分析臨床病理診斷中HE染色方法的應(yīng)用

段瑞敏

（山西省忻州市人民醫(yī)院，山西 忻州）

0 引言

病理診斷是在手術(shù)（或尸體解剖）切下病變組織標(biāo)本，經(jīng)過固定、包埋、切片、染色后，制成病理切片，通過顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)檢查來對疾病進(jìn)行診斷的一種創(chuàng)傷性診斷技術(shù)；病理診斷是通過對病因、病機及病灶的形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能改變、疾病轉(zhuǎn)歸等進(jìn)行研究，為臨床相關(guān)疾病的診斷和治療、預(yù)防等提供參考的主要依據(jù)，是臨床對惡性腫瘤等多種疾病進(jìn)行確診的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining,HE)是石蠟切片技術(shù)常規(guī)染色方法，廣泛應(yīng)用于臨床病理檢查及教學(xué)研究，但該染色方法易受到切片染色效果、操作方式等相關(guān)因素的影響而導(dǎo)致制片質(zhì)量不高，因而影響了對臨床疾病診斷的效果[2]。本文通過對本院篩選出的150例石蠟切片樣本在技術(shù)改進(jìn)前后的染色效果進(jìn)行對比，探討HE染色對病理診斷的作用和效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇2019年2月至2020年2月本院各科室送檢的150例石蠟切片作為研究樣本，所選樣本均按照規(guī)范病理切片操作流程進(jìn)行HE染色，并完成染色組織學(xué)質(zhì)譜；切片類型包括脂肪、骨組織、胃腸等，其中胃鏡活檢切片26例、腸鏡活檢切片19例，子宮內(nèi)膜切片28例、脂肪組織切片35例、骨組織切片18例、胃腸及肝膽切片24例。

1.2 方法

1.2.1 HE染色方法及步驟

本次研究所選樣本中，大的組織、器官標(biāo)本，均從手術(shù)室獲得，小標(biāo)本來自內(nèi)窺鏡咬剪組織；骨組織用10%的硝酸水溶液脫鈣，脫鈣完全后，流水沖洗24h。標(biāo)本的獲取過程中，進(jìn)行了準(zhǔn)確、迅速的規(guī)范操作；根據(jù)病理組織的大小、物理形態(tài)和特征等，使用相應(yīng)的固定、脫水和染色的時間[3]；固定及時，固定液量充足，固定時間充分，對脂肪組織相對延長固定時間；切片厚薄均勻，完整，無刀痕和皺褶。

HE染色的主要操作步驟包括：（1）使用二甲苯進(jìn)行脫蠟2次，每次5-10min；（2）在脫蠟后，使用濃度為100%乙醇脫苯2次，每次2min；（3）使用95%、90%、80%的乙醇依次水化，各1次，每次1min，然后水洗1min;（4）使用蘇木素液進(jìn)行藍(lán)染5min，水洗1min；（5）使用1%鹽酸乙醇分化30s，水洗1min；（6）使用1%氨水進(jìn)行返藍(lán)30s，水洗2min；（7）使用伊紅液進(jìn)行紅染1min，水洗1min；（8）依次脫水：使用濃度為85%乙醇30s、90%乙醇30s、95%乙醇2次，每次1min、100%乙醇2次，每次2min;（9）使用二甲苯進(jìn)行透明3次，每次2min；（10）使用中性樹膠進(jìn)行封片，并進(jìn)行詳細(xì)標(biāo)注。

1.2.2 病理技術(shù)改進(jìn)方法

制片過程中，應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的大小、類型特點分別實施固定、脫水和染色處理操作。染色過程中保持染液的有效濃度，根據(jù)液體新舊程度，適當(dāng)縮短或延長脫苯、脫水的時間，并定期更換試劑；針對切片污染，應(yīng)定期過濾染液中的雜質(zhì)；組織藍(lán)染前充分水化；分化后充分水洗；返藍(lán)液濃度由1%增加到5%，在細(xì)胞核返藍(lán)時停止；伊紅染色后，在85%乙醇里脫水時間要短，防止伊紅脫色；脫水時增加一次100%乙醇，加強脫水效果；切片經(jīng)過透明后,不需要晾干，直接封片，濕封避免了過度干燥出現(xiàn)的核透明不良，有效控制了封片時氣泡的產(chǎn)生。經(jīng)過改進(jìn)后，染色效果明顯提高，清晰度增強，核質(zhì)分明：細(xì)胞核染成藍(lán)色、軟骨基質(zhì)、微生物和鈣鹽顆粒染成深藍(lán)色、細(xì)胞質(zhì)、肌肉、結(jié)締組織、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。

1.3 觀察指標(biāo)

對所選各類樣本在技術(shù)改進(jìn)前后的染色結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計記錄，并進(jìn)行對比分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所獲得的相關(guān)數(shù)據(jù)都通過SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進(jìn)行相關(guān)處理分析。計數(shù)指標(biāo)數(shù)據(jù)表示為（n，%），并使用χ2對比較結(jié)果進(jìn)行驗證；計量數(shù)據(jù)指標(biāo)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，結(jié)果進(jìn)行t檢驗；以組間數(shù)據(jù)對比，P＜0.05，表示差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對所有樣本在病理技術(shù)改進(jìn)前后的HE染色效果的統(tǒng)計結(jié)果顯示，胃鏡活檢、子宮內(nèi)膜、脂肪組織、骨組織、胃腸和肝膽各類組織切片的HE染色結(jié)果，在病理技術(shù)改進(jìn)后的效果均明顯高于改進(jìn)前，P＜0.05，表示組間數(shù)據(jù)對比差異明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 所選150例樣本病理技術(shù)改進(jìn)前后染色結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

目前，病理檢查廣泛地應(yīng)用于臨床對多種疾病的診療和臨床研究，并作為臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，病理診斷的準(zhǔn)確性已經(jīng)得到廣泛的臨床實踐證實[4]。但在病理診斷過程中，標(biāo)本獲取的組織質(zhì)量、固定、脫水、切片等每一個環(huán)節(jié)的操作質(zhì)量和準(zhǔn)確性，都可能對最終診斷的結(jié)果造成影響。

HE染色是臨床病理檢查中常規(guī)的一種染色方法，它通過對切片使用染料染色，讓切片物質(zhì)可更加充分地顯現(xiàn)，以便于使用顯微鏡對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，而組織染色的質(zhì)量與診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性密切相關(guān)[5]。因此，對細(xì)胞、組織的染色操作中，根據(jù)標(biāo)本的各種類型和特點，采取恰當(dāng)?shù)墓潭〞r間、取材操作方法、范圍、工具等，避免操作中對組織、細(xì)胞的結(jié)構(gòu)造成擠壓和改變，提高標(biāo)本染色質(zhì)量，可以有效提升臨床診斷的效果[6]。本次研究對胃鏡活檢、子宮內(nèi)膜、脂肪組織、骨組織、胃腸和肝膽各類組織切片所進(jìn)行的技術(shù)改進(jìn)前后染色效果對比，也充分證明這一觀點。

綜上所述，臨床對疾病的診斷過程中，病理檢查是最直接有效的權(quán)威診斷方式，而HE染色技術(shù)在其中具有非常重要的作用[7]；深入研究HE染色技術(shù)、不斷提升染色技術(shù)水平，能夠為疾病的診療提供更加有效的參考數(shù)據(jù)，值得相關(guān)醫(yī)療技術(shù)人員深入探討，尋找更加科學(xué)有效的技術(shù)提升措施和方法[8]。