甜茶皂甙對變形鏈球菌抑齲性的研究*

李 莉 王玉波 陳岱韻 李俊福

(1.青島市口腔醫(yī)院，山東 青島 266001；2.泰山醫(yī)學院附屬醫(yī)院口腔科，山東 泰安 271000)

變形鏈球菌致齲是在牙面的粘附和集聚[1]，利用碳水化合物代謝產(chǎn)酸，酸性產(chǎn)物作用于牙體硬組織造成脫礦，導致齲病的發(fā)生[2]。因此,控制致齲細菌粘附在牙面,是預防齲病的有效的措施之一。甜茶含氨基酸、維生素C 以及礦物質(zhì)等,對陰虛燥咳、咽干口燥、咽喉炎癥，糖尿病、肥胖癥、高血壓等，均有輔助治療作用[3]，甜茶素有高甜度，可以作為糖替代品。

1 材料和方法

1.1變形鏈球菌(Streptococcus Mutans)國際標準株ATCC25175(由上海交通大學醫(yī)學院中心實驗室購買)。

1.2甜茶提取物—甜茶皂甙(本課題組提供)。

1.3厭氧培養(yǎng)箱BACTRON 1.5(美國SHELLAB公司)、紫外可見分光光度計(LAMBE DA BIO 20(美國PE公司)、臺式離心機5415D(德國EPPENDOR公司)。

1.4MSB 選擇培養(yǎng)基(Mitis-Salivaris-Bacitracin Agar)(輕唾瓊脂培養(yǎng)基)：胰蛋白胨10 g，示蛋白胨10 g，蔗糖200 g，葡萄糖1 g，無水磷酸氫二鉀4 g，瓊脂粉20 g，加入1000 ml 蒸餾水中溶解，調(diào)pH 至7.6，再加入 0.2%曲利苯藍 3.5 ml，0.1%結晶紫 0.8 ml, 于15 Ib/in2、110 ℃ 下高壓滅菌15 min，冷卻至55 ℃ 左右，加入0.1% 亞碲酸鉀2.8 ml，200 unit/ml桿菌肽1ml。

1.5基礎培養(yǎng)液配制[4]：胰蛋白胨20 g，氯化鈉2 g，蔗糖50 g，三水磷酸氫二鉀3.92 g，無水磷酸二氫鉀2 g，碳酸鉀1 g ,硫酸鎂0.12 g，硫酸錳0.15 g, 適量酵母浸汁、半胱氨酸，加蒸餾水1000ml，調(diào)pH=7.4， 121 ℃，8磅15 min高壓滅菌。

1.6變形鏈球菌ATCC25175活化后接種于 MSB固體培養(yǎng)基上，厭氧培養(yǎng)48 h，涂片檢查為純培養(yǎng)后，取典型菌落，于無菌生理鹽水內(nèi)制成混懸液，紫外可見光比濁儀調(diào)麥氏值=0.5，此時細菌濃度為108CFU/ml(參照儀器使用說明)。

1.7實驗組：配制濃度為5 g/100 ml的過飽和甜茶皂甙混懸液，用基礎培養(yǎng)液進行液體二倍稀釋法稀釋[5]，得到濃度依次為5 g/100 ml、2.5 g/100 ml、1.25 g/100 ml、 0.625 g/100 ml、0.313 g/100 ml、0.156 g/100 ml的10 ml溶液。對照組為10 ml基礎培養(yǎng)液。分別加入0.1 ml菌懸液，即菌濃度為106CFU/ml。將玻棒分別插入各支試管(插入培養(yǎng)液的長度為10 cm)，厭氧培養(yǎng)48小時，取出玻棒，生理鹽水沖洗10秒，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液于震蕩器將玻棒上黏附的菌細胞洗脫下來，3000轉(zhuǎn)/min、4℃離心15分鐘，洗滌2次，混懸于 10ml 生理鹽水中，紫外可見光分光光度計測OD540 nm值，以OD值來表示變形鏈球菌對玻棒的粘附能力。

2 結 果

表1 甜茶皂甙對變形鏈球菌的玻棒黏附的成組間單因素方差分析

從表1可見，甜茶皂甙的濃度≥0.625 g/100 ml時，變形鏈球菌對玻璃棒的黏附低于無甜茶皂甙的對照組，P<0.01，差異非常顯著，結果有統(tǒng)計學意義；當甜茶皂甙濃度再減低，變形鏈球菌的黏附性與對照組相比差異無顯著性，P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義。這個結果表明，當甜茶皂甙在濃度高于或等于0.625 g/100 ml 時對變形鏈球菌的黏附有抑制性，黏附力隨甜茶皂甙濃度升高而降低；當甜茶皂甙濃度低于0.625g/100ml 時，對變形鏈球菌的黏附無抑制性。

3 討 論

近年來許多學者都致力于尋找一種天然的非致齲性甜味劑，甜茶是一種價廉、無毒副作用的糖代物，本實驗表明，甜茶皂甙的濃度≥6.25 g/l時，對變形鏈球菌的黏附有抑制性，黏附力隨甜茶皂甙濃度升高而降低。

2003年楚金普曾研究同一藥物濃度(5%)甜茶提取物、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、果糖、木糖醇對變形鏈球菌的生長、粘附、產(chǎn)酸的影響，探討甜茶的防齲作用。本實驗在這一實驗的基礎上，單獨對不同濃度的更精煉提取的甜茶皂甙對變形鏈球菌粘附的作用。甜茶皂甙與各種天然甜味植物的提取物相比，其甜度、不同濃度下的抑菌能力、在健康保健方面及提取量等方面的差別的綜合評估，還需試驗進一步研究。

綜上所述，當甜茶皂甙在濃度高于或等于0.6.25 mg/ml 時，對變形鏈球菌的黏附有抑制性。對于齲病的防治，甜茶具有極大的研究價值和應用前景。

[1] Tsumori H ,Kuramitsu H. The role of the Streptococcus mutans glucosyltransferases in the sucrose-dependent attachment to smooth surfaces : essential role of the GtfC enzyme[J].Oral Microbiol Immun , 1997 , 12(5) :274-278.

[2] Leosch WJ. Role of Streptococcus Matans in human dental decay[J]. Microbiol Rev，1986，50(4):353-380.

[3] 黃漢強. 甜茶應用研究[J].時珍國醫(yī)研究，1996，7(2)：118.

[4] 劉天佳，桂和明，肖曉蓉，等. 甜菊糖對變形鏈球菌的生長、產(chǎn)酸和黏附影響的體外實驗[J]. 華西口腔醫(yī)學雜志，1986，4(3)：165-168.

[5] 朱秀麗，陳強，唐榮銀，等. 五倍子對5種常見牙周細菌抑制作用的體外研究[J].牙體牙髓牙周病學雜志，2002，12(5)：255-257.