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    肉雞馬立克氏病熒光PCR診斷

    2021-01-11 02:32:02陳忠瓊駱璐凌洪權(quán)董春霞姚璐蔣佳利歐陽(yáng)吳莉李泰曾政
    四川畜牧獸醫(yī) 2021年5期
    關(guān)鍵詞:患雞馬立克氏病

    陳忠瓊,駱璐,凌洪權(quán),董春霞,姚璐,蔣佳利,歐陽(yáng)吳莉,李泰,曾政

    (重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,重慶渝北 401120)

    馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病病毒(MDV)引起的一種常見的禽類淋巴組織增生性傳染病,病禽以外周神經(jīng)、虹膜、臟器及皮膚等組織器官發(fā)生單核細(xì)胞浸潤(rùn)并形成腫瘤為特征。依據(jù)生物學(xué)特性將MDV分成3個(gè)血清型,MDV-1型為致瘤MDV,MDV-2 型為不致瘤MDV,MDV-3 型為HVT,其中只有MDV-1 型才具有致病性。不同品種或品系的雞均可感染該病,母雞比公雞更易感。該病一般發(fā)生于1 月齡以上的雞,2~7月齡為發(fā)病高峰。

    1 發(fā)病情況

    某肉雞場(chǎng)(存欄量約16 000 羽)90 日齡左右的雞陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病、死亡,1 個(gè)月內(nèi)發(fā)病約3 000羽,死亡約2 000羽。

    患雞精神沉郁、羽毛松亂、食欲不振、極度消瘦,最終衰竭而亡,有些病雞出現(xiàn)肢體麻痹,步態(tài)不穩(wěn)等癥狀。病雞經(jīng)抗菌藥物治療,無(wú)明顯效果。

    2 實(shí)驗(yàn)室檢查

    采集10份患雞腎臟、肝臟、脾臟、心臟病料應(yīng)用熒光PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。

    2.1 檢測(cè)材料

    2.1.1 樣品 剪取待檢組織病料約1 g 研磨后加入1.5 mL PBS 液繼續(xù)緩慢研磨成勻漿,取勻漿液轉(zhuǎn)移到2 mL 無(wú)DNA、RNA 酶污染的離心管中,8 000 r/min 離心5 min 后,取上清液備用。

    2.1.2 試劑 病毒RNA/DNA 提取試劑盒;禽馬立克氏病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒。

    2.2 檢測(cè)方法 參照病毒RNA/DNA提取試劑盒使用說(shuō)明書,提取組織病料中的馬立克氏病毒DNA。操作如下:在每個(gè)PCR 反應(yīng)管中先加入熒光PCR 反應(yīng)液15 μL,之后再分別向每個(gè)PCR反應(yīng)管中加入模板DNA 5 μL。在熒光PCR 儀上進(jìn)行50 ℃2 min,95 ℃10 min,循環(huán)95 ℃15 s,60℃60s,共40次,在每次循環(huán)第二步(60℃60s)收集熒光FAM信號(hào)的擴(kuò)增反應(yīng)。

    3 檢測(cè)結(jié)果

    10 份病料均出現(xiàn)馬立克氏病病毒核酸特異性熒光曲線,結(jié)果均為陽(yáng)性。

    4 小結(jié)

    馬立克氏病是家禽常見的免疫抑制性傳染病,MDV一旦感染,不論雞群免疫狀態(tài)如何,都會(huì)在雞群中快速傳播,并長(zhǎng)期存在,這也是MD難以控制的原因。

    及時(shí)、準(zhǔn)確、高效地對(duì)MD進(jìn)行診斷有重要的防控意義。MD 實(shí)驗(yàn)室診斷方法較多,包括病毒分離、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA、PCR 法、熒光PCR法、間接免疫熒光法等,其中熒光PCR 是定量檢測(cè)方法,具有靈敏性高、特異性強(qiáng)、速度快等優(yōu)點(diǎn)?!?/p>

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