• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    兩種黃芪劑量補(bǔ)陽還五湯對(duì)海綿體神經(jīng)損傷性大鼠勃起功能障礙的治療效果

    2021-01-14 08:33:30周康葉妙勇趙凡馬軻呂伯東許增寶
    關(guān)鍵詞:海綿體補(bǔ)陽陰莖

    周康,葉妙勇,趙凡,馬軻,呂伯東,許增寶

    (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院,杭州 310053;2.溫嶺市第一人民醫(yī)院泌尿外科,浙江溫嶺 317500;3.南通大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科/男科,江蘇南通 226001;4.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院泌尿男科,杭州 310005;5.浙江省中醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/男科實(shí)驗(yàn)室,杭州 310053;6.浙江中醫(yī)藥大學(xué)泌尿男科研究所,杭州 310005;7.湖州市中醫(yī)院,浙江湖州 313000)

    勃起功能障礙(erectile dysfunction,ED)是前列腺癌根治術(shù)(radical prostatectomy,RP)后最為常見的長(zhǎng)期并發(fā)癥[1]。盡管目前RP在不斷改進(jìn),但即使采用保留雙側(cè)神經(jīng)和微創(chuàng)RP仍不可避免地出現(xiàn)一定程度的海綿體神經(jīng)(cavernous nerves,CN)損傷或神經(jīng)失用,進(jìn)而導(dǎo)致ED[2]。5型磷酸二酯酶抑制劑(phosphodiesterase type 5 inhibitors,PDE5i)通常作為RP后ED的一線治療,然而據(jù)調(diào)查顯示,RP后ED患者于術(shù)后服用3~36個(gè)月PDE5i,其國(guó)際勃起功能指數(shù)-5(IIEF-5)評(píng)分沒有顯著變化(P=0.87)[3],可見PDE5i對(duì)RP后ED治療效果較為局限。從中醫(yī)角度來看,筆者所在團(tuán)隊(duì)前期研究得出“氣血失和”可能是勃起功能障礙的基本病因這一結(jié)論[4-5],故治以益氣活血。

    補(bǔ)陽還五湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)》,由清代醫(yī)家王清任所創(chuàng),功主益氣活血,且近來大量研究表明補(bǔ)陽還五湯具有神經(jīng)保護(hù)功能[6-7]。胡衛(wèi)東等[8]運(yùn)用加味補(bǔ)陽還五湯治療糖尿病性ED,取得較好的療效,但細(xì)觀文獻(xiàn)中所用黃芪量?jī)H為30 g,而原方中所記載的120 g相差甚遠(yuǎn)。那么,補(bǔ)陽還五湯中黃芪劑量的高低與其神經(jīng)保護(hù)功能從而改善勃起功能障礙是否密切相關(guān),值得深入研究。本文就這一問題,探討不同黃芪劑量補(bǔ)陽還五湯對(duì)海綿體神經(jīng)損傷性大鼠勃起功能障礙的治療效果。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    32只8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠,體重(200±15)g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供,【SCXK(滬)2017-0005】,并由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng),【SYXK(浙)2019-0022】。飼養(yǎng)期間給予嚙齒類動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及自由飲水,控制溫度(23±2)℃、濕度60%,12 h循環(huán)燈光。實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處理符合2006年科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》,所有操作均符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求(倫理審批號(hào):IACUC-20190909-26)。32只大鼠隨機(jī)分為4組,即假手術(shù)組、模型組、30 g組(模型 +30 g黃芪補(bǔ)陽還五湯)、120 g組(模型 +120 g黃芪補(bǔ)陽還五湯),每組8只。

    1.1.2 藥物

    補(bǔ)陽還五湯中:赤芍:15 g、桃仁:15 g、當(dāng)歸:15 g、川芎:15 g、地龍:15 g、紅花:6 g,30 g組黃芪為30 g,120 g組黃芪為120 g(所有藥材由浙江中醫(yī)藥大學(xué)名中醫(yī)館提供)。將所有中藥浸于10倍體積純水中30 min,然后煮沸2次,每次約1 h,合并水煎液后,濃縮至水煎液濃度為1 g/mL,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.3 主要試劑與儀器

    戊巴比妥鈉(上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司,批號(hào):abs47047376),Masson三色染色試劑盒購于南京建成科技有限公司(批號(hào):D026-1-3),神經(jīng)型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)抗體(Abcam,批號(hào):ab15280),神經(jīng)絲蛋白輕鏈多肽(neurofilament light polypeptide,NF-L)抗體(Abcam,批號(hào):ab134460),生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(growth associated protein 43,GAP-43)抗體(CST,批號(hào):5307S)。

    MP160型16通道生理記錄分析系統(tǒng)購于美國(guó)BIOPAC公司;Master-8可編程刺激器購于以色列AMPI;SDS-PAGE 垂直電泳槽(MP-8001,北京凱元伯樂生物科技有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 造模及干預(yù)方法

    參考課題組前期研究的造模方法[9],將SD大鼠腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。剃除腹腔部絨毛,并用碘酒進(jìn)行術(shù)前消毒。于大鼠下腹部中線處作一縱行切口,暴露前列腺組織。在外科顯微鏡下于背側(cè)前列腺外側(cè)葉表面找到盆腔神經(jīng)節(jié)及其發(fā)出的海綿體神經(jīng),利用止血鉗鉗夾海綿體神經(jīng)2 min,繼而還原周圍組織正常解剖結(jié)構(gòu)并逐層縫合關(guān)服。術(shù)后抗生素喂養(yǎng)5 d。假手術(shù)組分離出海綿體神經(jīng)后,不作鉗夾處理,余同上。術(shù)后5 d起開始給藥,給藥劑量根據(jù)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人的體表面積比例進(jìn)行劑量換算,給以12.8 g/kg對(duì)應(yīng)黃芪劑量的補(bǔ)陽還五湯灌胃,假手術(shù)組與模型組均予以等量生理鹽水灌胃。每天1次,連續(xù)30 d。

    1.2.2 ICP檢測(cè)

    灌胃30 d后,腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后仰臥固定,如造模方法中所操作暴露海綿體神經(jīng);陰莖包皮縱行切口,分離皮膚與白膜,暴露陰莖海綿體,插入25G金屬針頭后連接PE50管,置管連接于壓力換能器,以測(cè)定陰莖海綿體內(nèi)壓。雙極電鉤刺激海綿體神經(jīng),記錄ICP,電刺激參數(shù):5 V,15 Hz,5 ms,刺激持續(xù)時(shí)間 1 min,每次刺激間隔5 min[10]。

    1.2.3 樣本收集

    ICP測(cè)定后,使用眼科剪離斷陰莖根部,分離陰莖龜頭部分,取陰莖,于PBS中沖洗,去除海綿體內(nèi)血液。沖洗完的陰莖組織分為三段,一段在預(yù)冷PBS中分離去除尿道、筋膜后放入-80℃冰箱保存,用于后續(xù)Western Blot檢測(cè);剩余陰莖組織放入4%多聚甲醛中固定。

    1.2.4 Masson染色

    經(jīng)聚甲醛溶液固定的陰莖組織,常規(guī)石蠟包埋切片,蒸餾水潤(rùn)濕玻片30 s,核染液染色60 s,丟棄,沖洗液沖洗30 s。漿染液染色30 s,丟棄,沖洗液沖洗30 s。黃色分色液分色8 min左右棄去分色液,直接用藍(lán)色復(fù)染液染色5 min左右,丟棄,使用無水乙醇沖洗干凈,載玻片吹干后使用封片劑封片,顯微鏡下觀察。

    1.2.5 免疫熒光檢測(cè)

    經(jīng)聚甲醛溶液固定的陰莖組織,常規(guī)石蠟包埋切片,石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,PBS沖洗3次,每次3 min;3%H2O2室溫孵育 10 min,PBS 沖洗;微波溫和修復(fù)15 min;PBS沖洗3次;5%山羊血清室溫封閉30 min;按1∶200稀釋比例分別加入抗nNOS、NFL、GAP43一抗,DAPI行細(xì)胞核染色,4℃過夜后分別加入1∶1000稀釋的熒光二抗,避光孵育1 h,滴加抗熒光衰減封片劑封片后置于4℃條件下保存,熒光顯微鏡下觀察拍片,并用Image J軟件測(cè)定陽性區(qū)域的面積。

    1.2.6 Western Blot檢測(cè)

    取剩余陰莖組織研磨成勻漿,加入RIPA裂解液置于冰上裂解30 min后,12 000 r/min 4℃離心15 min。離心獲得蛋白用BCA法測(cè)定濃度,加入5×蛋白上樣緩沖液95℃變性10 min;10%SDSPAGE凝膠電泳分離蛋白,電泳后的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后用5%的脫脂奶粉室溫封閉1 h,TBST洗膜3次后加入相應(yīng)一抗4℃孵育過夜;次日TBST洗去一抗,加入對(duì)應(yīng)種屬的二抗,室溫孵育1 h,TBST洗膜3次,去離子水洗膜 1次之后,用ODYSSEY雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃膜,并使用Image Studio Ver 2.0軟件處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 海綿體神經(jīng)解剖位置、夾損及陰莖海綿體內(nèi)壓測(cè)定

    盆神經(jīng)節(jié)于兩側(cè)前列腺背外側(cè)方,呈“人”字形,其傳出神經(jīng)即為海綿體神經(jīng)(圖1a);海綿體神經(jīng)夾損(圖1b);ICP測(cè)定方法(圖1c)。

    圖1 海綿體神經(jīng)解剖位置、夾損及陰莖海綿體內(nèi)壓測(cè)定Note.a.anatomic location of cavernous nerve.b.ED caused by cavernous nerve clipped.c.ICP determination.Figure 1 Anatomical location of cavernous nerve,clip injury and ICP measurement

    2.2 大鼠陰莖海綿體組織Masson三色染色

    各組大鼠陰莖海綿體組織Masson三色染色中,大鼠海綿竇內(nèi)平滑肌如圖2a,紅色箭頭所示。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠陰莖海綿體平滑肌面積/膠原面積顯著下降(P<0.01);與模型組比較,30 g組及120 g組大鼠陰莖海綿體平滑肌面積/膠原面積明顯提高(P<0.01);與30 g組比較,120 g組大鼠陰莖海綿體平滑肌面積/膠原面積提高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見圖2b)。

    2.3 大鼠陰莖海綿體內(nèi)壓測(cè)定

    與假手術(shù)相比,模型組大鼠勃起時(shí)ICP具有顯著性差異(P<0.01),即造模成功,與模型組相比,30 g組與120 g組ICP均有顯著提高(P<0.01),與30 g相比,120 g組大鼠 ICP明顯升高(P<0.05)(見圖3)。

    2.4 大鼠海綿體神經(jīng)免疫熒光檢測(cè)

    相對(duì)于假手術(shù)組,模型組大鼠海綿體神經(jīng)中nNOS、NF-L、GAP43含量在海綿體神經(jīng)損傷后顯著降低(P<0.01),經(jīng)補(bǔ)陽還五湯治療后,30 g組和120 g組大鼠陰莖海綿體神經(jīng)中nNOS、NF-L、GAP43表達(dá)量顯著增高(P<0.01),且120 g組表達(dá)量顯著高于30 g組(P<0.01)(見圖4)。

    2.5 各組大鼠海綿體組織nNOS、NF-L、GAP43含量變化

    與假手術(shù)組相比,模型組大鼠海綿體組織中nNOS、NF-L顯著下降(P< 0.01),GAP43顯著提高(P<0.01);與模型組相比,30 g組和 120 g組nNOS、NF-L、GAP43含量顯著升高(P< 0.01);與30 g組相比,120 g組 nNOS、NF-L、GAP43含量明顯增加(P<0.01)(見圖5)。

    圖2 Masson三色染色顯示大鼠陰莖海綿體組織中平滑肌和膠原纖維含量(n=3)Note.The red arrows indicate smooth muscles.Compared with sham operation group, &&P< 0.01.Compared with model group, ??P< 0.01.Compared with group 30 g,#P< 0.05, ##P< 0.01.(The same in the following figures)Figure 2 Masson trichrome stain shows the content of smooth muscle and collagen fibers in the spongy tissues of rat penises(n=3)

    圖3 各組大鼠海綿體內(nèi)壓測(cè)定結(jié)果(n=3)Figure 3 ICP measurement results in each group(n=3)

    圖5 各組大鼠海綿體nNOS、NF-L、GAP43表達(dá)變化(n=3)Figure 5 Expression changes of nNOS、NF-L and GAP43 in cavernous of rats in each group(n=3)

    3 討論

    海綿體神經(jīng)損傷屬于周圍神經(jīng)損傷,祖國(guó)醫(yī)學(xué)中無此病名,但據(jù)其臨床表現(xiàn)癥狀,與中醫(yī)所謂“痹癥”和“痿證”頗為相似,當(dāng)屬經(jīng)絡(luò)傷之范疇?!稄V嗣紀(jì)要·協(xié)期》曰:“氣至則血至,陰莖則勃起剛”,可見男性的勃起需要健全的血?dú)膺\(yùn)行[11],反而言之,當(dāng)氣血運(yùn)行受阻則“血少不充,陰莖不怒”。RP后ED病機(jī)多為經(jīng)絡(luò)不通,經(jīng)氣不續(xù),氣虛血滯,以致陰莖痿而不用。針對(duì)此病機(jī),可考慮將益氣活血法運(yùn)用于臨床治療RP術(shù)后ED。且中藥藥理學(xué)研究表明,益氣活血方劑具有改善微循環(huán)、血液流變學(xué)、抗氧化等藥理作用,可見,益氣活血法或可于多方面調(diào)節(jié)、糾正RP后ED。

    補(bǔ)陽還五湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)》,是經(jīng)典的益氣活血方,大量研究結(jié)果表明,補(bǔ)陽還五湯可通過SIRT1/VEGF通路、減少自然殺傷細(xì)胞浸潤(rùn)、改善微循環(huán)等多個(gè)方面修復(fù)大鼠神經(jīng)損傷[12-14];Pan等[15]通過手術(shù)造成大腦中動(dòng)脈閉塞性神經(jīng)損傷大鼠模型,隨后予以補(bǔ)陽還五湯灌胃干預(yù),灌胃后第7天與第14天大鼠神經(jīng)損傷明顯改善;劉青龍[16]以補(bǔ)陽還五湯口服加藥浴的方式干預(yù)坐骨神經(jīng)損傷大鼠模型,干預(yù)后第2、4、6周,模型組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度較對(duì)照組顯著增快;且臨床數(shù)據(jù)顯示,補(bǔ)陽還五湯能夠明顯改善缺血性卒中患者神經(jīng)功能,經(jīng)治療后NIHSS評(píng)分、ADL評(píng)分顯著提高[17]。也有學(xué)者通過研究證實(shí),補(bǔ)陽還五湯能夠改善博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化[18]。而臨床上使用補(bǔ)陽還五湯治療勃起功能障礙也有報(bào)道,胡衛(wèi)東等[8]運(yùn)用加味補(bǔ)陽還五湯治療糖尿病性ED,亦取得較好的療效,但細(xì)觀文獻(xiàn)中所用黃芪量?jī)H為30 g;且中華人民共和國(guó)藥典中生黃芪最大用量也僅為30 g[19],而原方中重用黃芪120 g;仝小林認(rèn)為“重劑起沉疴”,治療ED時(shí)一般重用生黃芪120 g[20]大補(bǔ)元?dú)?,令氣旺血行。那么黃芪用量是否與其神經(jīng)保護(hù)效果、改善勃起效果具有密切相關(guān)性,值得研究。

    本實(shí)驗(yàn)通過鉗夾SD大鼠海綿體神經(jīng)造成ED模型后予以不同黃芪劑量的補(bǔ)陽還五湯灌胃干預(yù),使用ICP測(cè)定評(píng)估大鼠勃起功能;實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:模型組大鼠ICP水平顯著降低,而相對(duì)于模型組而言,30 g組與120 g組大鼠ICP明顯升高,且120 g組高于30 g組,這表明了補(bǔ)陽還五湯確實(shí)能改善大鼠勃起功能障礙,且120 g組治療效果優(yōu)于30 g組。從分子水平來看,模型組大鼠陰莖海綿體組織NF-L、nNOS、GAP43表達(dá)量顯著降低,陰莖海綿體組織膠原纖維面積增大,補(bǔ)陽還五湯灌胃干預(yù)后,30 g組與120 g組大鼠nNOS、NF-L、GAP43表達(dá)量基于模型組有所提高,且120 g組與30 g組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。nNOS可以通過催化左旋精氨酸來產(chǎn)生NO,而NO則為體內(nèi)主要的舒張血管的物質(zhì),通過舒張神經(jīng)滋養(yǎng)血管進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)的作用[21-22],GAP43在神經(jīng)元支撐、營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)、軸突再生等方面起到重要的作用[23-24],在神經(jīng)修復(fù)過程中表達(dá)上調(diào),被認(rèn)為是神經(jīng)損傷后再生的重要指標(biāo)[25];NF-L作為細(xì)胞骨架組成主要組成成分,對(duì)于維持神經(jīng)形態(tài)具有十分重要的作用[26],神經(jīng)損傷后失去營(yíng)養(yǎng)作用,不能維持正常形態(tài)導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,最終導(dǎo)致NF-L表達(dá)量下降。本研究中各組大鼠nNOS、NF-L、GAP43表達(dá)量的變化為補(bǔ)陽還五湯在神經(jīng)保護(hù)再生方面作用提供了確切依據(jù),也說明了補(bǔ)陽還五湯可通過保護(hù)、修復(fù)海綿體神經(jīng)從而改善勃起功能障礙。然而從Masson染色中可看到,模型組大鼠海綿體平滑肌含量下降,膠原含量增加,而30 g組與120 g組大鼠陰莖海綿體膠平滑肌含量增加,原纖維含量降低,海綿體平滑肌在海綿體組織中占45%,其作為陰莖的重要組成部分,在陰莖勃起的啟動(dòng)和維持中發(fā)揮關(guān)鍵作用[27],Cho等[28]提出海綿體損傷是引起陰莖纖維化的重要因素,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符;同時(shí)也意味著補(bǔ)陽還五湯在保護(hù)修復(fù)神經(jīng)的同時(shí)還能在一定程度上改善陰莖組織纖維化從而改善勃起功能,但其確切機(jī)制有待深入研究。

    綜上所述,補(bǔ)陽還五湯可以通過神經(jīng)修復(fù)有效改善大鼠勃起功能障礙并能在一定程度上改善陰莖海綿體組織纖維化,且《醫(yī)林改錯(cuò)》原方所用高劑量黃芪用量的補(bǔ)陽還五湯治療效果更為顯著。

    猜你喜歡
    海綿體補(bǔ)陽陰莖
    Study on differential gene expression profile of serum exosomes in patients with acute cerebral infarction
    陰莖海綿體靜脈漏的造影表現(xiàn)分析
    尿道海綿體非離斷尿道吻合術(shù)在骨盆骨折引起后尿道狹窄中的初步應(yīng)用
    高壓電致胸壁洞穿性損傷伴陰莖傷救治1例
    陰莖根部完全離斷再植成功1例報(bào)告
    陰莖不全離斷再植1例
    補(bǔ)陽還五湯的臨床研究進(jìn)展
    閉合性陰莖海綿體損傷的診治
    補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合康復(fù)治療腦卒中35例
    補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合康復(fù)治療腦梗塞25例
    精品一品国产午夜福利视频| 亚洲情色 制服丝袜| 国产国语露脸激情在线看| 桃花免费在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品久久蜜臀av无| 久久精品久久精品一区二区三区| netflix在线观看网站| av国产久精品久网站免费入址| 水蜜桃什么品种好| 美女视频免费永久观看网站| 婷婷成人精品国产| 国产免费又黄又爽又色| av网站免费在线观看视频| 中国美女看黄片| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久精品国产欧美久久久 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品国产三级专区第一集| 人人妻人人澡人人看| 婷婷丁香在线五月| 两个人看的免费小视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产亚洲一区二区精品| 91精品三级在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 中国美女看黄片| 日韩制服骚丝袜av| 男女边吃奶边做爰视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品久久久久久电影网| 免费观看a级毛片全部| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 满18在线观看网站| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲伊人色综图| 高清不卡的av网站| av网站免费在线观看视频| 国产xxxxx性猛交| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品第一国产精品| 超色免费av| 成人手机av| 亚洲成人国产一区在线观看 | 岛国毛片在线播放| 精品免费久久久久久久清纯 | 手机成人av网站| 免费av中文字幕在线| 久久久精品94久久精品| 亚洲免费av在线视频| 又大又爽又粗| 久热这里只有精品99| 国产成人系列免费观看| 成人国语在线视频| 亚洲成色77777| 老熟女久久久| 午夜视频精品福利| 久久青草综合色| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲av片天天在线观看| 色网站视频免费| 99热全是精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩制服丝袜自拍偷拍| www.熟女人妻精品国产| 69精品国产乱码久久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黄片小视频在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产黄色视频一区二区在线观看| 一级毛片女人18水好多 | 两个人看的免费小视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品在线美女| av欧美777| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 啦啦啦在线免费观看视频4| 在现免费观看毛片| 一个人免费看片子| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日韩视频精品一区| 一级片'在线观看视频| 色播在线永久视频| 超碰97精品在线观看| 免费少妇av软件| 男女免费视频国产| 亚洲国产av影院在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 午夜福利一区二区在线看| 国产91精品成人一区二区三区 | av视频免费观看在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本午夜av视频| 夫妻午夜视频| 欧美性长视频在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲av电影在线进入| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品欧美亚洲77777| 日本av手机在线免费观看| 性色av一级| 国产伦理片在线播放av一区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美精品av麻豆av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成年av动漫网址| 国产成人精品在线电影| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久久久久久久免费视频了| 一边摸一边做爽爽视频免费| 尾随美女入室| 亚洲天堂av无毛| 人人妻人人澡人人看| 无遮挡黄片免费观看| av天堂久久9| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产成人精品在线电影| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久精品免费免费高清| 韩国精品一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲五月婷婷丁香| 国产欧美日韩一区二区三 | 久热爱精品视频在线9| 新久久久久国产一级毛片| 高清视频免费观看一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲国产中文字幕在线视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 男女午夜视频在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 日韩大片免费观看网站| 高清欧美精品videossex| 国产又爽黄色视频| 久久精品成人免费网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 免费看av在线观看网站| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲伊人久久精品综合| 丝袜美足系列| 乱人伦中国视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品日本国产第一区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产一区二区激情短视频 | 狂野欧美激情性xxxx| 中文字幕高清在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 成在线人永久免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| 国产老妇伦熟女老妇高清| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 97人妻天天添夜夜摸| 无遮挡黄片免费观看| avwww免费| 国产精品 国内视频| 极品人妻少妇av视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久毛片免费看一区二区三区| 咕卡用的链子| 亚洲av男天堂| 国产一区二区在线观看av| 成年人黄色毛片网站| 亚洲国产av影院在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 欧美激情高清一区二区三区| 国产av精品麻豆| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久热这里只有精品99| 日韩视频在线欧美| 日本黄色日本黄色录像| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产在线免费精品| 久久性视频一级片| 七月丁香在线播放| 亚洲精品自拍成人| 成人国语在线视频| 激情五月婷婷亚洲| 国产99久久九九免费精品| 咕卡用的链子| 久久人人爽人人片av| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 下体分泌物呈黄色| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产成人a∨麻豆精品| 黄色怎么调成土黄色| 欧美日韩视频精品一区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产熟女欧美一区二区| 黄色一级大片看看| 一二三四社区在线视频社区8| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产日韩欧美视频二区| 婷婷成人精品国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 中文字幕制服av| 两性夫妻黄色片| 国产精品一区二区在线观看99| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 色视频在线一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 十八禁网站网址无遮挡| 97在线人人人人妻| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲中文日韩欧美视频| 视频区图区小说| 99热国产这里只有精品6| 电影成人av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲精品国产av成人精品| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美97在线视频| 国产又爽黄色视频| 国产在线视频一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美日韩视频精品一区| 十八禁人妻一区二区| 一区二区av电影网| 精品久久蜜臀av无| 伦理电影免费视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 制服人妻中文乱码| 又黄又粗又硬又大视频| 99国产精品一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 视频在线观看一区二区三区| 桃花免费在线播放| 一级毛片女人18水好多 | 中国国产av一级| 欧美国产精品一级二级三级| 大片电影免费在线观看免费| 夫妻午夜视频| 搡老乐熟女国产| 久久综合国产亚洲精品| 精品少妇久久久久久888优播| 一本综合久久免费| 九色亚洲精品在线播放| 一区二区三区激情视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产真人三级小视频在线观看| 精品视频人人做人人爽| 亚洲第一av免费看| 飞空精品影院首页| 妹子高潮喷水视频| 中文字幕av电影在线播放| 一级黄片播放器| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久免费观看电影| 视频区欧美日本亚洲| 波野结衣二区三区在线| 18在线观看网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久国产精品影院| 国产日韩欧美在线精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99热国产这里只有精品6| 9色porny在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 美女视频免费永久观看网站| 黑丝袜美女国产一区| 精品久久久久久电影网| 九色亚洲精品在线播放| 新久久久久国产一级毛片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲三区欧美一区| 欧美日韩综合久久久久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产深夜福利视频在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜老司机福利片| 热99国产精品久久久久久7| 欧美黑人精品巨大| 青草久久国产| 国产免费视频播放在线视频| 午夜两性在线视频| 老司机靠b影院| 一区福利在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 美女午夜性视频免费| 亚洲久久久国产精品| 国产欧美亚洲国产| 日本色播在线视频| www.精华液| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 波野结衣二区三区在线| 在线观看人妻少妇| 国精品久久久久久国模美| 免费观看a级毛片全部| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产高清videossex| 国产麻豆69| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 人妻 亚洲 视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久久久久国产电影| 日本av手机在线免费观看| 久久人人爽人人片av| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久精品人妻al黑| 免费观看av网站的网址| 国产视频首页在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| www.熟女人妻精品国产| 国产精品久久久久成人av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲成人国产一区在线观看 | 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产免费又黄又爽又色| 国产黄频视频在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产不卡av网站在线观看| 国产一区二区在线观看av| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲 欧美一区二区三区| 一个人免费看片子| 成年人黄色毛片网站| 在现免费观看毛片| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲五月色婷婷综合| 大香蕉久久网| 男女边吃奶边做爰视频| 精品亚洲成国产av| 国产成人影院久久av| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲av美国av| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 国产有黄有色有爽视频| 国产成人av激情在线播放| 另类亚洲欧美激情| 中文字幕色久视频| 黄色 视频免费看| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产99久久九九免费精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 一级毛片我不卡| 国产精品国产av在线观看| 午夜老司机福利片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 免费观看av网站的网址| 一级毛片 在线播放| 亚洲精品日本国产第一区| 热99久久久久精品小说推荐| 大香蕉久久成人网| 欧美另类一区| 999精品在线视频| 欧美在线黄色| 亚洲欧洲国产日韩| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 蜜桃国产av成人99| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 丝袜在线中文字幕| 90打野战视频偷拍视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 一级黄色大片毛片| 亚洲国产精品国产精品| 丝袜美腿诱惑在线| 国产亚洲欧美精品永久| 热99国产精品久久久久久7| 日韩精品免费视频一区二区三区| 只有这里有精品99| 久久影院123| 999精品在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 中文字幕av电影在线播放| 久久人人爽人人片av| av欧美777| 黄色视频不卡| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品一二三区在线看| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产在线视频一区二区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| xxxhd国产人妻xxx| 欧美变态另类bdsm刘玥| 天堂8中文在线网| 久久国产精品影院| 精品一品国产午夜福利视频| 国产黄色免费在线视频| 无限看片的www在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕色久视频| 中文字幕制服av| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品一区蜜桃| 久久精品成人免费网站| 手机成人av网站| 中文字幕人妻丝袜制服| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久天堂一区二区三区四区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 麻豆乱淫一区二区| 国产av精品麻豆| 精品高清国产在线一区| 久久鲁丝午夜福利片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| www.自偷自拍.com| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| 国产成人精品久久久久久| 真人做人爱边吃奶动态| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产男女内射视频| 精品人妻在线不人妻| svipshipincom国产片| 国产一级毛片在线| 最新的欧美精品一区二区| 午夜激情av网站| 国产精品成人在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 中文字幕亚洲精品专区| 一区在线观看完整版| 老司机靠b影院| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产日韩欧美在线精品| 制服人妻中文乱码| www.av在线官网国产| 人妻人人澡人人爽人人| 男女边摸边吃奶| 一级黄片播放器| 中文字幕人妻熟女乱码| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲国产欧美在线一区| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲色图综合在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久久久久久久久久久大奶| 国产一级毛片在线| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产av国产精品国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 各种免费的搞黄视频| av视频免费观看在线观看| 久久青草综合色| 国产精品av久久久久免费| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久9热在线精品视频| 在线观看人妻少妇| av天堂久久9| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 老熟女久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产欧美亚洲国产| 五月天丁香电影| 国产色视频综合| 国产日韩欧美亚洲二区| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品二区激情视频| 午夜91福利影院| 国产精品 国内视频| 悠悠久久av| 七月丁香在线播放| 宅男免费午夜| 9191精品国产免费久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 18禁观看日本| 欧美中文综合在线视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美性长视频在线观看| 两性夫妻黄色片| 涩涩av久久男人的天堂| 国产人伦9x9x在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 成年人午夜在线观看视频| 大香蕉久久成人网| 在线观看人妻少妇| 欧美久久黑人一区二区| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久国产精品影院| 极品人妻少妇av视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产在线一区二区三区精| svipshipincom国产片| 国产欧美日韩精品亚洲av| 超碰成人久久| 波多野结衣一区麻豆| tube8黄色片| 9色porny在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | a级毛片黄视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 一个人免费看片子| 国产成人av激情在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 首页视频小说图片口味搜索 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产免费福利视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久久精品免费免费高清| 午夜福利视频精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 自线自在国产av| 免费av中文字幕在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一级a爱视频在线免费观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品欧美一区二区三区在线| 欧美日本中文国产一区发布| 手机成人av网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产av一区二区精品久久| 99久久综合免费| 中国美女看黄片| 极品少妇高潮喷水抽搐| 人人澡人人妻人| 性色av乱码一区二区三区2| 丝袜在线中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 五月开心婷婷网| 亚洲专区国产一区二区| 99热网站在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 成人黄色视频免费在线看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产av国产精品国产| 久久中文字幕一级| 丝袜脚勾引网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 18在线观看网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 大型av网站在线播放| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品亚洲成国产av| 日韩大片免费观看网站| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产欧美在线一区| h视频一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 丁香六月欧美| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 欧美人与性动交α欧美软件| 日韩人妻精品一区2区三区| av天堂在线播放| 天堂8中文在线网| 天天操日日干夜夜撸| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产精品一区二区在线不卡| 成年美女黄网站色视频大全免费| 三上悠亚av全集在线观看| 国产高清videossex| 中文字幕人妻丝袜制服| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 香蕉丝袜av| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美精品av麻豆av| 国产免费福利视频在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 中文字幕制服av| 制服人妻中文乱码| 亚洲一码二码三码区别大吗| 老熟女久久久| 久久久久久久久免费视频了| 男的添女的下面高潮视频| 新久久久久国产一级毛片| 免费在线观看日本一区| 久久精品成人免费网站| 日本欧美视频一区|