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    子癇前期患者胎盤組織中sFlt-1、PLGF及IGF-1的表達和臨床意義*

    2021-01-05 10:54:52文芳黃秀桃劉耀文李健偉雷后康周金年
    貴州醫(yī)科大學學報 2020年12期
    關鍵詞:組織化學內皮細胞胎盤

    文芳,黃秀桃,劉耀文,李健偉,雷后康,周金年

    (貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 婦產科,貴州 貴陽 550004)

    子癇前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特有疾病,一般在妊娠20周后患者可出現(xiàn)血壓升高、蛋白尿、水腫,并伴頭痛、眼花、胸悶、心慌、氣促、惡心、嘔吐和上腹不適等臨床表現(xiàn),嚴重影響了母嬰健康,亦是導致孕產婦和圍產兒死亡率升高的原因之一[1-2]。目前,臨床對PE的病因及發(fā)病機制均尚未完全闡明,研究發(fā)現(xiàn)當胎盤從母體娩出后,PE所致的相關臨床癥狀就減輕,甚至消失[3],因此,胎盤異常在PE發(fā)病機制中的起著非常關鍵的作用??扇苄匝軆绕どL因子受體-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor 1,sFlt-1)認為是抗血管生成因子,在PE孕婦的血循環(huán)中顯著升高,可拮抗血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和胎盤生長因子(placental growth factor,PLGF)等各種促血管生成的作用,并造成廣泛的血管內皮損傷,是導致患者出現(xiàn)高血壓、蛋白尿及水腫的主要抗血管形成因子,同時參與了PE的發(fā)生發(fā)展[4-5]。目前的研究表明,sFlt-1可以作為PE的預測指標[6]。PLGF是在妊娠期起重要作用的蛋白,研究認為PLGF可以單獨或與其他指標聯(lián)合檢查可用于預測早孕期PE的發(fā)生[7]。胰島素樣生長因子(insulin growth factor-1,IGF-1)是一種胎盤蛋白,在胚胎和胎盤的發(fā)育方面有重要作用,PE孕婦胎盤中IGF-1 較正常孕婦降低[8]。相關研究表明,在PE患者胎盤組織中PLGF和IGF-1的表達均低,并且隨患者病情加重有下降的趨勢,胎盤組織中兩者的表達呈正相關[9],但尚未見sFlt-1、PLGF及IGF-1同時用于PE孕婦的胎盤組織相關研究。故本研究通過分析PE孕婦胎盤組織中sFlt-1、PLGF及IGF-1的表達水平和臨床意義,探討與PE的關系,為臨床早期診斷該疾病提供了依據(jù)。

    1 對象與方法

    1.1 對象、主要試劑和儀器

    1.1.1對象 收集2017年7月1日—2018年8月31日本院產科住院分娩的重度PE孕婦25例作為重度PE組,輕度PE孕婦15例作為輕度PE組,PE的診斷標準參照文獻[10],要求此次妊娠為單胎、剖宮產分娩、且凝血功能正常。排除標準:妊娠合并糖尿病、腎臟病、心臟病、高血壓等慢性疾病病史,既往有不明原因的習慣性流產、死胎、死產、胎兒畸形等不良孕產史,長期服用藥物史及吸煙史等,本次懷孕合并急、慢性感染性疾病及證實胎兒有畸形。同時取正常晚期孕婦30例作為對照組。所有研究對象為自愿參加本研究,且簽署知情同意書。

    1.1.2主要試劑和儀器 一抗sFlt-1、PLGF及IGF-1抗體(美國Abcam公司),PBS緩沖液(pH 7.3)、枸櫞酸修復液(pH 6.0)、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline,PBS)、乙二胺四乙酸二鈉鹽(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)及顯色試劑盒(北京中杉金橋公司)。

    1.2 方法

    1.2.1胎盤標本制作 所有孕婦剖宮產術中胎盤娩出后,肉眼檢查胎盤,若胎盤表面無明顯病理改變,避開胎盤母體面的出血區(qū)與鈣化區(qū),取約2.0 cm×2.0 cm×2.0 cm全層胎盤組織,予0.9%氯化鈉沖洗掉表面血液,10%的福爾馬林固定24 h,經脫水、石蠟包埋,用于免疫組織化學檢測。

    1.2.2免疫組織化學檢測及結果判斷 采用免疫組織化學Envsion二步法檢測胎盤組織中sFlt-1、PLGF及IGF-1的表達,其中陰性對照用PBS代替一抗。制備切片厚約4 μm,經蘇木精-伊紅染色法( hematoxylin-eosin staining,HE)染色判斷切片的質量。免疫組化步驟如下:65 ℃恒溫烤箱烤片1 h,二甲苯脫蠟30 min;梯度酒精水化至水,采用EDTA抗原修復液高溫高壓修復;分別加一抗sFlt-1、PLGF及IGF-1抗體(稀釋比例分別為為1 ∶200、1 ∶180和1 ∶150),置于濕盒中4 ℃冰箱過夜;次日,加二抗充分反應,DAB顯色。復染細胞核用蘇木素30 s,脫水于梯度酒精上進行;用二甲苯透明,中性樹膠封片,染色方法按試劑盒說明進行。各組孕婦胎盤組織中sFlt-1、PLGF及IGF-1的免疫組織化學結果判定如下[11],隨機選取高倍視野5個,聯(lián)合染色的強度和陽性細胞百分比進行計分,其中染色強度不著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分及棕褐色為3分,陽性細胞百分比小于5%為0分、6%~25%為1分、26%~50%為2分、陽性細胞百分比>50%為3分,然后取2者得分乘積為最終分數(shù),規(guī)定0分為陰性(-),1~2分為“+”,3~4分為“++”,5~6分為“+++”。免疫組織化學結果由2名高年資病理醫(yī)師采用雙盲法獨立檢測,取平均值,“+”、“++”及“+++”視為陽性表達。

    1.3 統(tǒng)計學分析

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用率表示,分類資料采用χ2檢驗和Kruskal-Wallis檢驗進行分析,以P<0.05有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 sFlt-1、PLGF及IGF-1表達

    sFlt-1、PLGF及IGF-1在胎盤滋養(yǎng)層細胞中主要表達于細胞質,染色呈淺黃色、棕黃色或者棕褐色樣顆粒染色(圖1)。輕度及重度PE組孕婦胎盤組織sFlt-1陽性表達高于對照組,且隨病情加重而增加(P<0.05);輕度及重度PE孕婦胎盤組織中PLGF、IGF-1的陽性表達低于對照組,且輕度PE組孕婦陽性表達低于重度PE組(P<0.05,表1)。

    圖1 3組孕婦胎盤組織sFlt-1、PLGF及IGF-1的表達(Envision,×200)Fig.1 The expression of sFlt-1, PLGF, and IGF-1 in placental tissues of 3 groups of pregnant women(Envision,×200)

    表1 各組孕婦胎盤組織sFlt-1、PLGF及IGF-1的陽性表達[n(%)]Tab.1 Comparison of the positive expression rate of sFlt-1, PLGF, and IGF-1 in placental tissues of 3 groups of pregnant women[n(%)]

    2.2 sFlt-1、PLGF和IGF-1表達

    輕度及重度PE組孕婦胎盤組織sFlt-1表達強度等級均高于對照組(P<0.05),但輕度與重度PE組孕婦比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);輕度及重度PE組孕婦胎盤組織PLGF和IGF-1的表達強度等級均低于對照組(P<0.05),且輕度組兩項指標的表達強度低于重度組孕婦(P<0.05,表2)。

    表2 各組孕婦胎盤中sFlt-1、PLGF和IGF-1表達[n(%)]Tab.2 Comparison of the intensity of sFlt-1, PLGF and IGF-1 in placental tissues of 3 groups of pregnant women[n(%)]

    3 討論

    由于PE可能會導致母兒的不良妊娠結局,故近年來PE成為妊娠期高血壓疾病的研究重點[12],相關研究認為PE的病因起源于胎盤,因早期各種因素引起胎盤缺血缺氧,胎盤缺血時分泌各類胎盤因子,廣泛作用于母體血管內皮細胞,使母體肝臟、腎臟等全身多器官功能損傷,出現(xiàn)不良妊娠結局[13-14]。sFlt-1具有酪氨酸激酶活性,能與內皮細胞表面受體VEGFR-1和VEGFR-2結合形成異源二聚體,可以通過抑制VEGF和PLGF的生物學活性,致血管生成障礙和血管內皮細胞損傷,從而抑制了血管生成[15]。大量研究表明sFlt-1可直接參與血管形成和胎盤絨毛浸潤[16-18]。有研究發(fā)現(xiàn)產后48 h內sFlt-1水平明顯下降,提示過量的sFlt-1可能來源于胎盤[19]。本研究檢測胎盤中sFlt-1的表達情況,結果顯示,PE組孕婦胎盤組織sFlt-1陽性表達率比正常妊娠組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),跟既往相關報道一致,說明sFlt-1在PE患者胎盤中的高表達在PE的發(fā)病過程中起著重要的作用。但是本研究中輕度PE組與重度PE組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),與既往研究報道不一致[20-21]。分析導致這一結果的原因,考慮為本次研究樣本量較小。根據(jù)文獻報道,sFlt-1參與PE的可能機制是sFlt-1損傷血管內皮細胞后子宮內膜細胞及其它血管收縮,胎盤組織缺血缺氧,大量的活性細胞因子得到合成和釋放,最終發(fā)生妊娠期高血壓疾病,從而加重PE患者的病情[22]。

    PLGF對滋養(yǎng)層細胞和VEGF功能具有調節(jié)作用[23]。PLGF與酪氨酸酶受體結合后,可促進早孕時滋養(yǎng)細胞的增殖,增加血管通透性,促進新生血管生成[24]。本研究顯示病例組胎盤組織中PLGF表達顯著低于對照組,提示PLGF在PE患者胎盤組織中表達量很低。推測導致這一結果的原因可能為sFlt-1與PLGF結合后刺激血管生成,從而出現(xiàn)了PE的相關臨床表現(xiàn)。

    IGF-1可促使血管內皮細胞釋放凝酶原激活物,從而改善胎盤功能[25],刺激滋養(yǎng)細胞侵入、遷移以及舒張血管,參與血壓調節(jié)[26]。相對正常孕婦而言,PE孕婦胎盤中IGF-1的表達降低,這些改變與PE這種疾病密切相關[27]。本研究結果顯示PE組孕婦胎盤組織中IGF-1表達較對照組明顯下降,重度PE組較輕度PE組孕婦胎盤組織中IGF-1表達下降(P<0.05),說明IGF-1與PE病情的嚴重程度有關。推測PE患者IGF-1在胎盤組織中表達下降的可能機制為PE時患者全身小動脈痙攣、胎盤缺血缺氧、供血不足,出現(xiàn)胎盤功能障礙,使得胎盤分泌的生長激素減少,因為妊娠期間IGF-1受血液循環(huán)中胎盤生長激素的調節(jié),所以IGF-1的合成與分泌,導致IGF-1表達降低。

    綜上所述,胎盤組織中sFlt-1、PlGF及IGF-1的表達與PE發(fā)生發(fā)展過程有直接關系,研究sFlt-1、PlGF、IGF-1在PE發(fā)病中的作用,可為早期診斷和治療PE提供思路。

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