食源性致病菌盲樣考核分析

陳紅艷，戴桂華，劉 婷

（中國鐵路濟南局集團有限公司 濟南鐵路疾病預防控制中心，山東 濟南250001）

鐵路疾病預防控制單位實驗室擔負著鐵路系統(tǒng)疾病預防控制的重要使命，為鐵路食源性致病菌疾病等衛(wèi)生應急事件處理提供技術支撐。中國國家鐵路集團有限公司每兩年對所屬疾病預防控制單位進行盲樣考核，通過實驗室室間質(zhì)控來提高檢測人員的檢測能力[1]。在此，對某年度考核情況進行總結(jié)分析。

1 材料與方法

安瓿瓶凍干粉1支(編號43)。瓶裝半成品培養(yǎng)基及成品顯色培養(yǎng)基均購于廣東某公司；氧化酶及API生化鑒定試劑盒購于法國某公司；診斷血清由寧波某公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)，所有培養(yǎng)基經(jīng)過質(zhì)量控制[2]合格使用。

采用的主要儀器有生化培養(yǎng)箱、顯微鏡。按照食品安全國家標準及其他微生物檢驗規(guī)程進行檢測。

2 檢測過程及結(jié)果

2.1 樣品處理

將凍干粉安瓿瓶外部用酒精棉球擦拭消毒，待表面晾干后打開瓶蓋，用1.5 ml無菌營養(yǎng)肉湯溶解(按樣品說明要求不做增菌直接分離)。

2.2 分離培養(yǎng)

用無菌取菌環(huán)取上述樣品勻液分別劃線接種血平板、沙門氏菌顯色平板、志賀氏菌顯色平板、XLD瓊脂平板、SS瓊脂平板、O157顯色平板、EMB平板、麥康凱平板、弧菌顯色平板、TCBS瓊脂平板、李斯特菌顯色平板、金黃色葡萄球菌顯色平板、Baird-Parker平板、蠟樣芽孢桿菌顯色平板、阪岐腸桿菌顯色平板、TSC瓊脂平板、CIN-1平板、改良Y平板。將CIN-1平板、改良Y平板置26℃培養(yǎng)箱；將TSC瓊脂平板放厭氧罐中置37℃培養(yǎng)箱，將蠟樣芽孢桿菌顯色平板置30℃培養(yǎng)箱；將剩余平板置37℃培養(yǎng)箱，均培養(yǎng)24 h。

2.3 檢測結(jié)果

2.3.1 分離培養(yǎng)及生長情況

觀察各平板菌落生長情況，菌落形態(tài)描述如表1所示。

表1 盲樣菌分離生長情況及菌落特征

2.3.2 初步生化及染色鏡檢情況

從EMB平板、TCBS平板上挑取可疑菌落分別接種三糖鐵瓊脂斜面(TSI)、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板、血平板和營養(yǎng)瓊脂平板，置36℃培養(yǎng)24 h。分別挑取營養(yǎng)瓊脂平板上的單個菌落作涂片、染色，觀察初步生化試驗，結(jié)果如表2所示。

2.3.3 氧化酶試驗

取潔凈的濾紙塊置于平皿內(nèi)，用接種環(huán)分別挑取A、B、C、D純培養(yǎng)菌涂于濾紙上，加1滴氧化酶試劑，A、B、D氧化酶試驗結(jié)果均為陰性，C氧化酶試驗結(jié)果陽性。

2.3.4 生化鑒定

分別挑取A、B、C、D的純培養(yǎng)菌落，根據(jù)API20E操作要求將菌懸液接種試劑條小管內(nèi)，37℃培養(yǎng)24 h。結(jié)果如表3所示。

表3 API20E生化鑒定結(jié)果

根據(jù)API板子生化結(jié)果編碼輸入API軟件系統(tǒng)得出A為大腸埃希氏菌，B為產(chǎn)氣腸桿菌，C為創(chuàng)傷弧菌，D為產(chǎn)氣腸桿菌。實驗過程中產(chǎn)生的所有醫(yī)療廢物均經(jīng)高壓滅菌后，按照《醫(yī)療廢棄物管理條例》要求處理。

2.3.5 結(jié)果報告

43號質(zhì)控樣品為腸桿菌科埃希氏菌屬大腸埃希氏菌、弧菌科弧菌屬創(chuàng)傷弧菌和腸桿菌科腸桿菌屬產(chǎn)氣腸桿菌的混合菌。

3 討論及分析

3.1 問題及原因分析

（1）發(fā)生漏檢情況。以前盲樣考核均為分裝的多支單株菌，本次考核為單支裝混合菌。分離培養(yǎng)前，只采用腦心浸液肉湯(BHI)復蘇菌株，而嗜鹽性弧菌在無氯化鈉的環(huán)境下不生長或微弱生長[3]；又因混合菌種中強勢菌生長優(yōu)于弱勢菌，可能導致弱勢菌無法生長或生長少而被忽略。本次考核中創(chuàng)傷弧菌少量生長，通過菌落形態(tài)辨認，多次生化鑒定后才未被漏檢。由此可見，在實驗室進行盲樣檢測時，應盡可能采用多種檢測方法或輔助設備以防漏檢[4]。此外，近年來實驗室人員更替，新檢驗人員經(jīng)驗不足，觀察培養(yǎng)菌落不仔細也可能發(fā)生漏檢情況。

表2 三糖鐵瓊脂斜面及染色鏡檢結(jié)果

（2）原始記錄及報告書寫的規(guī)范化有待提高。本次考核樣品檢測結(jié)果為3株混合菌：產(chǎn)氣腸桿菌、大腸埃希氏菌和創(chuàng)傷弧菌，符合考核內(nèi)容，但考核結(jié)果要求報告食源性致病菌。以往的考核菌株均為食品安全國家標準中的食源性致病菌，直接報告即可。本次考核中，對于大腸埃希氏菌的檢測，根據(jù)食品安全國家標準《食品微生物檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》(GB 4789.6—2016)[5]的要求，應進行PCR確認實驗，因?qū)嶒炇椅磁鋫銹CR儀器，無法按照國家標準進一步分型，因而無法將其判為致病菌。檢出的創(chuàng)傷弧菌雖然有報道稱是人類和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的重要病原菌[6]，但創(chuàng)傷弧菌沒有國家標準，并且不在《食源性疾病監(jiān)測報告工作規(guī)范(試行)》[7]名錄中，因此結(jié)果報告應為未檢出食源性致病菌。針對上述2種菌的報告，在原始記錄中并沒寫明原因及判斷依據(jù)，提醒檢驗人員在日常工作中應注意根據(jù)國家標準進行檢測，規(guī)范報告程序。

（3）針對商品化試劑，尤其更換廠家時應進行培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序。

3.2 建議

（1）加強人員培訓，提升檢測能力。近些年，隨著人員新老交替及檢驗人員調(diào)崗轉(zhuǎn)崗等，實驗室整體檢測能力有所下降。針對這種情況，除了以老帶新、日常練兵之外，建議定期舉辦專業(yè)技術培訓，培訓技術的同時促進疾病預防控制部門檢測人員之間的交流，對考核中發(fā)現(xiàn)的問題及時總結(jié)經(jīng)驗、分析原因，從而提升檢測能力。

（2）加強質(zhì)量控制是提升檢測能力的重要手段。建議以儀器設備的檢定校準、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制、試劑是否在有效期等為關鍵點，選擇性能穩(wěn)定的儀器、優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基及對新購買的培養(yǎng)基進行質(zhì)量控制等，在日常工作中真正做到遵循質(zhì)量體系要求，以保障檢測結(jié)果的準確性和可靠性。

（3）增加考核頻次。鐵路疾病預防控制部門參加地方盲樣考核較少，鐵路系統(tǒng)2年1次考核頻次不足，建議增加考核頻次，通過實驗室間比對和盲樣考核，及時發(fā)現(xiàn)問題并總結(jié)經(jīng)驗，進一步提高疾病預防部門實驗室檢測能力。

4 結(jié)束語

通過定期的盲樣考核可以促進實驗室及時發(fā)現(xiàn)檢驗過程、結(jié)果報告中存在的細節(jié)問題，以便在工作中進一步完善，可以提高實驗室人員在檢測過程中對儀器設備的檢定/校準、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制、試劑是否在有效期等關鍵點的認知，今后在日常工作中應加強人員、儀器設備、質(zhì)量控制等，以保證檢測結(jié)果的可靠性，提升實驗室檢測能力。