山銀花和黃芩提取物對肉雞生長性能、免疫器官發(fā)育及抗氧化機能的影響

呂慧源，李 漠，王志明，梁 偉，聶 偉，咼于明*

（1.北京生泰爾科技股份有限公司，北京 102206；2.北京市中獸藥工程技術(shù)研究中心，北京 102206；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京 100193）

隨著我國畜禽養(yǎng)殖規(guī)?；约帮暳瞎I(yè)的發(fā)展，大量合成類藥物和飼料添加劑（如抗生素、激素、驅(qū)蟲藥、合成類促生長素、誘食劑等）得到廣泛應(yīng)用，然而有些物質(zhì)經(jīng)過生物富集現(xiàn)象會直接危害人類健康和污染環(huán)境。近年來，中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺了一系列管理政策來控制抗生素及化學(xué)合成類添加劑的使用，自2020 年1 月1 日起，退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種。中草藥具有提高畜禽生產(chǎn)性能、增強畜禽免疫力、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等功能性以及綠色、安全等特點，因此具有日益廣闊的應(yīng)用前景。

山銀花和黃芩提取物是將二者按照一定比例組合而成，主要活性單體為綠原酸和黃芩苷。綠原酸和黃芩苷具有抑菌、抗炎、抗氧化、增強免疫力等功能[1-5]。周志娥等[6]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸的抗菌作用主要是其對菌體細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的破壞，從而使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)滲出，使細(xì)菌死亡；黃濤等[7]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸可使肉雞血清的IgG 含量提高，也可提高飼料轉(zhuǎn)化效率。因此，綠原酸、黃芩苷在動物機體內(nèi)具有較好的生物活性，并最終改善動物的生長性能。本試驗旨在研究飼料中添加不同劑量的山銀花和黃芩提取物對肉雞生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)和抗氧化機能方面的影響，以篩選出合適的添加量，從而科學(xué)指導(dǎo)生產(chǎn)應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 山銀花和黃芩提取物（以下簡稱“植物提取物”）由北京生泰爾科技股份有限公司提供，其主要成分為綠原酸和黃芩苷。植物提取物生產(chǎn)工藝：將山銀花用純化水提取3 次，濾液經(jīng)負(fù)壓濃縮、噴粉，制得山銀花提取物；將黃芩用純化水提取3 次，經(jīng)負(fù)壓濃縮、酸沉、帶干，制得黃芩提取物。根據(jù)含量將山銀花提取物、黃芩提取物按一定比例混合，并加入葡萄糖（載體）混合均勻，即得山銀花和黃芩提取物（粒徑為100 目），其中綠原酸含量2.2 mg/g，黃芩苷含量22 mg/g。

1.2 試驗方法 選取1 日齡愛拔益加（AA）肉仔雞320只，隨機分成4 個組，每組8 個重復(fù)，每個重復(fù)10 只雞，試驗期42 d。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組在基礎(chǔ)日糧中分別添加125、250、500 mg/kg 植物提取物?；A(chǔ)日糧參照美國NRC（1994）營養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分表1。

表1 試驗基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗在中國農(nóng)業(yè)大學(xué)涿州試驗基地開展。試驗開始前對雞舍徹底清洗、消毒。按照每籠（200 cm×50 cm×35 cm）10 只進(jìn)行飼養(yǎng)試驗，試驗飼料冷壓制粒。雞新城疫、傳染性支氣管炎（二聯(lián)活疫苗）免疫在試驗第7 天通過滴鼻點眼進(jìn)行，新城疫疫苗免疫在試驗第21 天通過飲水進(jìn)行。1～3、4～7、8～14、15～21 日齡溫度分別控制在35、33、30、25℃。1～2、3、4、5、6～36、37、38、39～42 日齡光照時間分別控制在24、23、22、21、20、21、22、23 h。每天對雞舍通風(fēng)。

1.4 樣品采集與分析

1.4.1 生長性能測定 試驗肉雞分別在試驗第1、21、42 天稱重，并計算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.4.2 免疫器官指數(shù)的測定 試驗第21 天和第42 天，每重復(fù)按平均體重選取1 只雞頸動脈放血屠宰，分離試驗雞法氏囊、胸腺、脾臟，并稱重，計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量（g）/活體重（g）×1000

1.4.3 血清抗氧化指標(biāo) 21 和42 日齡，每個重復(fù)內(nèi)選取1 只肉雞，翅靜脈采血，室溫靜置4 h，3 000 r/min離心制備血清。比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性和總抗氧化力（T-AOC），羥胺法測定總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，TBA 法測定丙二醛（MDA）含量，鉬酸銨顯色法測定過氧化氫酶（CAT）含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計分析 用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，Ducan's 對各重復(fù)指標(biāo)進(jìn)行多重比較，并進(jìn)行線性和二次曲線回歸分析，0.05＜P＜0.1 表示回歸關(guān)系趨于顯著，P＜0.05 表示回歸關(guān)系顯著。

2 結(jié)果

2.1 植物提取物對肉仔雞生長性能的影響 由表2 可知，1～21 日齡，各植物提取物組21 d 體重、ADG、ADFI、F/G 與對照組無顯著性差異；各植物提取物組F/G 與對照組無顯著差異。

21～42 日 齡，250、500 mg/kg 植物提 取物組 的ADG 較對照組分別提高7.01%、7.84%（P＜0.05），且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）；各試驗組42 d 體重、21～42 d 的ADFI、F/G 與對照組均無顯著差異，但各試驗組的F/G 均低于對照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

1～42 日 齡，250、500 mg/kg 植物提 取物組 的ADG 較對照組分別提高5.02%、5.88%（P＜0.05），且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。各植物提取物組的F/G 均顯著低于對照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

2.2 植物提取物對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3 可知，21 日齡，各植物提取物組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均較對照組略有提高（P＞0.05），其中500 mg/kg植物提取物組最高。

42 日齡，250、500 mg/kg 植物提取物組的胸腺指數(shù)顯著高于對照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P=0.010）。各植物提取物組的法氏囊指數(shù)均顯著高于對照組，且呈線性關(guān)系（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。各植物提取物組脾臟指數(shù)均高于對照組（P＞0.05），呈線性相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

2.3 植物提取物對肉仔雞血清抗氧化能力的影響 由表4 可知，在21 日齡，500 mg/kg 植物提取物組的CAT 活性顯著高于對照組，125、250 mg/kg 植物提取物組與對照組差異不顯著，CAT 活性隨植物提取物劑量呈線性增加（P＜0.01）或二次曲線增加（P＜0.05）。500 mg/kg植物提取物組MDA 含量顯著低于對照組，MDA 含量隨植物提取物劑量呈線性降低（P＜0.01）或二次曲線降低（P＜0.01）。各植物提取物組T-AOC、T-SOD、GSH-Px 均高于對照組（P＞0.05），其中500 mg/kg 植物提取物組各指標(biāo)含量均最高。

在42 日齡，500 mg/kg 植物提取物組的CAT、GSH-Px 含量均顯著高于對照組，與125、250 mg/kg植物提取物組差異不顯著，CAT、GSH-Px 活性隨植物提取物劑量呈線性增加（P＜0.01）或二次曲線增加（P＜0.05）。500 mg/kg 植物提取物組MDA 含量顯著低于對照組，125、250 mg/kg 植物提取物組較對照組均有降低（P＞0.05），MDA 含量隨植物提取物劑量呈線性降低（P＜0.01）或二次曲線降低（P=0.01）。各植物提取物組的T-AOC、T-SOD 均高于對照組（P＞0.05），其中500 mg/kg 植物提取物組最高。

3 討 論

3.1 飼糧中添加植物提取物對肉雞生長性能的影響 植物提取物中的有機酸和黃酮類物質(zhì)均有調(diào)節(jié)腸道菌群、抗氧化、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收等功能。綠原酸是一種多酚類化合物，能提供活潑性很強的氫離子與自由基反應(yīng)，以消除羥基自由基和超氧陰離子等活性，抵抗氧化損傷。綠原酸及黃芩苷可以促進(jìn)動物機體相應(yīng)抗氧化酶的生物活性，增強機體的抗氧化能力，從而在一定程度上緩解畜禽應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)動物生長[8]。本研究中，在試驗21～42 日齡及全期，250 mg/kg 和500 mg/kg 植物提取物組的ADG 均顯著高于對照組，F(xiàn)/G 均低于對照組，與在肉雞[9]、小鼠[10]飼糧中添加黃芩黃酮、綠原酸的結(jié)果一致。這可能是由于黃芩黃酮、綠原酸能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，促進(jìn)胃腸道蠕動，提高飼料轉(zhuǎn)化率，進(jìn)而提高動物生長性能。

表2 植物提取物對肉仔雞生長性能的影響

表3 植物提取物對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 ‰

表4 植物提取物對肉雞血清抗氧化性能的影響

3.2 飼糧中添加植物提取物對肉雞免疫器官指數(shù)的影響機體免疫機能與其免疫器官發(fā)育密切相關(guān)，胸腺、法氏囊和脾臟的發(fā)育程度對機體的免疫功能產(chǎn)生直接影響[11-12]。本試驗結(jié)果表明，在肉雞生長前期各試驗組的免疫器官指數(shù)均比對照組有一定程度提高，在試驗后期，250 mg/kg組和500 mg/kg 組的胸腺及法氏囊指數(shù)均有顯著提高，綜合各階段，飼糧中添加不同水平植物提取物后各項免疫器官指數(shù)均較高，這與在小鼠[13]、雞[14-15]上的研究結(jié)果一致?？赡苁且驗榫G原酸、黃芩苷具有抗炎抑菌作用，有利于機體抵御病原微生物的侵害，使機體的免疫能力增強。

3.3 飼糧中添加植物提取物對肉雞血清抗氧化機能的影響 機體不正常的代謝會產(chǎn)生大量的氧自由基，過量的自由基會對動物造成氧化應(yīng)激，機體不僅會產(chǎn)生各種代謝疾病，還會發(fā)生脂質(zhì)過氧化，使細(xì)胞中的脂質(zhì)受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞的功能和完整性受損，若不能及時修復(fù)，則會誘發(fā)疾病或引起死亡，最終使得畜禽的免疫力、生產(chǎn)力、產(chǎn)品質(zhì)量降低等[16]。

賴星[17]研究表明，綠原酸能夠提高斷奶仔豬血漿T-AOC、T-SOD 活性、GSH-Px 活性，從而在一定程度上緩解斷奶應(yīng)激，促進(jìn)斷奶仔豬健康生長；劉英等[18]研究表明，綠原酸主要通過抗氧化促進(jìn)動物生長，體內(nèi)體外試驗均證明綠原酸具有較強的清除自由基的能力，從而保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性，促進(jìn)養(yǎng)分的吸收和利用，有利于促進(jìn)動物機體健康生長。

本試驗中，日糧中添加不同水平的植物提取物均可有效提高肉雞血清中CAT、T-AOC、T-SOD 和GSH-Px水平，且添加量為500 mg/kg 組的效果最好，各項抗氧化指標(biāo)的結(jié)果均達(dá)最大值，并能顯著降低MDA 含量，從而提高機體抗氧化的能力，這與在中華鱉[19]、凡納濱對蝦[20]、小鼠[21]上的研究結(jié)果一致。因為山銀花和黃芩提取物中有效成分綠原酸、黃芩苷可以通過增強機體抗氧化物酶活性、抑制機體氧化酶活性這兩個途徑來緩解氧化應(yīng)激，以使動物機體的抗氧化能力得到提升。

4 結(jié) 論

在本試驗條件下，肉雞飼糧中添加山銀花和黃芩提取物可以提高生長性能、促進(jìn)免疫器官發(fā)育以及提高血清抗氧化性能，其中添加量為500 mg/kg 時效果最佳。