PIK3CA基因沉默對宮頸癌生物學(xué)特性影響及機制

游興文 王秀琴 王艷虹 楊敏 李鴻超 楊林青

[摘要] 目的 探討磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸肌醇-3-激酶（PIK3CA）基因沉默對宮頸癌生物學(xué)特性的影響及其機制。

方法 選取188例宮頸癌病人癌組織及癌旁組織標(biāo)本，采用SP免疫組化法檢測PIK3CA蛋白表達陽性率。取宮頸癌細胞株并細胞轉(zhuǎn)染分為6組：空白（Blank）組、陰性對照（NC）組、上調(diào)PIK3CA表達（HA-PIK3CA）組、沉默PIK3CA表達（PIK3CA-siRNA）組、信號通路拮抗劑（LY294002）組、信號通路拮抗劑+沉默PIK3CA表達（LY294002+PIK3CA-siRNA）組。采用實時定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡（Western blot）法分別檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞中PIK3CA、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、PKB蛋白激酶（又稱AKT）、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的mRNA和蛋白表達水平。應(yīng)用噻唑藍（MTT）法、流式細胞術(shù)分別檢測各組細胞增殖及凋亡。

結(jié)果 與癌旁組織相比，癌組織PIK3CA蛋白陽性表達率顯著升高，且與宮頸癌病人TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級均有關(guān)（χ2=6.766～31.171，P均<0.05）。與Blank組和NC組相比，PIK3CA-siRNA組、LY294002組和LY294002+PIK3CA-siRNA組的PIK3CA、PI3K、AKT、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表達量均明顯降低，E-cadherin表達明顯增加，細胞增殖活性降低，細胞凋亡增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F mRNA=58.5～185.1，F(xiàn) 蛋白=48.1～130.5，F(xiàn) 增殖=28.0～98.8，F(xiàn) 凋亡=213.9，P均<0.05）;且LY294002+PIK3CA-siRNA組趨勢更為顯著（P均<0.05）;而上述指標(biāo)趨勢在HA-PIK3CA組被逆轉(zhuǎn)（P均<0.05）。

結(jié)論 沉默PIK3CA基因可能通過抑制PI3K/AKT信號通路的激活，進而抑制宮頸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，抑制細胞增殖并促進細胞凋亡。

[關(guān)鍵詞] 宮頸腫瘤;基因，PIK3CA;3-磷酸肌醇-依賴性蛋白激酶;原癌基因蛋白質(zhì)c-akt;上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化;細胞增殖;細胞凋亡

[中圖分類號] R737.33;R345.57

[文獻標(biāo)志碼] A

[文章編號] 2096-5532（2021）06-0879-07

doi：10.11712/jms.2096-5532.2021.57.190

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20211229.1629.005.html;2021-12-30 15：55：58

EFFECT OF PIK3CA GENE SILENCING ON BIOLOGICAL CHARACTERISTICS OF CERVICAL CANCER AND ITS MECHANISM

YOU Xingwen，WANG Xiuqin，WANG Yanhong， YANG Min， LI Hongchao， YANG Linqing

（Department of Obstetrics and Gynecology，Puyang Oilfield General Hospital， Puyang457001， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the effect of PIK3CA gene silencing on the biological characteristics of cervical cancer and its mechanism.

Methods Cancer tissue specimens and adjacent tissue specimens were collected from 188 patients with cervical cancer， and SP immunohistochemistry was used to measure the positive rate of PIK3CA protein expression. Cervical cancer cell lines were collected， and the cells were transfected and divided into Blank group， negative control group （NC group）， PIK3CA upregulation group （HA-PIK3CA group）， PIK3CA silencing group （PIK3CA-siRNA group）， signaling pathway antagonist （LY294002） group， and signaling pathway antagonist+PIK3CA silencing group （LY294002+PIK3CA-siRNA group）. Quantitative real-time PCR and Western blot were used to measure the mRNA and protein expression levels of PIK3CA， phosphoinositide 3-kinase （PI3K）， protein kinase B （AKT）， E-cadherin， N-cadherin， and Vimentin in each group of cells. MTT assay was used to measure cell proliferation， and flow cytometry was used to measure cell apoptosis.

Results Compared with adjacent tissue， cancer tissue had a significant increase in the positive rate of PIK3CA， which was associated with TNM stage， lymph node metastasis， and histological grade of cervical cancer patients （χ2=6.766-31.171， all P<0.05）. Compared with the Blank group and the NC group， the PIK3CA-siRNA group， the LY294002 group， and the LY294002+PIK3CA-siRNA group had significant reductions in the mRNA and protein expression levels of PIK3CA， PI3K， AKT， N-cadherin， and Vimentin， a significant increase in the expression of E-cadherin， a significant reduction in cell proliferation activity， and a significant increase in cell apoptosis （F mRNA=58.5-185.1，F(xiàn) protein=48.1-130.5，F(xiàn) proliferation=28.0-98.8，F(xiàn) apoptosis=213.9， all P<0.05）， and the LY294002+PIK3CA-siRNA group tended to have the most significant changes （all P<0.05）. Changes in the above indices were reversed in the HA-PIK3CA group （all P<0.05）.

Conclusion PIK3CA gene silencing may inhibit cell proliferation and promote cell apoptosis by inhibiting activation of the PI3K/AKT signaling pathway and epithelial-mesenchymal transition in cervical cancer.

[KEY WORDS]uterine cervical neoplasms; genes， PIK3CA; 3-phosphoinositide-dependent protein kinases; proto-oncogene proteins c-akt; epithelial-mesenchymal transition; cell proliferation; apoptosis

宮頸癌是發(fā)病率位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位的一類婦科腫瘤，其病死率逐年升高且呈年輕化趨勢[1]。我國也是宮頸癌的高發(fā)國家[2]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是指上皮細胞獲得具備侵襲鄰近組織的生物學(xué)特性，從而在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[3]。E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等是EMT的重要標(biāo)志性因子，在多種腫瘤中異常表達[4-6]?；虺聊夹g(shù)通過調(diào)控基因表達，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平上阻斷特定基因的異常表達，可達到對特定基因的外源性表達調(diào)控，進而發(fā)揮治療疾病的作用[7]。磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/PKB蛋白激酶（又稱AKT）信號通路是一類在細胞內(nèi)發(fā)揮促進細胞增殖、抑制細胞凋亡作用的細胞存活相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[8]。臨床對于通過基因沉默干預(yù)相關(guān)基因表達和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在宮頸癌EMT的研究已有部分報道[9-11]，但對于磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸肌醇-3-激酶（PIK3CA）基因沉默介導(dǎo)PI3K/AKT信號通路對宮頸癌EMT的影響卻鮮有報道。本研究通過探究人宮頸癌組織和細胞中PIK3CA的表達，并通過細胞轉(zhuǎn)染和基因沉默，確認PIK3CA基因沉默介導(dǎo)PI3K/AKT信號通路對宮頸癌EMT的影響，以期為宮頸癌病人的分子治療方案提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 主要試劑與儀器 人宮頸癌細胞系HeLa（中國科學(xué)院上海生物研究所），正常人宮頸鱗狀上皮細胞CRL-2614（美國典型菌種保藏中心，ATCC）;DMEM培養(yǎng)基（Gibco公司，美國）;Lipofectamine 2000（Invitrogen公司，美國）;免疫組化抗體（Abcam，劍橋，英國）;Trizol和反轉(zhuǎn)錄試劑盒（寶生物工程有限公司，大連）;PCR引物（深圳華大基因有限公司合成）;蛋白質(zhì)印跡（Western blot）抗體（abcam公司，英國）;化學(xué)發(fā)光后凝膠成像系統(tǒng)（北京六一凝膠成像儀）;Quantity One軟件（BIO-RAD公司，美國）;噻唑藍（MTT）和二甲基亞砜（DMSO）溶液（Sigma公司，美國）;酶標(biāo)儀（BioTek公司，美國）;Annexin-V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒和碘化丙啶（PI）染料（Sigma公司，美國）;流式細胞儀（Coulter Corporation公司，美國）。

1.1.2 臨床標(biāo)本 收集我院2016年1月—2019年1月經(jīng)病理檢查證實的188例宮頸癌病人（年齡27～69歲，平均（52.32±6.50）歲）癌組織及癌旁組織標(biāo)本。所有病人臨床資料完整，均排除其他系統(tǒng)腫瘤，術(shù)前均未接受抗腫瘤治療。本研究已通過本院倫理委員會批準(zhǔn)，均取得病人及其家屬同意，采取自愿原則并簽署知情同意書。

1.2 實驗方法

1.2.1 免疫組化檢測 將宮頸癌及癌旁組織經(jīng)甲醛固定，進行石蠟包埋，厚度3 μm連續(xù)切片，70 ℃烤片15 min，梯度乙醇脫水，PBS漂洗3次。用正常山羊血清室溫孵育15 min。滴加20～30 μL以PBS稀釋的PIK3CA一抗，4 ℃孵育過夜，用PBS替代第一抗體作陰性對照。加入二抗，于37 ℃下孵育45 min，DAB顯色5～10 min。蘇木精復(fù)染后，進行脫水、透明、封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。免疫組化檢查結(jié)果判定：由高年資病理醫(yī)師閱片，采用雙盲法分別判斷。按癌細胞免疫組織化學(xué)染色強弱計分：陰性為0分;淡黃色染色為1分;中度黃色染色為2分;棕黃色染色為3分。按照陽性細胞率計分：陽性細胞≤5%為0分;6%～25%為1分;26%～50%為2分;>50%為3分。各基因蛋白表達強度基于染色深淺和陽性細胞率綜合判定，以兩者的乘積≥3分為陽性表達，<3分為陰性表達。

1.2.2 細胞培養(yǎng)與篩選 人宮頸癌細胞系HeLa培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基，進行傳代培養(yǎng)，置含體積分?jǐn)?shù)0.05 CO 2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，2～3 d傳代1次。

取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。采用實時定量PCR（qRT-PCR）檢測PIK3CA相對表達量。

1.2.3 細胞轉(zhuǎn)染與分組 選擇培養(yǎng)生長至對數(shù)生長期的細胞，收集細胞懸液接種于6孔板，給予新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞融合度為50%～80%時進行轉(zhuǎn)染。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染依據(jù)Lipofectamine 2000使用說明進行，配制轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)?；蜉d體的復(fù)合物（200 μL），混勻后轉(zhuǎn)染，置含體積分?jǐn)?shù)0.05 CO 2、37 ℃恒溫培養(yǎng)6 h，換含有血清的正常培養(yǎng)基。將細胞分為如下6組：Blank組（a組：人宮頸癌細胞）、NC組（b組：人宮頸癌細胞+轉(zhuǎn)染空白載體質(zhì)粒）、HA-PIK3CA組（c組：人宮頸癌細胞+PIK3CA過表達載體）、PIK3CA-siRNA組（d組：人宮頸癌細胞+轉(zhuǎn)染PIK3CA抑制表達質(zhì)粒）、LY294002組（e組：人宮頸癌細胞+PI3K/AKT信號通路拮抗劑）以及LY294002+PIK3CA-siRNA組（f組：人宮頸癌細胞+PI3K/AKT信號通路拮抗劑+轉(zhuǎn)染PIK3CA-siRNA質(zhì)粒），進行后續(xù)實驗。

1.2.4 qRT-PCR檢測 取臨床標(biāo)本并收集轉(zhuǎn)染后各組細胞，Trizol法提取細胞、組織中總RNA，測定RNA的濃度和純度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將樣品RNA反轉(zhuǎn)為cDNA。在cDNA中加入65 μL的DEPC水稀釋，并充分混勻，配制Real-time PCR反應(yīng)體系。PCR擴增條件：95 ℃預(yù)變性1 min;95 ℃變性30 s，58 ℃退火5 s，共循環(huán)30次;72 ℃延伸5 s。以GAPDH為內(nèi)參照，每個樣品的每個基因設(shè)3個復(fù)孔。按 2-△△Ct方法計算目的基因相對表達量。

1.2.5 Western blot檢測 收集轉(zhuǎn)染后各組細胞，加入裂解液。冰浴中勻漿粉碎，離心提取上清，為總蛋白提取液。取細胞總蛋白進行 SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)至 PVDF膜，TBST 洗膜 1 次。采用50 g/L脫脂奶粉封閉，搖床孵育2 h后，TBST洗膜，加入以封閉液稀釋的一抗（PIK3CA、PI3K、AKT、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和GAPDH），4 ℃搖床孵育過夜。室溫下TBST洗膜后，加入稀釋的經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫孵育?；瘜W(xué)發(fā)光后凝膠成像系統(tǒng)成像，保存圖片。采用Quantity One軟件測定灰度值。

1.2.6 MTT檢測 收集轉(zhuǎn)染后各組細胞，按一定密度稀釋細胞并制成單細胞懸液，調(diào)整細胞密度后接種于96孔板中，置于CO 2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)24、48、72 h。隨后每孔避光加入10 μL的 MTT溶液孵育4 h。

小心吸出培養(yǎng)液，每孔避光加入100 μL的DMSO溶液。振蕩避光溶解后，用酶標(biāo)儀檢測490 nm波長處各孔吸光度（A）值，并繪制細胞活力曲線圖。

1.2.7 流式細胞術(shù)檢測 各組細胞轉(zhuǎn)染48 h后，收集細胞于流式管后離心，棄上清。用預(yù)冷PBS洗滌細胞3次，離心棄上清。按照Annexin-V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒的說明，向每管細胞中加入5 μL的 Annexin-V-FITC，振蕩混勻;避光，室溫孵育后再加入5 μL的PI染料，振蕩混勻。1 h內(nèi)用流式細胞儀檢測細胞凋亡變化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0（IBM公司，美國）統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量數(shù)據(jù)以±s表示，多組間均數(shù)比較采用One-way ANOVA方差分析。計數(shù)資料采用百分比表示，組間比較采用卡方檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人宮頸癌組織PIK3CA蛋白表達及其與臨床病理特征關(guān)系

PIK3CA蛋白表達陽性細胞為淺黃色至棕黃色樣顆粒物質(zhì)，見圖1。PIK3CA蛋白在188例人宮頸癌組織陽性表達119例（63.30%），癌旁組織為41例（21.80%），癌組織的陽性表達率明顯高于癌旁組織（χ2=23.581，P<0.05）。此外，PIK3CA蛋白表達與宮頸癌病人TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級均有關(guān)（χ2=6.766～31.171，P均<0.05），而與年齡、原發(fā)灶大小及病理組織類型無關(guān)（P>0.05）。見表1。

2.2 宮頸癌細胞株中PIK3CA基因的表達水平

qRT-PCR法檢測HeLa細胞株中的PIK3CAmRNA表達的結(jié)果顯示，HeLa細胞株P(guān)IK3CA mRNA表達量明顯高于正常人宮頸鱗狀上皮細胞（t=14.59，P<0.05）。見圖2。

2.3 沉默PIK3CA對宮頸癌細胞PI3K/AKT通路激活的影響

實驗結(jié)果表明，在HeLa細胞系中，與NC組和Blank組相比，PIK3CA-siRNA組、LY294002組和LY294002+PIK3CA-siRNA組PIK3CA、PI3K、AKT的mRNA和蛋白相對表達量均明顯降低（F mRNA =105.7～176.1，F(xiàn) 蛋白=125.8～130.5，P均<0.05），HA-PIK3CA組mRNA和蛋白相對表達量均呈升高趨勢（F mRNA =43.7～347.2，F(xiàn) 蛋白=87.2～302.6，P<0.05）;與PIK3CA-siRNA組和LY294002組相比，LY294002+PIK3CA-siRNA組中各基因的mRNA和蛋白相對表達量均顯著降低（F mRNA =64.8～206.3，F(xiàn) 蛋白=50.9～96.5，P<0.05）。而NC組和Blank組、PIK3CA-siRNA組和LY294002組比較，差異均無顯著意義（P均>0.05）。見圖3。

2.4 沉默PIK3CA對宮頸癌細胞EMT相關(guān)因子的影響

實驗結(jié)果顯示，與Blank組和NC組相比，HA-PIK3CA組的E-cadherin mRNA和蛋白表達均明顯降低，N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表達量均明顯增加（F mRNA =131.7～209.3，F(xiàn) 蛋白=69.7～286.3，P均<0.05）;而PIK3CA-siRNA組、LY294002組和LY294002+PIK3CA-siRNA組E-cadherin的mRNA和蛋白表達明顯增加，N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表達明顯降低（F mRNA =158.5～185.1，F(xiàn) 蛋白=107.7～148.1，P均<0.05）。與PIK3CA-siRNA組和LY294002組相比，LY294002+PIK3CA-siRNA組的E-cadherin的mRNA和蛋白表達顯著增加，N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表達量均顯著降低（F mRNA =32.9～83.5， F 蛋白=47.6～66.3，P均<0.05）。

而NC組和Blank組比較、PIK3CA-siRNA組和LY294002組比較，差異均無顯著性（P均>0.05）。見表2和圖4。

2.5 沉默PIK3CA對宮頸癌細胞增殖的影響

檢測結(jié)果顯示，與NC組和Blank組相比，HA-PIK3CA組過表達PIK3CA可明顯促進細胞增殖（F=24.6～32.1，P均<0.05）;PIK3CA-siRNA組、LY294002組和LY294002+PIK3CA-siRNA組細胞增殖均受到明顯地抑制（F=28.0～98.8;P均<0.05）。與PIK3CA-siRNA組和LY294002組相比較，LY294002+PIK3CA-siRNA組細胞增殖均受到顯著抑制（F=28.5～104.6，P均<0.05）。而NC組和Blank組相比較、PIK3CA-siRNA組和LY294002組比較，差異均無顯著性（P均>0.05）。見圖5。

2.6 沉默PIK3CA對宮頸癌細胞凋亡的影響

流式細胞學(xué)檢測結(jié)果顯示，與NC組和Blank組比較，HA-PIK3CA組細胞凋亡率明顯下降（F=45.1，P<0.05），PIK3CA-siRNA組、LY294002組和LY294002+PIK3CA-siRNA組凋亡率均明顯上升（F=213.9，P<0.05）。與PIK3CA-siRNA組和LY294002組細胞相比，LY294002+PIK3CA-siRNA組的上升趨勢更明顯（F=54.9，P<0.05）。

NC組和Blank組、PIK3CA-siRNA組和LY294002組的細胞凋亡率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>均0.05）。見圖6。

3 討論

宮頸癌發(fā)病率位居婦科腫瘤首位，其轉(zhuǎn)移成為影響病人預(yù)后的重要因素[12]。宮頸癌來源于上皮組織，EMT在其轉(zhuǎn)移過程中扮演重要角色[13]。多數(shù)上皮性腫瘤周圍細胞多呈間質(zhì)細胞表型[14]，表現(xiàn)出較強的增殖、侵襲能力[15]，可侵襲腫瘤組織周圍正常組織，刺激腫瘤遠處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致病人病情惡化、預(yù)后不良[16-17]。抑制腫瘤EMT對于改善病人治療效果和提升預(yù)后尤為重要[18]。近期研究顯示，靶向PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的分子拮抗劑可結(jié)合順鉑聯(lián)合化療改善PIK3CA突變的宮頸癌的治療效果[19]，為基于該病精準(zhǔn)藥物的新型治療策略提供重要參考和啟示。PI3K是重要的胞內(nèi)激酶[20]，Akt又稱蛋白激酶B，是PI3K的下游關(guān)鍵因子[21]，二者構(gòu)成的信號通路在腫瘤細胞生長、侵襲、凋亡等過程中作用顯著。既往研究結(jié)果表明，PI3K/AKT信號通路在腫瘤細胞中被激活，可通過多重機制參與腫瘤發(fā)生發(fā)展[22-23]。作為PI3K催化亞基的編碼基因，PIK3CA基因已被證實是上消化道癌、膠質(zhì)細胞瘤、卵巢癌、乳癌等多種腫瘤的癌基因[24-27]。同時，PIK3CA基因在宮頸癌中的表達日益?zhèn)涫荜P(guān)注[28]。目前已有報道PI3K/AKT信號通路可誘導(dǎo)多類上皮細胞惡性腫瘤發(fā)生EMT，如胃癌、肺癌、宮頸癌等，而阻斷該通路可抑制上述現(xiàn)象[29]。然而，目前有關(guān)PIK3CA基因介導(dǎo)PI3K/AKT信號通路對宮頸癌EMT影響的研究較少。

本實驗基于前期研究結(jié)果和基因沉默技術(shù)，選取與宮頸癌相關(guān)PIK3CA基因，假設(shè)沉默該基因可抑制PI3K/AKT信號通路激活，進而抑制EMT，從而抑制宮頸癌進展。本研究首先通過組織檢測顯示，與癌旁組織相比，癌組織中PIK3CA表達顯著升高，且PIK3CA蛋白表達與宮頸癌病人TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級均有關(guān)，提示PIK3CA陽性表達與宮頸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)。同時，宮頸癌細胞檢測結(jié)果亦表明PIK3CA高表達，證實宮頸癌中PIK3CA發(fā)揮癌基因作用，其高表達可誘導(dǎo)宮頸癌發(fā)生。本研究推測PIK3CA基因沉默和PI3K/AKT信號通路拮抗劑可逆轉(zhuǎn)這一不良結(jié)局，而細胞實驗結(jié)果則進一步驗證了這一假設(shè)。

本文細胞實驗結(jié)果表明，沉默PIK3CA表達、PI3K/AKT信號通路拮抗劑LY294002以及二者聯(lián)合處理可抑制PIK3CA、PI3K和AKT表達;且與沉默PIK3CA基因表達或者通路拮抗劑結(jié)果相比，二者聯(lián)合處理各指標(biāo)變化趨勢更為顯著;而上調(diào)PIK3CA表達可逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)表達趨勢。提示可通過特異性siRNA干擾序列處理，實現(xiàn)對宮頸癌生長轉(zhuǎn)移的抑制，且其作用機制可能與抑制PI3K/AKT信號通路激活相關(guān)。為進一步證實PIK3CA基因沉默對宮頸癌細胞生物學(xué)特性的影響，本文觀察了不同處理后宮頸癌細胞EMT、細胞增殖和細胞凋亡的變化。研究結(jié)果顯示，沉默IK3CA表達、PI3K/AKT信號通路拮抗劑LY294002以及二者聯(lián)合處理可下調(diào)N-cadherin和Vimentin表達，上調(diào)E-cadherin表達，降低細胞增殖活性，增加細胞凋亡;而且二者聯(lián)合處理的趨勢更為顯著;而上調(diào)PIK3CA表達后各指標(biāo)變化趨勢逆轉(zhuǎn)。提示在mRNA和蛋白水平上，沉默PIK3CA基因表達能夠抑制宮頸癌細胞EMT，抑制宮頸癌細胞增殖，并促進細胞凋亡。上述結(jié)果最終佐證，PIK3CA基因沉默對宮頸癌細胞上述生物學(xué)特性的作用可能與抑制PI3K/AKT信號通路的激活相關(guān)。我們推測PIK3CA基因沉默后，抑制PI3K/AKT信號通路激活，通過上調(diào)E-cadherin表達，抑制腫瘤細胞產(chǎn)生金屬蛋白酶，抑制蛋白降解，從而阻止腫瘤細胞穿透基質(zhì)、基底膜[30];通過下調(diào)N-cadherin和Vimentin表達，從而抑制細胞分化[31];進而逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞生物學(xué)行為的轉(zhuǎn)變，最終抑制腫瘤生長。本研究與秦海霞等[32]報道PIK3CA抑制宮頸癌細胞增殖及遷移的機制，可能與miRNA-375靶向調(diào)控其表達有關(guān)類似，提示PIK3CA在宮頸癌發(fā)病中的作用。

總之，本研究顯示沉默PIK3CA基因表達可能通過抑制PI3K/AKT信號通路的激活，抑制宮頸癌EMT和細胞增殖，并促進細胞凋亡。本研究從分子生物學(xué)角度為尋求改良宮頸癌病人預(yù)后和治療新思路提供了新的實驗證據(jù)。然而，本研究有關(guān)沉默PIK3CA基因表達抑制PI3K/AKT信號通路的分子機制探究僅在細胞實驗中證實，有待未來動物實驗的驗證并可建立與當(dāng)前研究熱點microRNA的聯(lián)系，以期為宮頸癌分子靶向治療提供潛在參考。

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（本文編輯 于國藝）