人表皮生長(zhǎng)因子受體在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平及與增殖潛能相關(guān)性分析

尚成生 劉濟(jì)源

1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科，遼寧沈陽(yáng) 110000；2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，遼寧沈陽(yáng) 110000

表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）在惡性腫瘤患者體內(nèi)多數(shù)呈現(xiàn)過(guò)度表達(dá)，被認(rèn)為是惡性腫瘤患者預(yù)后、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等的有效預(yù)測(cè)因素[1]。臨床治療中亦有多種藥物選擇性抑制EGFR，以阻斷EGFR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的[2]。在針對(duì)惡性腫瘤實(shí)施靶向藥物干預(yù)時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行腫瘤組織內(nèi)EGFR 基因型檢測(cè)，進(jìn)而優(yōu)化惡性腫瘤患者的生物治療效果[3]。降解細(xì)胞外基質(zhì)在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過(guò)程中均發(fā)揮一定作用[4]，是治療惡性腫瘤細(xì)胞侵襲性生長(zhǎng)的重要指標(biāo)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）為最主要的降解細(xì)胞外基質(zhì)之一[5]，與腦膠質(zhì)瘤之間的關(guān)系最為密切，其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖與侵襲性均存在密切相關(guān)性[6]。為更好地提高腦膠質(zhì)瘤患者的臨床治療效果，預(yù)測(cè)患者預(yù)后，本研究主要探討EGFR 在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，并分析其與腫瘤細(xì)胞增殖潛能之間的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月～2020年1月沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院和中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的160例腦膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象，所有入組者均通過(guò)手術(shù)治療及術(shù)后病理組織活檢確診與分期。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～50歲；初次手術(shù)；既往體檢及精神狀況正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他部位惡性腫瘤；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；精神疾患；嚴(yán)重感染；心、肺、肝、腎功能不全等。按照病理分期分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，各40例。Ⅰ期中，男28例，女12例；年齡18～50歲，平均（38.6±2.5）歲；病程1個(gè)月～3年，平均（1.2±0.1）年。Ⅱ期中，男27例，女13例；年齡18～50歲，平均（38.5±2.6）歲；病程1個(gè)月～3年，平均（1.3±0.1）年。Ⅲ期中，男26例，女14例；年齡18～50歲，平均（38.7±2.4）歲；病程1個(gè)月～3年，平均（1.3±0.1）年。Ⅳ期中，男29例，女11例；年齡18～50歲，平均（38.7±2.5）歲；病程1個(gè)月～3年，平均（1.1±0.1）年。各期的性別、年齡及病程等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

1.2 方法

通過(guò)采用Primer 5 軟件進(jìn)行EGFR 基因相關(guān)外顯子性PCR 引物設(shè)計(jì)，為5′-TCCATAGCCGGGAACGTCGA-3′，下游引物為5′-ACAAGCTGTGCCAGACGTTG-3′，通過(guò)擴(kuò)增、緩沖、預(yù)變性、變性及退熱等免疫組化法進(jìn)行測(cè)定，抗體為染色鼠抗人EGFR 多克隆抗體，試劑盒由北京中山生物公司提供；MMP-2和MMP-9則通過(guò)平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同分期患者的EGFR表達(dá)陽(yáng)性情況及MMP-2、MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度，分析EGFR表達(dá)水平與MMP-2和MMP-9表達(dá)熒光強(qiáng)度的相關(guān)性。

1.4 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)果判斷：EGFR 陽(yáng)性染色以細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)染色為標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)觀察棕色或褐色顆粒狀著色情況進(jìn)行EGFR 染色陽(yáng)性率的判斷；MMP-2和MMP-9 檢測(cè)均采用化學(xué)熒光法，表達(dá)水平通過(guò)平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)估。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較使用方差分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同分期患者EGFR表達(dá)陽(yáng)性情況的比較

Ⅰ期患者的EGFR表達(dá)陽(yáng)性率為10.0%（4/40），低于Ⅱ期的47.5%（19/40）、Ⅲ期的55.0%（22/40）及Ⅳ期的60.0%（24/40），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期的EGFR表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.277，P=0.528）。

2.2 不同分期患者M(jìn)MP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度的比較

Ⅳ期患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P＜0.05），Ⅲ期患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度高于Ⅰ、Ⅱ期（P＜0.05），Ⅱ期患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度高于Ⅰ期（P＜0.05）（表1）。

表1 不同分期患者M(jìn)MP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度的比較（U，±s）

表1 不同分期患者M(jìn)MP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度的比較（U，±s）

與Ⅰ期比較，*P＜0.05；與Ⅱ期比較，#P＜0.05；與Ⅲ期比較，&P＜0.05

分期例數(shù) MMP-2 MMP-9Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F值P值40 40 40 40 15.6±1.5 18.9±1.8*23.8±2.3*#28.9±2.6*#&15.928 0.000 28.9±2.6 30.5±3.3*33.8±3.8*#41.5±4.2*#&26.362 0.000

2.3 EGFR表達(dá)水平與MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度的相關(guān)性分析

EGFR表達(dá)水平與MMP-2 表達(dá)平均熒光強(qiáng)度成正相關(guān)（r=0.6398，P=0.000），與MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度亦成正相關(guān)（r=0.7105，P=0.000）。

3 討論

惡性無(wú)序增殖及侵襲性生長(zhǎng)為腦膠質(zhì)瘤的主要表現(xiàn)，被認(rèn)為是導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤患者治療失敗及發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥的主要原因[7]，故針對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者需將其顯著的分子遺傳學(xué)特征進(jìn)行總結(jié)分析，明確其與患者預(yù)后的相關(guān)性，從而更有效地指導(dǎo)臨床治療[8]。膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)EGFR 的擴(kuò)增及過(guò)表達(dá)與其惡性程度及臨床分期存在密切相關(guān)性[9]。另外，惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲性亦與基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）之間存在一定相關(guān)性[10]。

本研究對(duì)不同分期患者的EGFR表達(dá)陽(yáng)性情況進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，Ⅰ期患者的EGFR表達(dá)陽(yáng)性者比例低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期（P＜0.05），提示腦膠質(zhì)瘤患者分期越低，其EGFR表達(dá)陽(yáng)性率越低，甚至可出現(xiàn)陰性表達(dá)。另外，Ⅲ期患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P＜0.05），Ⅱ期患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度高于Ⅰ期患者（P＜0.05），提示腦膠質(zhì)瘤患者分期越高，體內(nèi)MMP-2和MMP-9表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度越大。最后分析發(fā)現(xiàn)，EGFR表達(dá)水平與MMP-2 及MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度成正相關(guān)（P＜0.05）。

針對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者實(shí)施生物治療前EGFR 基因檢測(cè)是必做項(xiàng)目，其對(duì)擬定靶向藥物治療方案，預(yù)測(cè)靶向藥物治療效果具有較理想的指導(dǎo)價(jià)值[11-12]。EGFR在體內(nèi)能產(chǎn)生同源二聚體，進(jìn)而導(dǎo)致酪氨酸激酶磷酸化，并通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)，影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞核內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)及功能，導(dǎo)致細(xì)胞的生長(zhǎng)失控，出現(xiàn)惡性增殖表現(xiàn)，被認(rèn)為是腦膠質(zhì)瘤病變?cè)鲋衬芰Φ南嚓P(guān)指標(biāo)[13-15]，尤其是對(duì)于腦膠質(zhì)瘤患者，提高結(jié)合細(xì)胞黏附分子從而促進(jìn)惡性膠質(zhì)細(xì)胞向周?chē)ＤX組織擴(kuò)散，進(jìn)而導(dǎo)致惡性程度增高、遠(yuǎn)處侵襲等表現(xiàn)[16]。同時(shí)神經(jīng)細(xì)胞在MMP-2 及MMP-9 等作用下，將腦膠質(zhì)細(xì)胞的基底膜裂解為孔隙狀結(jié)構(gòu)，改變細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性，導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)序生長(zhǎng)，并向正常腦組織侵犯，其表達(dá)水平隨腦膠質(zhì)瘤惡性程度的升高而增加，已被認(rèn)為是腦膠質(zhì)瘤病變侵襲性的重要指標(biāo)[17-18]。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者隨著病變分期的增高，EGFR表達(dá)陽(yáng)性率明顯增高，MMP-2 及MMP-9 平均熒光強(qiáng)度顯著增高，且EGFR表達(dá)水平與MMP-2和MMP-9表達(dá)平均熒光強(qiáng)度均成正相關(guān)，兩者均與腦膠質(zhì)瘤疾病增殖潛能存在密切相關(guān)性。