胡蘆巴生制品降血脂功效研究

姜明月，葉斌斌，曲揚，鄭彧，敖楠楠，鞠成國

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

高血脂是人體內(nèi)脂肪代謝或轉(zhuǎn)運異常引起的血清脂質(zhì)和脂蛋白水平升高的一種代謝性疾病[1]。長期血脂過高會引發(fā)機體代謝紊亂，高血脂也是導(dǎo)致動脈粥樣硬化及心腦血管疾病的重要因素之一[2-3]。目前，國內(nèi)外對高血脂的化學(xué)藥物治療以他汀類為主,他汀類藥物具有明確的作用機制,但也具有一定的毒副作用[4]。因此，中藥由于其毒副作用小的的獨特優(yōu)勢，也常常被用于治療高血脂。胡蘆巴(Trigonellafoenum-graecumL.)入肝、腎經(jīng)[5]，具有藥食同源的特性，其主要成分胡蘆巴堿、薯蕷皂苷元、胡蘆巴多糖、4-羥基異亮氨酸、牡荊素都具有降血脂作用[6-18]。胡蘆巴生品的降血脂療效已有文獻報道[19-22]，但關(guān)于胡蘆巴炮制品的降脂療效及胡蘆巴生、制品在降脂方面的藥效差異未見報道。高血脂在中醫(yī)學(xué)中屬于“血瘀”“痰濁”等范疇,中醫(yī)的高血脂類型包括脾腎陽虛型、肝腎陰虛型、氣滯血瘀型等[23-25]。鹽制入腎[26]，可能會增加胡蘆巴溫補腎陽的作用；而酒制升提，具有活血通絡(luò)、助溶的作用[27]，故推測胡蘆巴經(jīng)鹽制和酒制后降血脂療效可能會增強。本實驗通過喂食高脂高糖飼料,構(gòu)建小鼠高血脂模型，以甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、體重、肝指數(shù)來反映胡蘆巴生、制品治療組之間的藥效差異，為胡蘆巴炮制品藥效的進一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 KM小鼠80只，雄性，18～22 g，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司。許可證號：SCXK(遼)2015-0001。在遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗室，室溫20～22 ℃，濕度50%±2%,12 h/12 h明暗周期的環(huán)境下分籠飼養(yǎng)。每日更換墊料，提供充足的水和飼料。

1.2 實驗儀器 KHB ST-360 酶標(biāo)儀(上?？迫A生物工程股份有限公司)；UVmini-1240紫外可見分光光度計(日本島津公司)；DFT-50便攜式高速萬能粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；9030A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；AE240十萬分之一分析天平(瑞士Mettler公司)；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.3 藥品與試劑 胡蘆巴(Trigonellafoenum-graecumL.)干燥、成熟種子(安徽，批號：161026)；辛伐他汀片(蘇州俞氏藥業(yè)有限公司，批號：161207)；血清總膽固醇(TC)檢測試劑盒(批號：20170321)、甘油三酯(TG)檢測試劑盒(批號：20170322)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒(批號：20170317)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測試劑盒(批號：20170320)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒(批號：20170614)、谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒(批號：20170614)均購自南京建成生物工程研究所。精制鹽(遼寧省鹽務(wù)管理局監(jiān)制，大連鹽業(yè)有限公司專營，批號:GB5461-2000、GB26878-2011)；羧甲基纖維素鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠)。龍泉黃酒(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號GB/T 13662-2008)由大連長興島酒業(yè)有限公司提供。

高脂飼料配方：74.8%基礎(chǔ)飼料，8%蛋黃粉，8%豬油，8%葡萄糖，1%膽固醇，0.2%豬膽鹽，充分混勻，加適量的水，揉成面團，最后放入模具壓制成型放入托盤，剪成適當(dāng)長度，最后放入烘箱，100 ℃烘干即可。

2 實驗方法

2.1 炮制品制備 酒制[28]：100 g生品胡蘆巴用30 g黃酒，保鮮膜封口，充分混勻，晃動，悶潤70 min，放入160 ℃烘箱，烘制10 min。

鹽制[29]：100 g生品胡蘆巴用2 g食鹽(食鹽∶水=100 g∶40 mL)，保鮮膜封口，充分混勻，晃動，悶潤4 h，放入160 ℃烘箱，烘制10 min。

2.2 胡蘆巴生、制品灌胃提取液制備 胡蘆巴生、制品粉碎過60目篩。稱取種子粉末30 g，加入料液比為1∶5(m/V)的甲醇，浸泡30 min；超聲提取30 min后，共兩次，抽濾，合并濾液。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至膏狀，加入0.5%的羧甲基纖維素鈉，定容至100 mL，制成混懸液，即得胡蘆巴生、制品組給藥溶液。

2.3 動物分組及給藥 雄性小鼠80只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，隨機分出10只小鼠作為空白組，其余的70只進行高血脂造模，稱重。空白組和造模組分別給予普通飼料和高脂高糖飼料喂養(yǎng)，21 d后稱重，斷尾取血，檢測血清中TC、TG水平，造模組與空白組小鼠血清中TG、TC有顯著性差異的小鼠視為造模成功，按分別將3個指標(biāo)按數(shù)值大小的層次分好，按照TG、TC、體重值大小分組，盡可能使不同組別都具有不同層次TG、TC、體重值，最后利用SPSS對分組后大鼠的TG、TC、體重的顯著性結(jié)果進行檢驗，以各組之間無顯著性作為分組結(jié)果。分為模型組、辛伐他汀組、生品組、鹽制品組、酒制品組。分組后各組灌胃給予相應(yīng)濃度的藥物溶液，胡蘆巴生、制品組(濃度20 mg·kg-1)，空白組與模型組按照相同劑量的生理鹽水進行灌胃，辛伐他汀組(0.25 g·kg-1)，共計21 d，治療期間所有組均給予正常飼料喂養(yǎng)。

2.4 指標(biāo)測定 末次給藥后，各組動物禁食(不禁水)12 h，稱重。摘除眼球取血，室溫靜置2 h后，4 ℃，3 000 r·min-1，10 min，離心得上清液。取肝臟，用4 ℃生理鹽水沖盡殘血，濾紙拍去多余水分，稱重，與體重一起計算肝指數(shù)。按試劑盒說明書中方法分別測定血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量及AST、ALT的酶活性，體重、肝臟指數(shù)(%)=肝臟質(zhì)量(g)/小鼠體重(g)×100%。

3 結(jié)果

3.1 小鼠高血脂模型的建立 小鼠高脂高糖飼料喂飼21 d后，與正常對照組相比造模組體重、TC、TG顯著升高(P<0.01)，分組后，體重、TC、TG在模型組、辛伐他汀組、生品組、鹽制品組、酒制品組之間均無顯著性差異(P>0.05)，說明小鼠高血脂模型建立成功，分組合理，結(jié)果見表1。

3.2 胡蘆巴生品、制品治療21 d后小鼠體重的測定結(jié)果 與空白組相比，模型組小鼠的體重顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，胡蘆巴生、制品組小鼠的體重顯著降低(P<0.05)，但生、制品組間均無顯著性差異，說明胡蘆巴的鹽制品、酒制品調(diào)節(jié)體重的作用與生品無異，結(jié)果見表2。

表1 造模21 d后小鼠血清生化指標(biāo)測定結(jié)果

3.3 胡蘆巴生品、制品治療21 d后小鼠肝指數(shù)的計算結(jié)果 與空白組相比，模型組小鼠的肝指數(shù)顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，胡蘆巴生、制品組小鼠的肝指數(shù)顯著降低(P<0.05)，生、制品組間均無顯著性差異，說明胡蘆巴的鹽制品、酒制品調(diào)節(jié)肝指數(shù)的作用與生品無異，結(jié)果見表2。

3.4 胡蘆巴生品、制品治療21 d后小鼠血脂指標(biāo)的測定結(jié)果 與空白組相比，模型組小鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，胡蘆巴生、酒制品組小鼠的TG、TC、LDL-C顯著降低(P<0.05)，鹽制品組TG、TC(P<0.01)、LDL-C(P<0.05)顯著降低。對TG、TC的調(diào)節(jié)作用，鹽制品組要優(yōu)于生品組(P<0.05)，說明胡蘆巴鹽制后調(diào)節(jié)血脂的作用增強，結(jié)果見表2。

3.5 胡蘆巴生品、制品治療21 d后小鼠AST、ALT的測定結(jié)果 與空白組相比，模型組小鼠的AST、ALT顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，胡蘆巴生、鹽制品組小鼠的AST、ALT顯著降低(P<0.05)，酒制品組也顯著降低(P<0.01)。且酒制品組與生品組之間具有顯著性差異(P<0.05)，說明胡蘆巴經(jīng)過酒制后調(diào)節(jié)AST、ALT作用增強，增強了對肝臟的保護作用，結(jié)果見表2。

4 討論

高脂血癥是由于各種原因?qū)е卵獫{中TC、TG和(或)LDL-C過高或HDL-C過低的一種脂代謝異常性疾病，又被稱為脂質(zhì)異常血癥[30]。相關(guān)文獻表明在高血脂患者中脂肪肝的檢出率明顯高于血脂正常者脂肪肝的檢出率[31-32]，是導(dǎo)致脂肪肝發(fā)生的主

表2 治療21 d后小鼠血清生化指標(biāo)測定結(jié)果

要因素[33-34]。因此本實驗在將TG、TC、HDL-C、LDL-C 4個評價高血脂療效的常規(guī)指標(biāo)納入檢測范圍的基礎(chǔ)上，又增加了AST、ALT、肝指數(shù)這3個評價脂肪肝的指標(biāo)，作為進一步評價胡蘆巴藥效的標(biāo)準(zhǔn)。

在本實驗中，造模小鼠的TG、TC水平與空白組相比具有顯著性差異，說明小鼠高血脂模型建立成功。胡蘆巴生、制品組對肝指數(shù)、體重、LDL-C的回調(diào)作用三者之間均無顯著性差異。但胡蘆巴酒制品下調(diào)AST、ALT的作用以及鹽制品下調(diào)TG、TC的作用增強，說明胡蘆巴經(jīng)鹽制后降血脂作用增強，經(jīng)酒制后肝保護的作用增強。究其原因，一方面可能是胡蘆巴經(jīng)過炮制后，種子膨脹，種皮爆破，質(zhì)地變得疏松，易粉碎，有利于有效成分煎出，增加了有效成分的提取率[35]。另一方面可能是胡蘆巴經(jīng)鹽制后，可使有效成分胡蘆巴堿、薯蕷皂苷元、胡蘆巴多糖的含量升高[29]；而胡蘆巴經(jīng)酒制后，也可使有效成分胡蘆巴多糖、胡蘆巴堿的含量升高[28,36]，且酒可引藥上行，具有活血通絡(luò)、助溶的作用[37]。

本實驗明確了胡蘆巴鹽制后調(diào)節(jié)TG、TC作用增強，酒制后調(diào)節(jié)AST、ALT的作用增強，但未對引起藥效差異的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)做進一步的研究。因此，為開發(fā)胡蘆巴及其炮制品的臨床應(yīng)用奠定實驗基礎(chǔ)，可對胡蘆巴的作用機制做進一步研究。