腎氣丸藥理作用與機(jī)制的相關(guān)研究進(jìn)展

郭煜暉 張長(zhǎng)城 胡璇 閆俊 雷莉 李艷麗

(1三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 宜昌 443002；2宜昌市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科)

腎氣丸始載于《金匱要略》，為溫補(bǔ)腎陽(yáng)的代表方，全方由肉桂、附子(制)、熟地黃、山茱萸(制)、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉八味中草藥組成，具有溫助腎氣，補(bǔ)腎助陽(yáng)的功效?，F(xiàn)代藥理表明，腎氣丸可改善腎藏象系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫、抑制炎癥等功效，具有較好的延緩衰老的功效。

1 腎氣丸對(duì)腎藏象系統(tǒng)的改善作用

《素問(wèn)·六節(jié)藏象論》言：“腎者，主蟄，封藏之本，精之處也?！蹦I藏精，主水，納氣。腎主身之骨髓，腎氣通于耳。腎氣丸配合行為干預(yù)可顯著提高患者精液質(zhì)量，改善其性激素水平，其機(jī)制可能與腎氣丸抑制睪丸轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1表達(dá)、增加細(xì)胞色素(CY)-P19表達(dá)〔1〕、增強(qiáng)睪酮合成通路中關(guān)鍵酶3β-羥類固醇脫氫酶(HSD)的活性表達(dá)〔2〕，使雄激素合成增多、精子的生成得到改善等有關(guān)。腎氣丸可提高血和組織谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和超氧化歧化酶(SOD)水平，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力〔3〕，還可聯(lián)合胰激肽原酶，降低生精環(huán)境中的氧化應(yīng)激損傷，顯著改善精子活動(dòng)率。此外，有研究發(fā)現(xiàn)腎氣丸也可通過(guò)增加精子膜流動(dòng)性來(lái)提高精子活力〔4〕，還可調(diào)控生精細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白 Bax和Bcl-2〔5〕，抑制生精細(xì)胞凋亡，改善生精功能。研究表明，正常的貯尿、排尿活動(dòng)與膀胱逼尿肌β3-腎上腺素能受體(AR)、膽堿能神經(jīng)受體(M3R)平衡有關(guān)，腎氣丸可降低自然衰老大鼠膀胱逼尿肌β3-AR水平，恢復(fù)β3-AR與M3R的平衡狀態(tài)〔6〕，用于兒童遺尿、成人夜尿及女性膀胱過(guò)度活動(dòng)癥等排尿功能失常，均有顯著療效。腎氣丸可助腎納氣，進(jìn)而改善肺的呼吸功能。以加味腎氣丸治療哮喘模型大鼠，其喘息癥狀減輕、支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞(EOS) 計(jì)數(shù)和肺組織中胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)的含量均降低，病理改變顯著減輕〔7〕。臨床上，腎氣丸不僅可有效緩解慢性阻塞性肺疾病(COPD)及其他呼吸系統(tǒng)疾病患者的臨床癥狀，起到良好的治療或輔助治療作用，對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的病情進(jìn)展也有較好的控制作用。腎虛是骨質(zhì)疏松發(fā)病的一個(gè)重要因素。腎氣丸聯(lián)用西藥治療骨質(zhì)疏松，癥狀減輕，患者骨密度值明顯增加〔8〕。臨床上常用腎氣丸配合手法治療腰椎間盤突出癥，療效顯著〔9〕。此外，腎氣丸聯(lián)合關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉治療肝腎虧虛型膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎，療效優(yōu)于單純關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉治療〔10〕?，F(xiàn)代研究證實(shí)，腎氣丸可減少耳蝸組織線粒體DNA 4 834 bp缺失率，并減少耳蝸毛細(xì)胞線粒體凋亡途徑中的細(xì)胞色素C釋放，從而減少耳蝸組織細(xì)胞凋亡〔11〕，使耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞鈣離子通道蛋白Cav1.2、Cav1.3表達(dá)增加，從而影響 Ca2+運(yùn)行，以改善聽(tīng)力障礙〔12〕。腎氣丸通過(guò)多環(huán)節(jié)多途徑的調(diào)節(jié)，共同抑制了腎系統(tǒng)損傷的發(fā)展進(jìn)程，進(jìn)而改善腎藏象系統(tǒng)的功能。

2 腎氣丸調(diào)節(jié)免疫及抗炎作用

研究表明腎氣丸具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用，其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制為抑制免疫器官萎縮，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞及免疫球蛋白水平，從而保證機(jī)體的正常免疫功能。腎氣丸可降低多種炎癥因子水平，減輕炎性物質(zhì)浸潤(rùn)程度，對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫均有調(diào)節(jié)作用。此外，腎氣丸對(duì)自身免疫系統(tǒng)疾病也能發(fā)揮一定治療作用。腎氣丸可以下調(diào)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-4及白細(xì)胞介素(IL)-4水平，減少蛋白尿，降低 SLE 病情活動(dòng)度，改善臨床癥狀，減少西藥治療的不良反應(yīng)〔13〕。腎氣丸還能升高隨增齡而降低的 CD4+/CD8+、IgM 水平，調(diào)節(jié)隨增齡出現(xiàn)的免疫球蛋白的改變，增強(qiáng)陽(yáng)虛體質(zhì)老年人的免疫功能，改善其生活質(zhì)量〔14〕。在腎陽(yáng)虛狀態(tài)下，肺及氣道組織糖皮質(zhì)激素受體(GR)表達(dá)下調(diào)，GR為肺組織炎癥的總開(kāi)關(guān)，腎氣丸可通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-靶腺軸，上調(diào)GR及其mRNA的表達(dá)，從而減輕氣道炎癥反應(yīng)〔15〕。腎氣丸還降低肺組織中多種炎性細(xì)胞因子，抑制血小板衍生長(zhǎng)因子(PDGF)-BB的過(guò)度表達(dá)〔16〕，減輕平陽(yáng)霉素所致的大鼠肺泡炎癥及纖維化程度。另可通過(guò)調(diào)節(jié)基因Bcl-2/fas 表達(dá),抑制腎組織細(xì)胞凋亡〔17〕；抑制MCP-1、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(SMA)表達(dá)及轉(zhuǎn)錄活化因子(STAT)3磷酸化〔18〕，從而減少間質(zhì)內(nèi)膠原沉積，有效抑制腎間質(zhì)纖維化。此外，可通過(guò)抑制Notch2/hes1、TGF-β/Smads/整合素連接激酶(ILK)信號(hào)通路，上調(diào) SnoN 蛋白的表達(dá)，減輕腎臟損傷并促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移分化〔19〕。

3 腎氣丸延緩衰老的作用機(jī)制

衰老是人類必然經(jīng)歷的一種生命現(xiàn)象。人體衰老從根本上可以說(shuō)是細(xì)胞的衰老。細(xì)胞衰老是細(xì)胞固有功能的喪失，如細(xì)胞分裂復(fù)制、細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間的運(yùn)輸及通信功能喪失，最后導(dǎo)致細(xì)胞死亡。近期相關(guān)研究顯示，機(jī)體衰老與細(xì)胞衰老及衰老相關(guān)分泌表型直接相關(guān)。衰老細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞通過(guò)釋放衰老相關(guān)的分泌表型(SASP)相關(guān)因子調(diào)控微環(huán)境。SASP通過(guò)自分泌和旁分泌途徑影響和調(diào)控鄰近的未衰老細(xì)胞，促進(jìn)衰老進(jìn)程甚至造成疾病的發(fā)生〔20,21〕。衰老可能通過(guò)釋放某些SASP相關(guān)因子，影響鄰近未衰老細(xì)胞，加劇衰老相關(guān)組織病理改變。故SASP是細(xì)胞衰老的一個(gè)重要特征。SASP有自己獨(dú)立的衰老調(diào)控通路，并不依賴于p53和p16INK4a/Rb腫瘤抑制途徑發(fā)揮作用。SASP很大程度上是由核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB啟動(dòng)，NF-κB在調(diào)控SASP上有至關(guān)重要的作用〔22〕。研究顯示，在鼠和人衰老過(guò)程中，結(jié)合蛋白(GATA)4是啟動(dòng)和維持NF-κB活性的調(diào)節(jié)因子，可促進(jìn)細(xì)胞衰老和炎癥反應(yīng)。GATA4作用于NF-κB的上游，影響SASP，調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老〔23,24〕，在衰老信號(hào)調(diào)控機(jī)制中，PI家族因子ATM和ATR解除對(duì)p53和p16INK4a通路的抑制，使細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，且阻止p62依賴的GATA4自噬退化、從而導(dǎo)致 NF-κB 激活和SASP的增多〔23〕。見(jiàn)圖1?，F(xiàn)代藥理研究亦證實(shí)〔14〕，腎氣丸可明顯改善體內(nèi)自由基的損傷、調(diào)節(jié)免疫功能、抑制炎癥等藥理作用。研究顯示〔22〕，機(jī)體衰老與細(xì)胞衰老及衰老相關(guān)分泌表型直接相關(guān)，腎氣丸具有調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老與抑制炎性反應(yīng)的功效，且具有良好的延緩衰老的功效。腎氣丸延緩衰老可能有抑制細(xì)胞衰老與衰老相關(guān)分泌表型的作用。

PRC2：起始復(fù)合體2；MDM2：雙微體基因2；CDK4/6：細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4和6

研究證實(shí)〔25〕，腎氣丸可改善腸道組織結(jié)構(gòu)，延緩腸道功能衰退。腎氣丸可使衰老模型大鼠小腸絨毛長(zhǎng)度加長(zhǎng)、絨毛寬度增寬、隱窩深度變淺、絨毛/隱窩值(V/C值)顯著升高；腎氣丸可明顯提高衰老大鼠小腸黏膜內(nèi)CD4+T細(xì)胞的數(shù)量，其機(jī)制與提高大鼠腸黏膜局部免疫功能，促進(jìn)小腸黏膜修復(fù)相關(guān)。腎氣丸可增加衰老大鼠十二指腸消化吸收相關(guān)酶堿性磷酸酶(ALP)、乳糖酶基因(LCT)、寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)體(Pept)1 基因表達(dá)，促進(jìn)小腸消化吸收功能。腎氣丸可使衰老大鼠小腸干細(xì)胞數(shù)量增加，上調(diào)小腸Bmi1、Lgr5、Olfm4、β-連環(huán)蛋白(catenin)的表達(dá)量〔26〕。腎氣丸可通過(guò)增強(qiáng)胃排空及小腸推進(jìn)功能，增強(qiáng)胃竇肌間神經(jīng)叢P物質(zhì)的表達(dá)〔27〕。因此，腎氣丸可通過(guò)改善小腸隱窩、絨毛結(jié)構(gòu)，增加消化吸收相關(guān)酶類的表達(dá)，進(jìn)而改善小腸功能。

研究顯示〔28〕，自然衰老過(guò)程中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路變化與衰老過(guò)程中腸道干細(xì)胞增殖分化功能減弱密切相關(guān)。在小腸中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路維持小腸干細(xì)胞的自我更新和增殖。Wnt/β-catenin信號(hào)通路由Wnt、受體卷曲蛋白(Fz)、共受體低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP)、β-catenin、β-catenin降解復(fù)合物及轉(zhuǎn)錄因子T 細(xì)胞因子(TCF)等成分構(gòu)成。 老齡小鼠小腸 FOXO1、β-catenin mRNA 和 蛋 白 表 達(dá) 降 低，小腸干細(xì)胞的增殖功能減弱。條件性消除腸上皮Wnt分泌、β-catenin基因，可減弱隱窩擴(kuò)張和腸道干細(xì)胞(ISCs)功能。在小腸隱窩-絨毛軸中,Wnt/β-catenin信號(hào)存在梯度遞減性，信號(hào)強(qiáng)度高的隱窩部位與小腸干細(xì)胞區(qū)域及增殖細(xì)胞所在位置對(duì)應(yīng)。Wnt/β-catenin信號(hào)通路表達(dá)與干細(xì)胞微環(huán)境直接相關(guān)。研究表明〔29〕，衰老狀態(tài)下Wnt/β-catenin信號(hào)通路的改變是導(dǎo)致ISCs衰老的重要原因。衰老改變腸道的體系結(jié)構(gòu)和ISC功能，ISC Wnt 信號(hào)減弱導(dǎo)致ISC增殖化能力衰減。典型的Wnt信號(hào)表達(dá)在ISCs本身及干細(xì)胞微環(huán)境(潘氏細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞)中都有減少，體外增加外源 Wnts，可以提高衰老的ISCs的再生能力。見(jiàn)圖2。腎氣丸可能通過(guò)重新激活干細(xì)胞及干細(xì)胞微環(huán)境中Wnt/β-catenin信號(hào)，進(jìn)而增加腸道干細(xì)胞的增殖能力，對(duì)衰老所致小腸功能衰退具有良好的延緩作用。

圖2 Wnt信號(hào)調(diào)控機(jī)制

綜上，腎主元?dú)?，為立命之根。元?dú)饩哂屑ぐl(fā)、推動(dòng)臟腑組織器官功能活動(dòng)的作用，是維系生命活動(dòng)的原動(dòng)力。腎氣丸作為溫補(bǔ)腎陽(yáng)的經(jīng)典代表方，蘊(yùn)含陰陽(yáng)并補(bǔ)、陰中求陽(yáng)的組方理念，現(xiàn)代藥理研究亦證實(shí)，腎氣丸具有調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老與抑制炎性反應(yīng)及良好的抗氧化作用，能有效改善老年腎虛患者臨床癥狀，緩解老年相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展，提示腎氣丸延緩衰老可能有抑制細(xì)胞衰老與衰老相關(guān)分泌表型的作用，腎氣丸重新激活干細(xì)胞及干細(xì)胞微環(huán)境中Wnt/β-catenin信號(hào)，進(jìn)而增加腸道干細(xì)胞的增殖能力，對(duì)衰老所致小腸功能衰退具有良好的延緩作用。