草莓葉片帶來損害,處理后的葉片會出現(xiàn)褐紅色,8 d 后葉片幾乎全部被草莓球腔菌侵染,這可能是由于揮發(fā)性物質(zhì)能夠使草莓葉片細胞受到損害,從而導致葉片更容易受到病原菌的侵染[32]。Neri等[33]研究發(fā)現(xiàn)葉片受損時揮發(fā)性物質(zhì)在受損部位濃度會上升,病原菌可感知葉片的受損傷部位信息,而病原菌可能會利用揮發(fā)性物質(zhì)傳遞的信號,從而更容易侵入。

    4 結論

    本研究表明,草莓葉片中主要揮發(fā)性物質(zhì)是萜類化合物以及C6 醛類化合物。采用草莓葉片中的天然揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸對草莓蛇眼病具有較好的抑菌效果,芳樟醇、桃金娘烯醇最低熏蒸濃度為50 μL·L-1,己醛最低熏蒸濃度為5 μL·L-1,反式-2-己烯醛最低熏蒸濃度為0.5 μL·L-1,順式-3-己烯醛最低熏蒸濃度為5 μL·L-1,此濃度下?lián)]發(fā)性物質(zhì)能夠有效抑制草莓球腔菌的侵入,表現(xiàn)出較好的抑菌效果且對草莓葉片無明顯損傷,具有良好的應用前景。草莓葉片中主要揮發(fā)性物質(zhì)能有效抑制草莓球腔菌孢子萌發(fā)和菌絲生長,并使其線粒體膜電位下降。本研究為應用環(huán)境友好型、綠色無污染天然揮發(fā)性物質(zhì)有效抗菌劑提供了依據(jù)。

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